氣相色譜法同時測定甲磺酸伊馬替尼原料藥中7 種有機溶劑殘留量*

鄒 江 ，沈丹丹 ，王 東 ，王建華 ，羅立駿 △，曾令高

（1. 重慶市食品藥品檢驗檢測研究院·麻醉精神藥品質量監測重點實驗室，重慶 401121； 2. 重慶大學生物工程學院，重慶 400044）

甲磺酸伊馬替尼是全球首個獲批的小分子酪氨酸激酶抑制劑，其對 BCR － ABL 酪氨酸激酶［1－3］、血小板衍生生長因子受體［4］和 c － kit 酪氨酸激酶［5］有高度特異性，且不影響正常造血干細胞的生長。人用藥品注冊技術要求國際協調會議《殘留溶劑的指導原則》（Q3C）指出，殘留溶劑是指原料藥（API）、輔料及制劑的生產過程中使用過的溶劑，通過分離、純化等步驟不能保證完全將其除去，通常是指有機溶劑。20 世紀90 年代，殘留有機溶劑的毒性及致癌作用引起了各國研究機構和監管部門的重視，將其作為藥品質量控制的一個重要內容。甲磺酸伊馬替尼原料藥在其合成、晶型制備等過程中使用了多種有機溶劑［6－9］，如二類溶劑甲醇、四氫呋喃、N，N－二甲基甲酰胺（DMF），三類溶劑乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯，均對人體和環境具有潛在毒性，甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 的限度分別為 0.3% ，0.5% ，0.5% ，0.5% ，0.5%，0.072% ，0.088%［10］。本研究中參照 2020 年版《中國藥典（四部）》通則 0861 殘留溶劑測定法［11］，建立了毛細管氣相色譜法同時測定甲磺酸伊馬替尼原料藥中上述7 種有機溶劑含量，并進行了方法學研究。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7890B 型氣相色譜儀，包括FID 檢測器（美國Agilent公司）；XPE205 型電子分析天平（瑞士 MettlerToledo 公司）。

1.2 試藥

甲磺酸伊馬替尼原料藥（石藥集團歐意藥業有限公司，批號分別為 695171257，695180104，695180203）；乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜均為分析純，甲醇、四氫呋喃、DMF 均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯－94%二甲基硅氧烷為固定液的 Agilent DB － 624 型毛細管柱（30 m × 320 mm，1.8 μm）；程序升溫：初始溫度為 45 ℃，保持 4 min，再以 15 ℃ ／min 的速率升至 200 ℃ ，保持 2 min；載氣：氮氣；流速：2 mL ／min；進樣口溫度：220 ℃，分流比：15 ∶1；檢測器：火焰離子化檢測器；檢測器溫度：250 ℃；氫氣流量：40 mL ／min；空氣流量：400 mL ／min；進樣量：1 μL。

2.2 溶液制備

取甲醇 3.010 3 g、乙醇 5.023 9 g、丙酮 5.015 5 g、異丙醇 5.007 6 g、乙酸乙酯 5.223 9 g、四氫呋喃 0.743 2 g、DMF 0.921 0 g，精密稱定，分別置 100 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜定容，搖勻，各精密量取5 mL，置同一50 mL容量瓶中，用二甲基亞砜定容，即得混合對照品貯備液，精密量取5 mL，置50 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜定容，即得混合對照品溶液。取甲磺酸伊馬替尼約1 g，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜溶解并定容，搖勻，即得供試品溶液。取二甲基亞砜作為空白溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗：取2.2 項下空白溶液和混合對照品溶液各適量，按2.1 項下色譜條件進樣分析，色譜圖見圖1。甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 依次出峰，分離度均大于1.5，基線分離良好；空白溶液在與上述7 種對照品溶液相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。

線性關系考察：精密量取2.2 項下混合對照品貯備液0.25，1.00，2.50，5.00，7.50，10.00 mL，分別置 50 mL容量瓶中，用二甲基亞砜定容，搖勻，制成系列溶合對照品溶液，取適量，按2.1 項下色譜條件進樣測定，以峰面積（A）為縱坐標、各成分質量濃度（C，mg／mL）為橫坐標進行線性回歸。結果見表1。

檢測限考察：精密量取2.2 項下混合對照品貯備液0.5 mL，置100 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜定容，搖勻，按 2.1 項下色譜條件進樣測定，以信噪比（S ／ N）＝3 計算檢測限。結果見表1。

圖1 氣相色譜圖1.methanol 2.ethanol 3. acetone 4.isopropanol 5. tetrahydrofuran 6.ethyl acetate 7.dimethylformamideA.Blank solution B.Mixed reference solutionFig.1 GC chromatograms

表1 7 種有機溶劑的線性范圍、回歸方程、檢測限Tab.1 Linear range，regression equation and LOD of seven organic solvents

精密度試驗：取 2.2 項下混合對照品溶液，按2.1 項下色譜條件連續進樣6 次，記錄峰面積。結果甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 峰面積的 RSD 分別為 1.72% ，2.03% ，2.20% ，2.22% ，2.12%，2.04%，4.91%（n ＝ 6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取2.2 項下混合對照品溶液適量，室溫下放置 0，2，4，8，12 h 后，按 2.1 項下色譜條件進樣測定，計算各成分峰面積。結果甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 的 RSD 分別為4.37%，6.95% ，8.32% ，14.94% ，4.72% ，7.22% ，11.57%（ n ＝5），表明對照品溶液室溫下放置8 h 內相對穩定。

加樣回收試驗：取甲磺酸伊馬替尼約0.5 g，精密稱定，置5 mL 容量瓶中，共9 份，分別加入約相當于各成分限度50%，100%，150%的混合對照品溶液，用二甲基亞砜定容，平行3 份，按2.1 項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表2。

2.4 樣品含量測定

取3 批原料藥，按2.1 項下色譜條件進樣測定。結果7 種殘留有機溶劑含量測定結果均低于檢測限。

3 討論

DMF 的沸點很高，不宜采用頂空進樣法，采用直接進樣法靈敏度高，精密度及重復性好。選擇溶劑時，由于四氫呋喃、DMF 限度要求較低，對靈敏度要求高，因此需制備的樣品質量濃度很高。樣品僅在水、二甲基乙酰胺、二甲基亞砜中的溶解度滿足要求，若采用二甲基乙酰胺為溶劑，會對DMF 的檢測產生較大干擾，同時考慮到直接進樣，以水為溶劑影響色譜柱使用壽命，故采用二甲基亞砜為溶劑。選擇色譜柱時，本研究中涉及的有機溶劑極性差異較大，采用常見的非極性和弱極性色譜柱 HP －1（30 m × 0.25 mm，1.0 μm）和HP － 5（30 m ×0.25 mm，1.0 μm），發現丙酮和異丙醇難以實現基線分離；采用強極性色譜柱 DB－WAX（30 m×0.25 mm，0.25 μm），HP － Innowax（30 m × 0.25 mm，0.5 μm），HP － Innowax（30 m × 0.32 mm，0.5 μm），異丙醇和乙醇的分離度均不佳。同時發現，使用上述色譜柱時均存在不同程度的空白干擾。選用中等極性色譜柱DB － 624，能實現對各組分的良好分離，未發現空白干擾。

本研究中建立了同時測定甲磺酸伊馬替尼中7 種殘留溶劑含量的方法，3 批樣品的檢測結果均符合有關規定。所建立的方法操作簡便、快速，靈敏度及回收率均較高，可為制訂及完善甲磺酸伊馬替尼原料藥相關法定標準提供參考。

表2 加樣回收試驗結果（n ＝9）Tab.2 Results of the recovery test（n ＝ 9）