不同生產企業元胡止痛片質量評價與探索性研究

高宇明，肖開春，劉 森，李華仙，李 丹，吳秀清

（四川省資陽市食品藥品檢驗檢測中心，四川 資陽 641399）

元胡止痛片由醋延胡索、白芷組方，有理氣、活血、止痛功效，臨床主要用于氣滯血瘀的胃痛、脅痛、頭痛及痛經，為常用非處方藥。目前其被收載于2015 年版《中國藥典（一部）》（2020 年版無修訂，簡稱《藥典》）及《國家食品藥品監督管理局藥品補充檢驗方法和檢驗項目批準件2014004》（簡稱《局頒標準》），有糖衣片和薄膜衣片2 種劑型。為了客觀評價其質量，本試驗中從四川省內流通、使用單位中抽取樣本，按法定標準對延胡索及白芷進行薄層鑒別，并測定延胡索乙素及歐前胡素的含量，以及進行染色劑金胺O 等項目檢測，并圍繞藥品的安全性和有效性開展了標準外研究和評價，旨在查找潛在的藥品質量安全隱患。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260 型高效液相色譜儀（配 DAD 檢測器），1200 型高效液相色譜儀（配UV 檢測器），均購自美國Agilent公司；UltiMate 3000 型高效液相色譜儀，配WVD 檢測器（美國 Thermo Fisher 公司）；ICP －mass Spectrometer NexIon 2000 型電子耦合等離子體質譜儀（美國PerkinElmer 公司）；XSE205DU 型電子分析天平（十萬分之一，瑞士Mettler Toledo 公司）；SB25 － 12D 型超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；DZKW－4 型水浴鍋（北京中興偉業世紀儀器有限公司）；DHG 型烘箱（上海精宏實驗設備有限公司）；WARS－XPRESS 型微波消解儀（美國 CEM 公司）；STEHDB －107 －1 型二氧化硫殘留量測定儀（濟南盛泰電子科技有限公司）；Camag Linomat 5 型薄層展開系統（瑞士Camag 公司）。

1.2 試藥

延胡索對照藥材（批號為120928－201609），白芷對照藥材（批號為120945－201510），延胡索乙素對照品（批號為 110726－201819，含量為 99.8%），異歐前胡素對照品（批號為 110827－201812，含量為 99.6%），鹽酸巴馬汀對照品（批號為 110732－201611，含量為86.8%），歐前胡素對照品（批號為 110826 －201818，含量為99.6%），鹽酸小檗堿對照品（批號為110713－201212，含 量 為 86.7% ），金 胺 O 對 照 品 （批 號 為111770－201603，含量為 100.0%），對乙酰氨基酚對照品（批號為 10008 －201610，含量為 99.9% ），阿司匹林對照品（批號為100173－201706，含量為 99.8%），萘普生對照品（批號為 100198－201706，含量為 99.9%），雙氯芬酸鈉對照品（批號為 100334－201803，含量為99.9%），吲哚美辛對照品（批號為 100258 －200904，含量為99.9%），均購自中國食品藥品檢定研究院；延胡索甲素對照品（批號為ST05600120MG，含量≥98.0%），去氫紫堇堿對照品（批號為ST07380120MG，含量≥97.0%），均購自上海詩丹德生物技術有限公司；鎘對照品（批號為 GSB04－1721－2004），鉛對照品（批號為GSB04－1742－2004），砷對照品 （批號為 GSB04－1714－2004），銅對照品（批號為 GSB04－1725－2004），汞對照品（批號為GSB04－1729－2004），均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心；內標溶液（美國PerkinElmer 公司，含鉍、鍺、銦、鋰、鈧、鋱，批號為N9303832，規格均為 10 μg ／mL）；硅膠 G 薄層板（青島海博生物技術有限公司）；甲醇和乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

國家藥品監督管理局數據庫中元胡止痛片批號最多的省份為四川（25 個），故本研究中選取在四川省內流通的元胡止痛片197 批次，覆蓋全國7 個省、自治區、直轄市的共21 家生產企業（主要集中在四川、廣西和河南），排除同廠家同批號樣品后共得樣品100 批，詳見表1。劑型包括糖衣片180 批次（規格為片芯質量0.25 g）、薄膜衣片17 批次（規格為每片質量0.26 g），分別占總批次的 91.37% 和 8.63% 。

表1 各元胡止痛片抽樣批次信息Tab.1 Information of sampling batches of Yuanhu Zhitong Tablets from different manufacturers

