海螵蛸雞子黃油膏制備及其對小鼠創傷修復中IL-6及TNF-α的影響

宋孟霜 楊 宇 孫 璐 陳曉霞 王玲玲*

(遼寧中醫藥大學 藥學院,遼寧 大連116600)

海螵蛸，性咸、澀、溫，歸脾、腎經，具有收斂止血，制酸止痛，收濕斂瘡的作用，在古代多用于治療吐血、鼻衄不止、創口久不收斂等[1]。現代藥理研究海螵蛸具有中和胃酸[2]、保護胃黏膜、抗潰瘍、止血及清創面作用[2]。雞子黃油多外用治療水火燙傷、濕疹、潰瘍久不收口、慢性中耳炎等，具有消腫止痛、收斂瘡口的功效[3]。《本草綱目》中記載“海螵蛸燒存性，和雞蛋黃一同研成末外涂,治療小兒重舌鵝口瘡”，說明海螵蛸與雞子黃油配伍具有消腫及收斂創口功效，但現代研究中未見有關海螵蛸與雞子黃油配伍的研究。

創傷是由于各種致傷因素導致的人體組織損傷和功能障礙，嚴重創傷則導致全身炎癥反應綜合征（Systemicinflammationresponsesyndrome，SIRS）的發生[4]。當機體受到創傷等嚴重打擊后，體內相續啟動一系列復雜的細胞生物學效應，包括應激信號的激活和傳遞、炎癥反應失衡、各種有害因素的釋放等。我國傳統醫學對如何促進創面修復有著獨特的理解和豐富的臨床經驗，尤其是在創面的外治上充分發揮著中醫藥的優勢。因此，充分發揮外用中藥有效促進創面愈合的特長，探討其機理具有重要的意義。

1 資料與方法

1.1 試藥與儀器

山東產海螵蛸（購于大連市海王星辰藥店）；洪家雞蛋（購買于農產品市場）；Na2S（國藥集團）、烏拉坦（國藥集團）、IL-6及TNF-αElisa試劑盒（江蘇酶標）均購于大連辰玉試劑有限公司、科華全自動酶標儀ST-360。

實驗用動物為12周齡昆明小鼠，體重（20±2）g，雌雄各半，共96只，購與大連醫科大學，動物合格證號：SCXK（遼）2013-0002。所有小鼠均予標準嚙齒類動物飼料喂養按照標準飼養一周后進行正式實驗。

1.2 方法

1.2.1 實驗用藥材制備

1.2.1.1 海螵蛸：取凈海螵蛸小塊置于熱鍋內，用文火加熱，炒至表面微黃色，取出，放涼，研磨成細粉末。

1.2.1.2 雞子黃油：雞蛋煮熟，去殼及蛋白，將蛋黃搓碎后放置在鐵鍋內，先用文火加熱，再用武火慢熬，反復翻炒至出油。繼續炒至蛋黃變黑褐色的硬塊，油完全溢出，將蛋黃油倒入小瓶，得20mL，待涼備用。

1.2.1.3 實驗用藥膏制備：稱取碳十八醇、單硬脂酸甘油酯、丙二醇、吐溫、司盤適量，一起于水浴鍋上恒溫80℃加熱混合作為油相。另量取甘油和蒸餾水適量，于水浴鍋上加熱至80℃左右，緩緩滴入三乙醇胺，作為水相。在80℃等溫下將油相緩緩倒入水相，將30g海螵蛸粉加入，按同一方向攪拌，放涼至室溫，即得海螵蛸膏。分別取基質加入不同質量的海螵蛸與雞子黃油5mL配置成1:1組、2:1組、3:1組及4:1組。

1.2.2 造模與干預。實驗用動物隨機分為8組，每組10只，適應性飼養一周后，腹腔注射20%烏拉坦，麻醉后用6%的Na2S溶液脫毛。用手術剪做全皮層切除手術，深及筋膜，面積約為0.5 cm2。各給藥組于創面上均勻涂相應藥膏0.5 mm厚，每日換藥1次，每3日以標準化攝影法拍攝創口，計算創口創面愈合率，直至造模成功后第9d。

1.2.3 ELISA試劑盒檢測。分別于給藥第一天、第三天、第六天及第九天，取空白組、模型組、4：1組各4只小鼠，摘眼球取血，離心分離得到血清。按照IL-6及TNF-αELISA試劑盒說明書進行測定。

1.2.4 統計學方法。采用SPSS22.0 統計學軟件進行處理。計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同給藥組對創面愈合率的影響

與模型組相比，各給藥組在9天內各統計時間點均具有顯著的促進創面愈合作用(P＜0.05 ）。不同配比藥對與單味藥相比，第三天及第六天3:1組與4:1組與海螵蛸組及雞子油組具有顯著性差異，治療效果更好，第九天則基本痊愈，與單獨使用海螵蛸作用相當，但較單獨使用雞子油效果顯著。尤其4:1組第一天對創面愈合度就明顯高于各單味藥組。由此確定4:1組為海螵蛸雞子油最佳配比，由此制備藥膏具有顯著治療創傷作用（圖1）。

圖1 不同給藥組對小鼠創面愈合率的影響

2.2 海螵蛸雞子油膏對創傷模型小鼠血清中IL-6及TNF-α

如表1所示，與空白組相比，9天內模型組血清中IL-6及TNF-α均有顯著升高，但是隨著傷口愈合天數增加，炎癥因子含量逐漸降低；給藥組，除了第九天IL-6含量回調至正常值外，其它天數組IL-6及TNF-α顯示隨著愈合天數增加，含量逐漸降低。但與模型組相比，治療組各天內回調IL-6及TNF-α能力均較自然愈合有顯著性差異。說明海螵蛸雞子油膏藥物發揮了很大作用。

表1 海螵蛸雞子油對創傷模型小鼠中IL-6及TNF-α的比較(x±s,n=10)

3 討論

通過藥理實驗觀察到各含有海螵蛸給藥組，在手術后第一天傷口均有不同程度明顯結痂，單獨雞子黃油組結痂較其它給藥組范圍小，但模型組并無明顯結痂現象，且傷口中心處泛白，外圍紅腫。在活躍程度方面，各含有雞子黃油給藥組在傷后給藥的7h后陸續開始進食、緩慢活動，在第三天已基本活動無礙，單獨海螵蛸組給藥后第二天開始進食、緩慢活動，在第四天已基本活動無礙。模型組在前三天除了必要的進食基本一動不動。通過實驗數據顯示，不同時間點給藥組的愈合率均顯著高于模型組（P<0.05 ），但是當海螵蛸與雞子黃油配比達到4：1時，其促進創面愈合效果最佳，且在傷后第10天已基本痊愈結痂脫落，模型組創面結痂未完全脫落，表明海螵蛸與雞子黃油配伍對創傷的愈合有明顯的促進作用，且有助于傷后恢復正常活動。推測膏藥中雞子黃油清熱解毒，消腫止痛功效可減輕創面疼痛，促進傷后恢復，海螵蛸則具有顯著的止血收斂傷口作用，兩者配伍可達到最佳的止痛斂傷功效。