關于HPLC法測定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中N-甲基莫西沙星含量的研究

谷開保 宋小桂 張小軍

揚子江藥業集團江蘇海慈生物藥業有限公司 江蘇 泰州 225300

引言

莫西沙星為藥物鹽酸莫西沙星注射液的重要成分。其屬于一種新式8-甲氧基喹諾酮類制劑。其有著相當強的抗菌活性，有著良好的抗菌譜。莫西沙星具有相當好的藥動力特點以及安全度，吸收滿意。生物利用度為90.00%[1]，血漿蛋白結合率達到了50.00%[2]，有著比較好的組織穿透性。為了全面分析HPLC法測定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中N-甲基莫西沙星含量，本文對上述命題進行全面分析，現匯報如下。

1 基線資料

實驗使用日本島津公司生產的LC-20A型高效液相色譜設備；電子天平；pH計；莫西沙星對照品（純度水平96.1%，歐洲藥典委員會）；雜質1（純度99.9%）、雜質2（96.4%）、雜質3（99.6%）、雜質4（95.6%）、雜質5（99.9%），上述物質提供廠家為蘇州朗科生物技術有限公司。鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液生產廠家為揚子江藥業江蘇海慈生物藥業有限公司，國藥準字H20193112。

甲醇色譜純，實驗用水為純化水，其他試劑則為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件

實驗選擇G e m i n i—N X C 1 8為色譜柱，條件為(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為濃度1.0%三乙胺溶液（磷酸調節為PH2.5）:甲醇（7:3）。柱溫為40℃；波長為293nm；進樣量設定為10μL，流量設定為1.0ml/min。

2.2 溶液制備方法

2.2.1 空白輔料溶液。依照既定處方，配置好內部不存在鹽酸莫西沙星溶液，滅菌處理獲得。

2.2.2 專屬性試驗溶液。擇取對照品藥物、雜質1-5、N-甲基莫西沙星適量。加入溶劑（水500ml、磷酸1ml、0.05g無水亞硫酸鈉，加水稀釋到1000ml）。制作為莫西沙星1.0mg/ml的溶液。雜質1-5、N-甲基莫西沙星分別為1.0μg混合性溶液。

2.2.3 適用性試驗溶液。擇取適當N-甲基莫西沙星以及對照品藥物適當，依照專屬性試驗溶液制備方法制作溶劑，將其溶解成1ml內含有0.8mg莫西沙星、0.8μgN-甲基莫西沙星混合溶液。

2.2.4 對照品溶液。取用適當N-甲基莫西沙星，加入項目（2）內的溶劑，制作0.8μg/ml的N-甲基莫西沙星混合溶液。

2.2.5 供試品。取用適當供試品，依照既定方式流動相制作為0.8mg/ml莫西沙星的溶液。

2.3 適用性試驗

取用適當適用性溶液，進樣共計6次，全面記錄色譜圖。所取得的N-甲基莫西沙星和莫西沙星的分離度在2.0以上；而拖尾因子在2.0以下；關于理論板的莫西沙星峰計均情況完全符合規定。N-甲基莫西沙星峰面積RSD值0.63%，其保留時間RSD0.17%。

2.4 專屬實驗

取用空白的輔料溶液、專屬溶液，進樣處理，全面記錄色譜圖。保證空白的輔料溶液不存在干擾。N-甲基莫西沙星和相關成分的色譜峰分離度符合要求。

2.5 定量限以及檢測限

選擇濃度既定的N-甲基莫西沙星溶液稀釋處理。測定空白位置信號，加以對比。如果信噪比的S／N在10以上，并且進樣6次之后密度RSD在5.0%以上后，將其視為定量限，把其稀釋處理3倍之后確定好檢測限。詳細結果為：N-甲基莫西沙星的具體檢測限為0.0510μg/ml，定量限為0.1527μg/ml。

2.6 線性范圍

選擇適當N-甲基莫西沙星。加入項目2.1中的（2）項溶劑制作方案，溶解制作濃度為0.103～1.527μg/ml的N-甲基莫西沙星，進樣后記錄好色譜圖。本實驗中，縱坐標為峰面積、橫坐標為濃度水平，繪制曲線。取得N-甲基莫西沙星回歸方程為A=53074C+464.92（r=0.9989）。

詳細實驗結果為：當N-甲基莫西沙星于0.103～1.527μg/ml范圍中，濃度水平和峰面積線性關系良好。

2.7 加樣回收實驗詳細結果

取用適當供試品，一共9份。依照限度水平的120.0%、100.0%以及80.0%幾個濃度水平加入N-甲基莫西沙星溶液內，完成測定工作。計算出N-甲基莫西沙星詳細回收率情況，具體結果參照表1。

續表

在表內我們能夠看出，N-甲基莫西沙星回收率均值為94.24%。RSD水平2.51%。這種方式精準度滿意。

2.8 重復性實驗

選擇6份相同的供試品。精密性稱量，加入到N-甲基莫西沙星溶液之內。依照項目2.1條件中的（2）項目制作成溶劑，0.8mg/ml西莫沙星以及0.8μg/ml的N-甲基莫西沙星混合液。混合均勻。將其視為供試品溶液。分別選擇供試品溶液按照上述方式進樣處理，記錄好色譜圖資料，分析并計算出溶液內雜質水平。具體檢測結果為：溶液中的N-甲基莫西沙星含量水平為0.13%，而RSD則為1.59%。代表該方法有著滿意的重復性。

2.9 耐用性實驗

2.9.1 依照2.1中項目（3）的方法，制作出藥物供試品。于避光以及室溫環境下放置處理，時間為12h。

于0.0h、2.0h、4.0h、6.0h、8.0h、12.0h取樣，開展檢驗工作。相關實驗結果證實：在既定時間中，N-甲基莫西沙星均值達到了9509，RSD則為1.61%。代表溶液有著良好的穩定性。

2.9.2 色譜條件參數改變情況。變更柱溫，范圍為±5℃、流動相pH值±0.2、流動相為±0.1ml/min、各類品牌的色譜柱等等參數。全面評價N-甲基莫西沙星含量水平影像情況，證實當以上參數發生輕微變化后，對于N-甲基莫西沙星水平測定影響不顯著，代表該法的耐用性滿意。

2.1 0 關于樣品測定

針對于共計3批次鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液實施測定，結果證實：樣本內的N-甲基莫西沙星含量水平為0.03%。

3 討論

高效液相色譜法（HPLC）也被稱之為“高分離度液相色譜”、“高壓液相色譜”之稱。該法屬于總色譜法重要分支[3]。流動項為液體，經高壓力輸液體系，把各類極性單一溶劑/各個比例混合溶劑、緩沖液體等泵入到帶有固定相色譜柱之內。當內部的相關成分被全面分離之后，完成檢測工作，利用這種方式分析試樣情況。現如今，高效液相色譜法已經在諸多領域內得以應用。

結合鹽酸莫西沙星藥物的雜質譜解析情況，不難發現，在其內部存在很多雜質以及N-甲基莫西沙星。但值得說明的是，揚子江藥業江蘇海慈生物藥業有限公司產品內僅僅包含N-甲基莫西沙星物質。基于這種情況，為了在根本上確保藥物的質量水平，相關工作人員有必要對于注射液內的N-甲基莫西沙物質水平加以控制。