對上述21 家生產企業均發函調研，收回14 家生產企業的資料，調研結果顯示，各企業所使用的原輔料不完全相同、部分工藝參數有差異。如處方中醋制延胡索，來源分為外購和自行炮制，且各生產企業執行炮制規范不一致，炮制方法及輔料用量均存在差異。壓片時各企業加入的輔料種類不同，包括硬脂酸鎂和氫氧化鋁，滑石粉或硬脂酸鎂，硬脂酸鎂和羧甲基淀粉鈉等。元胡止痛片為常用止痛類中成藥，存在非法添加化學藥物風險。

2 方法與結果

2.1 延胡索、白芷薄層鑒別

薄層色譜條件及溶液制備參照2015 年版《中國藥典（一部）》［1］。16 家生產企業的 81 批次樣品，需加大取樣量和點樣量才能全部檢出與延胡索對照藥材及白芨對照藥材相應的主斑點，且不同生產企業樣品斑點大小及顏色深淺有一定差異。

2.2 延胡索乙素和歐前胡素含量測定

采用高效液相色譜法測定，色譜條件及溶液制備參照 2015 年版《中國藥典（一部）》［1］規定：“本品每片含醋延胡索以延胡索乙素（C21H25NO4）計，不得少于 75 μg；含白芷以歐前胡素（C16H14O4）計，不得少于 50 μg”。方法學考察結果中，精密度、穩定性、重復性試驗的 RSD 均小于2.0%，延胡索乙素、歐前胡素平均加樣回收率分別為 98.90%和 99.60%，RSD 分別為 0.88%和 1.44%。197 批次樣品均符合規定，結果見表2。不同生產企業的樣品間含量差異較大，A，R 生產企業的樣品中延胡索乙素含量批間差異大，C，D，K，R 生產企業的樣品中歐前胡素含量批間差異大（見圖1），可能是醋延胡索和白芷藥材質量差異大、醋延胡索炮制工藝不一致等原因所致。

2.3 染色劑金胺O 檢測

采用高效液相色譜法檢測，色譜條件及溶液制備參照《局頒布標準》。系統適用性試驗結果表明，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應處有吸收峰，陰性對照無干擾，色譜圖見圖2。方法學考察結果中，精密度、穩定性、重復性試驗的 RSD 均小于2.1%，平均加樣回收率為 100.10% ，RSD 為 1.25% 。有 5 批次（3 個批號）元胡止痛片檢出金胺O，均源于R 生產企業。

表2 樣品含量測定結果（μg／片，n ＝2）Tab.2 Content determination of tetrahydropalmatine and imperatorin in the samples（μg ／table，n ＝ 2）

圖1 樣品含量箱式圖A.Tetrahydropalmatine B. ImperatorinFig.1 Box diagram of tetrahydropalmatine and imperatorin content in the samples

2.4 標準外研究

2.4.1 重金屬及有害元素檢測

按 2015 年版《中國藥典（四部）》通則 2321“鉛、鎘、砷、汞、銅測定法第二法—— 電感耦合等離子體質譜法”檢驗；供試品溶液用微波消解制備。參照2015 年版《中國藥典（一部）》中藥材的限量，197 批次樣品合格率為100.0%。

2.4.2 二氧化硫殘留量檢測

經查閱文獻，延胡索與白芷在加工過程中均存在硫熏現象［2－3］，在產地調研中發現，上述 2 種藥材（尤其是白芷）在產地加工時，加工戶均有使用硫磺熏蒸曬干習慣。硫磺熏蒸會破壞中藥材有效成分，降低療效，在2015 年版《中國藥典（一部）》中也對白芷的二氧化硫殘留量進行了限制。元胡止痛片處方中，30%的白芷為原粉入藥，極易將藥材中的毒性物質引入制劑，而在制劑中未有相關規定，存在安全風險。

本研究中取樣品粉末約5 g，精密稱定，按2015 年版《中國藥典（四部）》二氧化硫殘留量測定法（通則2331）第一法—— 酸堿滴定法檢測［4］，197 批樣品中二氧化硫含量介于0 ～88 mg／kg，其中85 批檢出二氧化硫。參照2015 年版《中國藥典（四部）》通則0212 中“藥材及飲片（礦物類除外）的二氧化硫殘留量不得過150 mg／kg”的規定，按原藥材到制劑中80%轉移率計算，擬訂二氧化硫殘留量限度為不得過40 mg／kg，100 批樣品中有16 批（16%）不合格。

