石榴皮活性成分治療痤瘡作用機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測及實(shí)驗(yàn)研究＊

魏 露，吳淑輝，張 曦，吳欣桐，劉 娟，朱明芳

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 長沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院皮膚科 長沙 410005)

痤瘡是一種常見的累及毛囊皮脂腺單位的慢性炎癥性皮膚病，青少年發(fā)病率高達(dá)79%-95%，且發(fā)病人群有向中年擴(kuò)展的趨勢[1]。痤瘡病因復(fù)雜，皮脂穩(wěn)態(tài)失衡、炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、激素分泌等參與痤瘡的進(jìn)程[2]。痤瘡不僅危害皮膚健康，對(duì)患者的社交、心理健康也造成了極大的影響。抗生素類、維A酸類等為痤瘡治療的常規(guī)藥物，它們在一定程度上可緩解痤瘡癥狀，但抗生素導(dǎo)致耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重；維A酸有皮膚黏膜刺激和致畸性等副作用。鑒于目前痤瘡治療效果不理想、難以根治的現(xiàn)狀，開發(fā)新型抗痤瘡藥物迫在眉睫。

痤瘡屬于中醫(yī)“肺風(fēng)粉刺”范疇，《內(nèi)經(jīng)》中載“肺者……其華在毛，其充在皮”。因此歷代醫(yī)家常基于“以皮治皮”理論治療皮膚病。“以皮治皮”是根據(jù)中醫(yī)象思維，在辨證論治的基礎(chǔ)上，運(yùn)用植物藥材的皮部或動(dòng)物的皮膚入藥，治療某些皮膚病的方法。石榴皮(Pomegranate peel)首載于《雷公炮炙論》，系石榴科植物石榴的干燥果皮，味酸、澀，性溫，有小毒，歸大腸經(jīng)，有澀腸止瀉、止血、驅(qū)蟲等功效，其在皮膚病的治療中應(yīng)用廣泛[3]。《醫(yī)學(xué)正宗》曰“石榴皮治腳肚生瘡，初起如粟，搔之漸開，黃水浸淫，癢痛潰爛，遂致繞脛而成痼疾：酸榴皮煎湯冷定，日日掃之，取愈乃止”。《得配本草》云“石榴皮，酸、澀、溫……除目流冷淚，洗腳瘡濕爛”。同時(shí)，其在銀屑病[4]、扁平疣[5]的治療中也有應(yīng)用。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，石榴皮具有抑菌[6-7]、抗炎[8]、抗氧化、調(diào)節(jié)腸道菌群[9]等藥理作用，但其作用機(jī)制尚不明確。同時(shí)，石榴提取物可通過抑制痤瘡丙酸桿菌(Cutibacterium acnes，C.acnes)及金黃色葡萄球菌生長、降低脂肪酶活性、抗角質(zhì)細(xì)胞增殖和抗炎發(fā)揮治療痤瘡的作用[10]。課題組基于“以皮治皮”理論，利用皮類中藥石榴皮治療痤瘡，療效顯著，并申請了以石榴皮為主要組成的中藥面膜專利—一種中草藥面膜及其制備方法(申請?zhí)枺篊N201510648316.6)，獲得了良好的社會(huì)效益[11,12]。

如何理解中藥方劑配伍形成的復(fù)雜化學(xué)體系與病證復(fù)雜生物系統(tǒng)的相互作用是當(dāng)前中藥研究面臨的重要挑戰(zhàn)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)通過將方藥、病證映射于生物分子網(wǎng)絡(luò)，建立方藥與病證的關(guān)聯(lián)機(jī)制，使得方劑現(xiàn)代研究由描述轉(zhuǎn)為預(yù)測，充分發(fā)揮了方劑配伍的特色與優(yōu)勢，為躋身藥物的前沿研究創(chuàng)造了有利條件[13-15]。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法篩選石榴皮的活性成分、作用機(jī)制，并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證上述預(yù)測結(jié)果，為闡明石榴皮治療痤瘡的作用靶點(diǎn)及機(jī)制提供參考，同時(shí)為“以皮治皮”理論在中醫(yī)皮膚科的應(yīng)用提供現(xiàn)代理論依據(jù)。

