兩種全自動免疫分析系統檢測25-羥基維生素D的一致性評價

龔美亮，陳 瑞，李曉霞，王科宇，周 玉，鄧新立，叢玉隆

解放軍總醫院第二醫學中心 檢驗科，北京 100853

維生素D的功能是參與調節體內鈣磷代謝、維持骨骼健康，其缺乏可能導致佝僂病、軟骨病、骨質疏松，增加老年人骨折和跌倒的風險[1]。近年來大量流行病學研究表明，維生素D缺乏或不足與癌癥、感染性疾病、自身免疫性疾病及心血管疾病的發生緊密相關[2-4]，甚至與高死亡風險相關[5]。維生素D缺乏在世界大多數地區較為常見，是一個全球關注的問題[6-8]。隨著人們對于維生素D重要性的認識逐漸加深，維生素D的檢測需求也逐年增加[6-7]。自動化免疫分析法由于其自動化水平高、人員要求低、高通量等優點，成為臨床檢測25-羥基維生素D[25(OH)D]的主流設備，完成了90%的常規檢測[9]。新產業全自動免疫分析系統是國內唯一通過美國CDC維生素D標準化認證計劃(2018年)的維生素D檢測設備[10]，目前在國內臨床實驗室廣泛應用于25(OH)D檢測，然而關于新產業檢測25(OH)D的評價文獻較少。索靈全自動免疫分析系統是世界范圍內使用最為廣泛的25(OH)D檢測設備之一，根據國際性維生素D室間質量評價計劃(Vitamin D External Quality Assessment Scheme，DEQAS)的 報 告，2018年參加質量評價計劃的免疫法設備中索靈設備約占1/3[11]。禹松林等[12]對國內人群的研究也表明5種自動免疫分析設備中索靈與比對方法具有更好的相關性。因此本研究選擇索靈作為比對方法，將新產業與其進行檢測25(OH)D的一致性評價，以期為臨床正確評價和應用新產業檢測結果提供依據。

材料與方法

1 儀器與試劑 新產業全自動化學發光免疫分析儀Maglumi 4000 Plus(中國，新產業生物醫學工程股份有限公司)，索靈電化學發光免疫分析儀LIAISON XL(意大利，索靈公司)。25(OH)D檢測試劑盒及定標品、質控品均為相應廠家原裝試劑。

2 樣本來源 解放軍總醫院第二醫學中心2019年5 - 6月810例健康查體者血清，其中男性779例，女性31例，平均年齡(73.58±10.78)歲。每例查體者的血清于體檢當日分裝2小份于EP管，凍存于-80 ℃冰箱。

3 25(OH)D檢測 凍存標本于檢測當天溶解，在校準、質控結果良好的情況下檢測，所有檢測在2 d內完成。以世界范圍內廣泛使用的索靈免疫法做為比對方法，與新產業檢測結果進行比對。索靈在2017 - 2018年DEQAS中表現較好，40例樣本的索靈檢測結果(約200家實驗室均值)與參考測量程序確定的靶值一致性很好。見圖1。

圖1 2017 - 2018年DEQAS：40例樣本索靈與靶值的Passingbablok回歸分析Fig.1 Passing-bablok regression of DiaSorin with target values for 40 samples from 2017 to 2018 by DEQAS

4 維生素D營養狀況臨床判定 根據國家衛健委衛生行業標準：≥ 20 ng/mL為維生素D充足，≥ 12且＜20 ng/mL為維生素D不足，＜12 ng/mL為維生素D缺乏[13]。

5 統計學分析 數據分析及作圖采用SPSS19.0、MedCalc 9.2.1.0及GraphPad Prism 8.0完成。配對符號秩和檢驗分析兩種方法檢測結果的統計學差異。根據索靈檢測25(OH)D濃度分組，趨勢檢驗(多項式對比法)分析新產業檢測偏差隨25(OH)D濃度增長的變化趨勢。Passing-bablok回歸、組內相關系數(intra-class correlation coefficient，ICC)分析兩種檢驗方法的相關性、一致性。Kappa分析比較兩種方法用于臨床評估維生素D營養狀況的一致性。P＜0.05為差異具有統計學意義。

結 果

1 兩種方法25(OH)D檢測值比較 檢測810例樣本25(OH)D的濃度范圍，索靈為17.60(4.00 ～62.30) ng/mL，新產業為16.35(7.36 ～ 66.50) ng/mL。新產業的檢測結果與索靈有統計學差異(P＜0.001)，二者的平均偏差為-1.39 ng/mL(-1.06%)。見表1。

表1 新產業與索靈檢測25(OH)D結果(ng/mL, n=810)Tab.1 25(OH)D results from DiaSorin and Snibe(ng/mL, n=810)

2 檢測偏差與25(OH)D濃度的關系 將所有樣本根據索靈檢測25(OH)D濃度分為0～10 ng/mL(n=73)、10～15 ng/mL (n=206)、15～20 ng/mL(n=229)、20～25 ng/mL (n=161)、25～30 ng/mL(n=85)、＞30 ng/mL (n=56)。從低濃度組到高濃度組，新產業與索靈的平均偏差分別為51.36%、9.00%、-6.47%、-13.61%、-18.60%、-21.57%。在25(OH)D濃度＞10 ng/mL的各組中，偏差隨濃度變化的趨勢檢驗Ptrend=0.000，說明隨著25(OH)D濃度增加，新產業的檢測偏差有增加的趨勢，表現出濃度依賴性(圖2)。