2.4.3 止痛成分［5］檢測

色譜條件：色譜柱為 Waters XSelect HSS T3柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相為 0.05 mol／L 乙酸銨－乙腈，梯度洗脫（0 ～25 min 時 10%→35%乙腈，25 ～ 45 min 時 35% →65% 乙腈，45 ～ 55 min 時 65% →90% 乙腈）；流速為 1.0 mL ／min；檢測波長為 280 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μL。色譜圖見圖3。

溶液制備：稱取對乙酰氨基酚對照品10.11 mg、阿司匹林對照品9.67 mg、萘普生對照品9.77 mg、雙氯芬酸鈉對照品9.82 mg、吲哚美辛對照品9.53 mg，精密稱定，置同一100 mL 棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，即得貯備溶液；精密量取10 mL，置100 mL 棕色容量瓶中，加甲醇定容，即得混合對照品溶液。取樣品6 片，除去包衣，研細，取約 1.0 g，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加甲醇40 mL，超聲（功率250 W，頻率45 kHz）處理1 h，冷卻至室溫，用甲醇定容，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按元胡止痛片處方及工藝制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

圖2 元胡止痛片中金胺O 檢驗高效液相色譜圖1. auramine OA.Blank solution B.Reference solution C. Test solutionFig.2 HPLC chromatograms for determination auramine O in Yuanhu Zhitong Tablets

圖3 止痛成分含量測定高效液相色譜圖1.paracetamol 2.aspirin 3.naproxen 4.diclofenac sodium 5.indomethacinA.Negative reference solution B. Mixed reference solution C.Test solutionFig.3 HPLC chromatograms for content determination of analgesic components

方法學考察：制備系列質量濃度混合對照品溶液，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。以對照品進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積積分值（ Y）為縱坐標進行線性回歸，結果見表3。取混合對照品溶液，依法連續進樣6 次，記錄峰面積，結果對乙酰氨基酚、阿司匹林、萘普生、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛的 RSD 分別為 1.25% ，1.74%，0.74%，0.79% ，0.72% （n ＝6），表明儀器精密度良好。取已知含量的樣品6 份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入不同量的對照品溶液，依法進樣測定，結果各成分的回收率和 RSD 分別為，對乙酰氨基酚 99.00%和 0.81%，阿司匹林 98.01%和 2.48%，萘普生98.79%和0.62%，雙氯芬酸鈉98.58%和0.77%，吲哚美辛 98.12%和 0.65%（n ＝6），表明方法回收率良好。

表3 各止痛成分回歸方程與線性范圍Tab.3 Regression equation and linear range of each analgesic component

樣品測定：取21 家企業生產的100 批元胡止痛片樣品，依法制備供試品溶液，并進樣測定，結果均未檢出對乙酰氨基酚、阿司匹林、萘普生、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛。

3 討論

本研究中，市場流通的元胡止痛片金胺O 檢測合格率達97.46%，僅5 個批次（3 個批號）樣品檢出金胺O，說明通過藥品補充檢驗方法的多年應用，延胡索染色現象得到了較好控制。但通過標準外研究，開展質量分析和評價，顯示目前元胡止痛片質量方面仍存在一些問題，包括標準延胡索薄層鑒別展開系統分離度較差，需改進；部分生產企業的樣品中延胡索薄層鑒別未檢出全部主斑點；指標成分延胡索乙素、歐前胡素含量差異大。分析原因可能有以下幾點：一是原料藥材質量差異。文獻報道顯示，不同產地延胡索有效成分含量差異明顯［6］，炮制前后含量也會產生較大變化［7］。各生產企業執行炮制規范不一致，炮制方法及輔料用量也存在差異。二是部分企業可能存在少投或不投延胡索的違規生產行為。三是生產過程中原料混合不均勻，導致同一生產企業不同批號的含量測定結果差異大。

針對發現的質量問題，建議修訂元胡止痛片中延胡索的薄層鑒別方法；生產企業應嚴格控制原料藥材質量，并按處方和工藝投料生產；中藥制劑含量均勻性問題由多種原因導致［8］，其中之一就是缺乏相關國家標準，而目前已有成熟的中成藥的含量均勻度檢測方法［9－10］，建議國家加快制訂中藥制劑含量均勻度標準；各地監管部門也要加強日常監管，尤其是生產過程的監管。此外，建議關注中成藥中二氧化硫殘留問題。目前對于硫磺熏蒸中藥材質量的研究報道較多［11－12］，但對于中成藥中二氧化硫殘留及其危害相關的研究較少，存在安全風險。