基因毒性雜質甲磺酸甲酯測定方法驗證

杜颯

浙江逸盛新材料有限公司 浙江 寧波 315803

引言

基因毒性雜質是指化合物本身直接或間接損傷細胞DNA，產生基因突變或體內誘變，具有致癌可能或者傾向，基因毒性雜質危害性大，需要嚴格控制其在藥物中的限度，保障用藥安全。由于甲磺酸甲酯無紫外吸收且具有揮發性，所以采用氣相色譜法進行方法開發與驗證，以適用于殘留溶劑分析方法中甲磺酸甲酯的日常分析需要[1]。

1 實驗部分

1.1 儀器及試劑

儀器：氣相色譜儀Agilent 7890 B;色譜柱D B-WA X 30m×0.32mm×0.5μm；

電子天平 AL-104；微量進樣針

試劑：甲磺酸甲酯；碘化鈉（分析純）稀釋液：超純水

1.2 實驗條件和標準方法

采用DB-WAX 色譜柱（30m×0.32mm×0.5μm），FID檢測器，進樣口溫度100℃，分流比5:1，檢測器溫度270℃，柱溫：35℃保持8分鐘，然后以每分鐘40℃升溫至200℃，保持4分鐘。載氣為氮氣，流速為0.8ml/min；頂空進樣頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時間為30分鐘，進樣針溫度95℃，傳輸線溫度100℃。

1.3 實驗過程

用微量進樣針精密移取約20μl甲磺酸甲酯標準品置裝有適量超純水的50ml量瓶中，加超純水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml置200ml量瓶中，加超純水稀釋至刻度，從中精密量取10ml置100ml量瓶中，加超純水稀釋至刻度，作為儲備溶液，精密量取儲備溶液5ml置頂空瓶中，加入約6g碘化鈉，搖勻，軋蓋密封，作為標準溶液。精密量取標準溶液1ml注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。

按照以上實驗條件及方法分別從4個方面進行驗證：

1.3.1 專屬性：移取上述標準溶液5ml分別至6個頂空瓶中，進樣6次。甲磺酸甲酯峰理論板數應不低于5000，6針峰面積RSD應不小于10%。

1.3.2 定量限與檢測限：逐級稀釋標準溶液，如達到信噪比≥10:1，此濃度溶液為定量限溶液，取該溶液重復進樣6次；如達到信噪比≥3:1，此濃度溶液為檢測限溶液。

1.3.3 線性：取從定量限濃度到標準限度濃度200%之間的5個線性檢測溶液進樣。

1.3.4 耐用性：微調色譜參數（起始柱溫設定為33℃、37℃，流速設定為0.7ml/min、0.9ml/min）及更換色譜柱再分別對標準溶液進行試驗[2]。

實驗結果如下表：

表1 分析結果匯總表

2 實驗結果與結論

標準溶液按照標準方法分析譜圖如下：

圖1 標準溶液圖譜

按實驗結果來看，驗證項目的結果都在可接受標準之內，證明此方法可行，可靠。此方法可以作為甲磺酸甲酯的日常檢測分析。