圖2 新產業檢測25(OH)D與索靈偏差表現出濃度依賴性Fig.2 Measurement deviation of Snibe and DiaSorin showed a concentration dependence

3 檢驗方法的相關性和一致性 新產業與索靈有較好的相關性，Spearman秩相關系數r=0.806(95% CI：0.780～0.829；r＞0.6為可接受，r＞0.8為優秀)，ICC=0.766(95% CI：0.700～0.814；ICC＜0.4為一致性較差，ICC＞0.75為一致性較好[14])。新產業與索靈的Passing-bablok回歸方程斜 率 為0.650(95%CI：0.623～0.680)，截 距為4.871 (95% CI：4.396～5.338)(圖3)。

圖3 新產業檢測25(OH)D與索靈的Passing-bablok回歸分析Fig.3 Passing-bablok regression of Snibe with DiaSorin for 25(OH)D measurement

4 維生素D營養狀況判定 新產業判斷維生素D充足(≥ 20 ng/mL)、不足(≥ 12～＜20 ng/mL)、缺乏(＜12 ng/mL)與索靈的符合率為68.77%。新產業判斷維生素D充足、不足、缺乏與索靈的一致性度量Kappa值為0.479(表2)(Kappa ＞0.4為可接受，＞0.75為優秀[15])。根據二者回歸方程將新產業的結果進行轉換之后，新產業判斷維生素D營養狀況與索靈的符合率為82.96%，Kappa值為0.717(表3)。

表2 新產業判斷維生素D充足、缺乏或不足與索靈的一致性(n)Tab.2 Consistency of Snibe and DiaSorin on clinical judgment (n)

表3 轉換后新產業判斷維生素D充足、缺乏或不足與索靈的一致性(n)Tab.3 Consistency of Snibe (after conversion) and DiaSorin on clinical judgment (n)

討 論

全自動免疫分析設備具有高通量、節省人力等特點，適合我國大中型醫院的工作量。在質譜法檢測維生素D于自動化和高通量等方面取得大的進展之前，自動免疫法在臨床檢測25(OH)D領域還將占據重要的地位。然而免疫法也存在著維生素D其他代謝產物干擾、抗體特異性不一、不能區分25(OH)D3與25(OH)D2等缺陷，不同免疫法的結果往往不可比，其檢測標準化一直是維生素D檢測的難題[16-17]。新產業是通過美國CDC和FDA認證的25(OH)D檢測平臺，目前國內外對其評價研究較少。本研究選擇世界范圍內廣泛使用的索靈自動免疫分析系統作為參考方法，將新產業與其進行檢測25(OH)D的一致性評價。

雖然新產業的檢測結果與索靈總平均偏差較小[-1.39 ng/mL(-1.06%)]，但在25(OH)D＜10 ng/mL(n=73)的樣本中，其檢測偏差高達51.36%。鄒迎曙等[18]報道新產業對低值人血清樣本(8.99 ng/mL)的檢測偏差為64.2%，與本研究基本一致。低25(OH)D水平時，新產業檢測偏差較大的原因可能是由于其檢測線性范圍(10～150 ng/mL)造成。文獻[18]還報道標準品靶值分別為18.89 ng/mL、29.32 ng/mL、32.70 ng/mL時新產業檢測偏差分別為-9.9%、-14.6%、-29.2%，與本研究的對應的濃度范圍平均偏差-6.47%、-18.60%、-21.57%基本吻合。本研究中，在25(OH)D濃度＞10 ng/mL的濃度范圍內，新產業與索靈的檢測偏差隨著25(OH)D濃度的增加而增加，表現出濃度依賴性(圖2)。一些免疫法檢測25(OH)D出現濃度依賴性偏差在DEQAS的報告中也被描述過[11]，但還需要更多的研究加以證明。

盡管兩種方法存在檢測偏差，通過回歸方程和ICC可以判斷新產業與索靈檢測結果仍表現出較好的相關性和一致性。在此基礎上，可以嘗試利用二者的回歸方程對新產業的檢測結果進行轉換，從而降低二者的偏差、減少維生素D營養水平歸類錯誤。轉換前新產業判維生素D充足、不足、缺乏與索靈的符合率與Kappa值分別為68.77%和0.479；轉換之后新產業判維生素D充足、不足、缺乏與索靈的符合率與Kappa值分別為82.96%和0.717。經過回歸方程轉換后，新產業與索靈判斷維生素D營養狀況的符合率及Kappa值都有較明顯的提高，這也為解決不同免疫法結果差異的問題提供了一種解決思路。

免疫法檢測維生素D的準確性受到諸多因素的影響，國內外研究報道不同免疫法結果多不可比，而不同實驗室使用同一個參考范圍的現狀也給維生素D的結果判讀帶了混亂。由于不同免疫法的檢測結果存在偏差，臨床實驗室應注意建立針對本實驗室方法的參考區間，以免引起臨床判讀維生素D營養狀況錯誤。另外，本研究發現利用與可信的比對方法的回歸方程對檢測結果進行轉化可能是也是一個比較可行的解決方法。

利益沖突：所有作者均披露無利益沖突。本研究獲得索靈診斷醫療設備(上海)有限公司和中國新產業生物醫學工程股份有限公司對試劑和儀器設備等的支持，但研究結果與公司無關。