1 材料及方法

1.1 石榴皮活性成分篩選

通過TCMSP數(shù)據(jù)庫(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)、SymMap數(shù)據(jù)庫(http://www.symmap.org/)篩選中藥石榴皮的所有活性成分，以口服生物利用度(OB)≥30%，中藥類藥性(DL)≥0.18[16]作為篩選條件。利用SymMap數(shù)據(jù)庫獲得中藥的活性成分后，將OB≥30%的活性成分依次導(dǎo)入TCMSP數(shù)據(jù)庫，若DL≥0.18則將其納入結(jié)果。

1.2 藥物作用靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)預(yù)測

采用Perl軟件對(duì)相關(guān)活性成分作用靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測。利用Perl軟件(https://www.perl.org/get.html)和UniProt數(shù)據(jù)庫(http://www.uniprot.org/)查找靶點(diǎn)“蛋白名”對(duì)應(yīng)的“基因名”，并對(duì)重復(fù)作用靶點(diǎn)及無對(duì)應(yīng)基因名的靶點(diǎn)進(jìn)行整合。以“acne”“acne vulgaris”和“common acne”作為關(guān)鍵詞，通過GeneCards數(shù)據(jù)庫(https://genealacart.genecards.org/)、OMIM數(shù)據(jù)庫(https://www.omim.org/)獲取疾病相關(guān)靶點(diǎn)。利用R語言軟件(https://www.r-project.org/)將痤瘡相關(guān)靶點(diǎn)與石榴皮靶點(diǎn)取交集，初步獲得石榴皮治療痤瘡的潛在作用靶點(diǎn)。

1.3 藥物作用靶點(diǎn)與痤瘡疾病靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及可視化

將中藥與疾病的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org/)，設(shè)置物種為人，得到潛在作用靶點(diǎn)之間的相互關(guān)系，導(dǎo)出為.tsv格式。將上述結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape3.6.1軟件，并利用“Network Analyzer”插件對(duì)網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)鋮?shù)進(jìn)行分析，以節(jié)點(diǎn)大小及顏色深淺反映其degree值大小。

1.4 通路富集分析

采用David生物信息學(xué)資源平臺(tái)6.8(https://david.ncifcrf.gov/summary.jsp)對(duì)上述篩選的靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG信號(hào)通路富集分析，限定研究物種為人，以P＜0.05為閾值，從中篩選石榴皮治療痤瘡的潛在信號(hào)通路。值得一提的是，雖然David數(shù)據(jù)庫功能全面且易操作，但限于其覆蓋范圍及更新速度，其預(yù)測結(jié)果可能存在假陽性現(xiàn)象，故本研究以P＜0.05為閾值，篩選前20條通路，并結(jié)合計(jì)算機(jī)檢索CNKI、WanFang和PubMed數(shù)據(jù)庫，搜索痤瘡發(fā)病機(jī)制相關(guān)信號(hào)通路，將兩者結(jié)果進(jìn)行整合，剔除無文獻(xiàn)報(bào)道通路，增加文獻(xiàn)報(bào)道較多的通路。所有中英文數(shù)據(jù)庫檢索時(shí)限均為2018年1月1日-2020年12月31日。中文檢索詞包括：“痤瘡”“尋常痤瘡”“通路”英文檢索詞包括“acne”“acne vulgaris”“common acne”“signaling pathway”。匯 總 檢索文獻(xiàn)的基本信息，包括：作者、年份、標(biāo)題等。

1.5 “成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建及可視化

將上述所有分析結(jié)果導(dǎo)入Cytoscapev3.6.1軟件，并通過Merge插件將“靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)與“成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行整合及可視化分析，構(gòu)建石榴皮“成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)。網(wǎng)絡(luò)中的成分、靶點(diǎn)、信號(hào)通路采用節(jié)點(diǎn)(node)表示，節(jié)點(diǎn)之間的相互作用通過邊(edge)表示。

1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)金黃地鼠18只，雄性，體質(zhì)量(110-130)g，由中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0011，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查編號(hào)：2019sydw0136]，實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)按照中南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部福利和倫理原則操作。

1.7 藥品與試劑

70%石榴皮多酚提取物(西安瑞盈生物科技有限公司)；自制石榴皮多酚乳膏，制作方法及步驟參考課題組的前期研究[17]。10%水合氯醛(上海山浦化工有限公司)，0.025%維A酸乳膏(商品名：迪維，規(guī)格:15g/支，國藥準(zhǔn)字：H50021817，生產(chǎn)廠家：重慶華邦制藥有限公司)，PI3K兔多克隆抗體(美國Proteintech公司)。

1.8 動(dòng)物分組及給藥

將受試動(dòng)物按隨機(jī)數(shù)字表分為3組，即空白對(duì)照組、基質(zhì)組、石榴皮多酚乳膏組[0.32g生藥/(kg·天)，通過體表面積換算[18]，相當(dāng)于等效劑量的2倍]，每組6只，給藥方法為外用，給藥部位為雙側(cè)皮脂腺斑處，2次/天，連續(xù)用藥4周。

1.9 皮脂腺斑大小測量

空白組不予任何藥物處理。給藥前及末次給藥24 h后，用剃須刀剔除金黃地鼠雙側(cè)側(cè)腹部毛發(fā)，使皮脂腺斑充分暴露，在強(qiáng)光照射下，用游標(biāo)卡尺測量并記錄皮脂腺斑的最大橫徑(DT)、最大縱徑(DL)，計(jì)算

DT*DL。

1.10 免疫組化檢測

剪下各組金黃地鼠左側(cè)另一半皮脂腺斑，置于-80℃環(huán)境中保存，檢測皮脂腺斑組織中PI3K的表達(dá)情況，在放大20倍視野下隨機(jī)挑選5個(gè)測定區(qū)域，按一定域值分割陽性細(xì)胞，測定皮脂腺斑中PI3K表達(dá)的平均積分光密度。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用(xˉ±s)表示。用藥前后比較采用配對(duì)資料的t檢驗(yàn)，組間多重比較采用單因素方差分析，并以LSD法進(jìn)行兩兩比較。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 石榴皮有效成分的篩選

在TCMSP數(shù)據(jù)庫、SymMap數(shù)據(jù)庫中輸入“SHILIUPI”，以O(shè)B≥30%且DL≥0.18為篩選條件，共得到29種活性成分及相關(guān)信息。通過閱讀相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)安石榴苷[19,20]、安石榴林[21,22]這兩種化學(xué)成分雖不滿足上述OB、DL篩選標(biāo)準(zhǔn)，但臨床藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證有效，故亦納入活性成分進(jìn)行研究(表1)。

表1 TCMSP數(shù)據(jù)庫篩選的石榴皮活性成分

2.2 中藥-疾病靶點(diǎn)預(yù)測

利用R語言軟件共收集到石榴皮活性成分靶點(diǎn)193個(gè)，痤瘡相關(guān)靶點(diǎn)1371個(gè)，將疾病相關(guān)靶點(diǎn)與藥物靶點(diǎn)取交集，共獲得79個(gè)石榴皮治療痤瘡的潛在靶點(diǎn)(見圖1)。

圖1 中藥-疾病靶點(diǎn)

2.3 潛在靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

潛在靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)見圖2，節(jié)點(diǎn)越大、顏色越深，其對(duì)應(yīng)的Degree值越大。結(jié)果顯示該網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)主要包括Akt1、IL-6、VEGFA、PTGS2、JUN、IL-1B、CXCL8、MMP9、MAPK1等，可能是石榴皮實(shí)現(xiàn)藥理效應(yīng)的核心靶點(diǎn)。

圖2 潛在靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)

2.4 通路富集分析

通過對(duì)候選靶點(diǎn)進(jìn)行通路富集分析，得到TNF signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway等7條信號(hào)通路。通過檢索數(shù)據(jù)庫，共檢索到75篇文獻(xiàn)，其中英文文獻(xiàn)25篇，中文文獻(xiàn)50篇，排除與David數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果重合通路后，共選用3篇文獻(xiàn)[23-25]，得到4個(gè)痤瘡發(fā)病機(jī)制相關(guān)通路，包括FoxOsignaling pathway、Ras signaling pathway、Insulin resistance、MAPK signaling pathway。將無文獻(xiàn)報(bào)道通路剔除，添加以上4個(gè)通路映射到富集分析結(jié)果中，共得到11條主要的生物信號(hào)通路，按富集的靶標(biāo)總數(shù)(n)排序如表2。

表2 通路富集分析信息

2.5 “成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及可視化

利用Cytoscape v3.6.1軟件繪制“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)(圖3)。在網(wǎng)絡(luò)中，節(jié)點(diǎn)的度值代表和此節(jié)點(diǎn)相連接的邊的條數(shù)，根據(jù)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)原理篩選度值較大的化合物節(jié)點(diǎn)進(jìn)行分析，度值排名前3的藥物成分為槲皮素(132)、木犀草素(49)、山奈酚(48)，其可能是石榴皮治療痤瘡關(guān)鍵活性成分。由圖3可見，PTGS2、PTGS1、KCNH2、AR、Akt1、MAPK1等靶點(diǎn)與藥效成分互作次數(shù)顯著高于其他節(jié)點(diǎn)，提示以上靶點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中較重要，這與潛在靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)的結(jié)果相符；根據(jù)通路富集分析結(jié)果的P值大小，可知PI3K-Akt信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路等成為有效信號(hào)通路的可能性和準(zhǔn)確性較高。

圖3 石榴皮“成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)

2.6 皮脂腺斑面積比較

給藥前，3組皮脂腺斑大小經(jīng)方差檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。給藥后，各組皮脂腺斑大小較給藥前均有增大，考慮與飼養(yǎng)致體表面積增大有關(guān)。給藥后，與空白組、基質(zhì)組相比，石榴皮多酚乳膏組同側(cè)皮脂腺斑面積明顯縮小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表3)。

表3 治療前后各組金黃地鼠雙側(cè)皮脂腺斑面積的比較(±s；n=6)

表3 治療前后各組金黃地鼠雙側(cè)皮脂腺斑面積的比較(±s；n=6)

注：與空白組比較，*P＜0.05；與基質(zhì)組比較，#P＜0.05。

組別空白組基質(zhì)組石榴皮多酚乳膏組給藥前左側(cè)/mm2 35.67±3.87 35.34±2.72 36.20±2.43右側(cè)/mm2 36.94±3.11 37.03±2.64 37.87±2.98給藥后左側(cè)/mm2 48.05±2.62 46.20±4.88 41.43±3.39*#右側(cè)/mm2 48.34±3.68 47.88±5.45 41.40±4.43*#

2.7 各組金黃地鼠皮脂腺斑PI3K蛋白的表達(dá)

免疫組化顯示，PI3K主要分布在皮脂腺細(xì)胞的細(xì)胞漿上(圖6)。與空白組相比，基質(zhì)組皮脂腺斑PI3K表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；與空白組相比，石榴皮多酚乳膏組皮脂腺斑PI3K表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與基質(zhì)組相比，石榴皮多酚乳膏組皮脂腺斑PI3K表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。以上表明，石榴皮多酚乳膏可使金黃地鼠皮脂腺斑PI3K的表達(dá)降低(表4)。

表4 各組金黃地鼠皮脂腺斑PI3K表達(dá)情況的平均積分光密度值比較(±s；n=6)

表4 各組金黃地鼠皮脂腺斑PI3K表達(dá)情況的平均積分光密度值比較(±s；n=6)

注：與空白組比較，*P＜0.05；與基質(zhì)組比較，#P＜0.05。

組別空白組基質(zhì)組石榴皮多酚乳膏組PI3K 0.42±0.03 0.41±0.03 0.37±0.03*#

3 討論

3.1 石榴皮防治痤瘡的理論淵源

中醫(yī)認(rèn)為痤瘡是由于外受風(fēng)邪，肺經(jīng)蘊(yùn)熱、濕熱蘊(yùn)結(jié)，痰濕互結(jié)、毒熱互結(jié)，肝腎陰虛、沖任失調(diào)而發(fā)病[26]。根據(jù)“整體觀念”和“取類比象”思維，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為人體皮膚的病變是相應(yīng)臟腑或局部皮膚病變的結(jié)果。皮類藥物取自于動(dòng)植物器官表皮，與人體皮膚一樣為身體之藩籬、衛(wèi)外之屏障[27]。《中藥圖譜》和《食物本草》中記載：石榴皮水煎液可用于治療各種皮膚疥癬。《玉楸藥解》云“石榴皮酸澀收斂，治下利遺精、脫肛便血、崩中帶下之病，點(diǎn)眼止淚，涂瘡拔毒”。石榴皮提取物中多酚總量與其多種生物活性呈明顯的正相關(guān)[28]。顧政一等[29]研究表明，石榴皮多酚可促進(jìn)大鼠急性皮膚創(chuàng)傷部位傷口愈合。課題組前期研究表明，石榴皮多酚對(duì)兔耳粉刺模型具有抗角化、抗炎的作用[30]。同時(shí)，Boo YC等[31]認(rèn)為石榴或石榴皮中的酚類具有抗氧化、抗炎的作用，對(duì)尋常痤瘡、特應(yīng)性皮炎等皮膚病均有改善作用。

圖4 PI3K在皮脂腺斑組織中的分布

3.2 關(guān)鍵成分分析

本研究對(duì)獲取的31種具有相關(guān)生物活性的化學(xué)成分進(jìn)行分析，其中有較多作用靶點(diǎn)的成分主要有槲皮素、山奈酚、木犀草素，其可能是石榴皮發(fā)揮治療作用的重要成分。槲皮素具有抗氧化、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、心血管保護(hù)等藥理作用。痤瘡發(fā)病與人皮脂腺細(xì)胞的脂質(zhì)分泌、代謝紊亂密切相關(guān)。而在人原始脂肪細(xì)胞中，槲皮素具有抗炎、改善胰島素抵抗的作用[32]。山奈酚具有良好的抗炎、抗癌、改善胰島素抵抗等作用，抑制腫瘤生長形成等藥理活性。研究表明，槲皮素、山奈酚通過抑制痤瘡丙酸桿菌生長，增強(qiáng)紅霉素的抗炎作用，從而發(fā)揮治療痤瘡的作用[33]。而以木犀草素為主要成分的疤痘霜具有活血清熱解毒的作用，適用于各類尋常痤瘡[34]。由此可見石榴皮防治痤瘡的活性成分主要通過抗炎、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、改善胰島素抵抗發(fā)揮作用。

3.2 關(guān)鍵靶點(diǎn)分析

石榴皮的31種活性成分共涉及193個(gè)靶點(diǎn)。潛在靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)結(jié)果顯示石榴皮可能通過Akt1、IL-6、VEGFA、PTGS2等靶點(diǎn)實(shí)現(xiàn)藥理效應(yīng)。研究表明白藜蘆醇主要通過抑制Akt表達(dá)，降低皮脂生成，從而治療痤瘡[35]。IL-6基因啟動(dòng)子多態(tài)性可能與痤瘡的易感性有關(guān)，但與痤瘡患者的嚴(yán)重程度無關(guān)[36]。一項(xiàng)臨床研究表明，異維甲酸可顯著升高痤瘡患者血清sVEGFR3水平，并降低血清sVEGFR1水平，而對(duì)血清sVEGFR2水平無明顯影響[37]。PTGS2又名環(huán)氧合酶-2(Cyclo-oxygenase 2，COX-2)，其通過調(diào)節(jié)皮脂腺細(xì)胞增殖、脂質(zhì)合成，及毛囊皮脂腺單位炎癥反應(yīng)參與痤瘡的發(fā)生[38]。石榴皮活性成分通過調(diào)節(jié)這些靶點(diǎn)起到防治痤瘡的作用。

3.3 關(guān)鍵通路分析

通過KEGG通路富集分析及文獻(xiàn)檢索，初步獲得石榴皮治療痤瘡的11條潛在通路：PI3K-Akt信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路等。Mastrofrancesco A等[39]的研究表明，激活PI3KAkt信號(hào)通路可誘導(dǎo)SZ95人皮脂細(xì)胞脂質(zhì)合成，促進(jìn)細(xì)胞生長、增值，導(dǎo)致痤瘡加重。Mirdamadi Y等[40]發(fā)現(xiàn)IGF-1和胰島素在作用于初始T細(xì)胞15 min后，能夠促進(jìn)其細(xì)胞質(zhì)p-Akt的表達(dá)，且將SZ95人皮脂腺細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)后p-Akt表達(dá)上調(diào)，因此猜測IGF-1和胰島素刺激后的SZ95能夠分泌某些因子，減少T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)p-Akt的表達(dá)，最終導(dǎo)致痤瘡發(fā)生。一項(xiàng)薈萃分析顯示，TNF-α基因的多態(tài)性與不同人種的痤瘡易感性相關(guān)[41]。Choi JJ等[42]的研究表明，TNF-α通過作用于PI3K-Akt信號(hào)通路促使SZ95細(xì)胞脂質(zhì)合成。Agak GW等[43]的研究表明，與健康皮膚相比，痤瘡患者皮膚表面C.acnes可以誘導(dǎo)產(chǎn)生不同表型的Th17細(xì)胞。Shi G等[44]發(fā)現(xiàn)IGF-1可能通過PI3K-Akt-FoxO1信號(hào)通路抑制角質(zhì)形成細(xì)胞分化，而異維甲酸對(duì)痤瘡的治療作用可能與增強(qiáng)FoxO1表達(dá)有關(guān)。文獻(xiàn)證明這些信號(hào)通路大都涉及皮脂分泌、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、免疫應(yīng)答等環(huán)節(jié)，它們參與了痤瘡基本病理生理過程。

本研究使用的TCMSP數(shù)據(jù)庫雖存在局限性，如無法提供藥物體內(nèi)外成分的變化，但其整合了藥物化學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)預(yù)測等信息，構(gòu)建的中藥化學(xué)分子庫較為全面，提供了ADME參數(shù)、成分作用靶點(diǎn)等關(guān)鍵信息，準(zhǔn)確性和查全性可靠，是目前中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)領(lǐng)域較為公認(rèn)的數(shù)據(jù)庫[45]。口服和經(jīng)皮給藥藥物的生物利用度不同，但現(xiàn)有網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫無經(jīng)皮吸收藥物的生物利用度指標(biāo)，這在一定程度上增加了進(jìn)行相關(guān)藥物網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究的難度。鑒于外治法在中醫(yī)外科學(xué)應(yīng)用的廣泛性，有必要在現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫中增加經(jīng)皮吸收藥物的生物利用度評(píng)價(jià)指標(biāo)。

結(jié)合痤瘡的文獻(xiàn)研究[42,46]：PI3K信號(hào)通路參與痤瘡皮脂穩(wěn)態(tài)失衡的發(fā)生與發(fā)展，課題組重點(diǎn)研究了PI3K蛋白在金黃地鼠皮脂腺斑中的表達(dá)情況。為了驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理的部分預(yù)測，本研究進(jìn)一步研究了石榴皮多酚對(duì)金黃地鼠皮脂腺斑增生、皮脂腺斑組織PI3K表達(dá)水平的影響。結(jié)果表明：石榴皮多酚乳膏能使金黃地鼠皮脂腺斑面積縮小，降低皮脂腺斑組織中PI3K蛋白的表達(dá)，此結(jié)果與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的預(yù)測結(jié)果一致。

綜上所述，石榴皮治療痤瘡的活性成分可能是槲皮素、山奈酚、木犀草素等，上述活性成分主要作用于Akt1、IL-6、VEGFA、PTSG2等靶標(biāo)基因，參與調(diào)節(jié)PI3K-Akt信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路等調(diào)控皮脂穩(wěn)態(tài)、抑制炎癥反應(yīng)等，從而發(fā)揮治療痤瘡的作用。本研究從理論預(yù)測、整體分析角度，初步揭示了石榴皮治療痤瘡的潛在活性成分及其可能的作用機(jī)制，進(jìn)一步經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，石榴皮多酚乳膏能夠抑制金黃地鼠皮脂腺斑組織中PI3K蛋白的表達(dá)，抗皮脂腺斑增生，進(jìn)而發(fā)揮治療痤瘡的作用。本研究可為實(shí)驗(yàn)研究石榴皮治療痤瘡的作用機(jī)制提供參考，同時(shí)為“以皮治皮”理論在中醫(yī)皮膚科的應(yīng)用提供現(xiàn)代理論依據(jù)。