育齡男女地貧基因檢測(cè)與血液學(xué)表型的關(guān)系

溫凱純 溫錦才 杜淑嫻 鄭博弘

廣東省普寧市婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心檢驗(yàn)科 515300

地中海貧血(地貧)為珠蛋白生成障礙性貧血，主要是因遺傳基因缺陷使血紅蛋白中一種或多種珠蛋白鏈合成缺陷而導(dǎo)致的貧血或病理狀態(tài)，目前尚無(wú)根治方法，且中重型地貧治療預(yù)后不佳，因此需在婚前及孕前進(jìn)行基因篩查，以減少地貧患兒的出生。相關(guān)報(bào)道指出，不同地貧基因型患者的血液學(xué)表型存在差異，但目前尚無(wú)報(bào)道明確指出患者基因型與血液學(xué)表型的關(guān)系[1]。故本研究通過(guò)對(duì)普寧市地貧孕齡夫婦進(jìn)行基因檢測(cè)及血液學(xué)表型分析，旨在探究育齡男女地貧基因檢測(cè)與血液學(xué)表型的關(guān)系，為制定可行的人群干預(yù)計(jì)劃及早期檢測(cè)方案奠定基礎(chǔ)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月30日—2019年12月31日到我院進(jìn)行地中海貧血項(xiàng)目檢測(cè)的育齡男女3 820例；年齡20～38歲，平均年齡(29.16±3.61)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)我院倫理委員會(huì)審核通過(guò)，患者知情且簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：重大傳染性疾病患者；惡性腫瘤患者；其他血液疾病患者；慢性代謝疾病患者。

1.2 方法 (1)血樣采集：由專業(yè)人員按照我院血液采集標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行血液采集，每位患者采集空腹靜脈血2ml。(2)血液檢測(cè)：應(yīng)用Sysmex XT-2000i 進(jìn)行血細(xì)胞分析，檢測(cè)紅細(xì)胞平均體積(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(MCH)、血紅蛋白A2(HbA2)。取MCV<82fl或者M(jìn)CH<27pg為地中海貧血初篩陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)[2]。(3)應(yīng)用 Sebia Capillarys2 FP測(cè)定HbA2及HbF。如HbA2<2.5%判為疑似α地貧攜帶者，如HbA2>3.5%，則判為疑似β地貧攜帶者。將上述篩查結(jié)果陽(yáng)性者進(jìn)行基因檢測(cè)以確診。(4)基因檢測(cè)：嚴(yán)格按照核酸提取操作說(shuō)明書(shū)提取DNA，并放置于-20℃環(huán)境中保存?zhèn)溆茫捎贸敝輨P普公司提供的α-及β-地貧基因診斷試劑盒，PCR反應(yīng)條件α為：95℃預(yù)熱15min，熱處理98℃40s、64℃70s、72℃150s，共35個(gè)循環(huán)，β為：94℃預(yù)熱3min，熱處理94℃30s、55℃30s、72℃30s，共40個(gè)循環(huán)。采用Cap-PCR技術(shù)檢測(cè)α-地貧基因，α-地貧的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]為患者存在SEA/αα基因、-α3.7/αα基因、-α4.2/αα基因缺失或ααQS/αα基因、ααCS/αα基因、ααWS/αα基因突變；采用RDB-PCR技術(shù)檢測(cè)β-地貧基因，β-地貧的診斷標(biāo)準(zhǔn)為患者存在16種常見(jiàn)基因突變。

1.3 觀察指標(biāo) (1)統(tǒng)計(jì)檢查結(jié)果，分析地貧基因突變類(lèi)型。(2)血液學(xué)表型參數(shù)：比較不同地貧基因類(lèi)型患者M(jìn)CV、MCH、HbA2分布情況，分析不同血液學(xué)表型參數(shù)對(duì)α型地貧基因的診斷價(jià)值。(3)分析α型地貧基因與血液學(xué)表性參數(shù)變化的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分比(%)表示，用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；采用多元Logistics回歸分析α型地貧基因與血液學(xué)表性參數(shù)變化的關(guān)系；采用ROC曲線分析不同血液學(xué)表型參數(shù)對(duì)α型地貧基因的診斷價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 基因檢查結(jié)果分析 α型地中海貧血的構(gòu)成比高于β型、α/β復(fù)合型(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 基因檢查結(jié)果分析

2.2 不同地貧基因類(lèi)型患者血液學(xué)表型參數(shù)分布情況 α型地貧患者的MCV、MCH高于β型、α/β復(fù)合型，HbA2低于β型、α/β復(fù)合型(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同地貧基因類(lèi)型患者血液學(xué)表型參數(shù)分布情況

2.3 不同血液學(xué)表型參數(shù)對(duì)α型地貧基因的診斷價(jià)值分析 MCH、HbA2診斷α型地貧基因的AUC>MCV(P<0.05)，見(jiàn)表3、圖1。

表3 不同血液學(xué)表型參數(shù)對(duì)α型地貧基因的診斷價(jià)值分析

圖1 不同血液學(xué)表型參數(shù)診斷α型地貧基因的ROC曲線分析

2.4 α型地貧基因與血液學(xué)表性參數(shù)變化的關(guān)系分析 α型地貧基因與血液學(xué)表性參數(shù)變化無(wú)關(guān)(P>0.05)，見(jiàn)表4。

表4 α型地貧基因與血液學(xué)表性參數(shù)變化的關(guān)系分析

3 討論

國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道指出，α型為地中海貧血的主要基因突變類(lèi)型[4]。本研究經(jīng)檢驗(yàn)，α型地中海貧血的構(gòu)成比高于β型、α/β復(fù)合型，這表明α型地中海貧血為地貧的主要類(lèi)型，與上述研究結(jié)果相同。β型地中海在地中海貧血的三種類(lèi)型中危害最大，也是我國(guó)南方最常見(jiàn)的常染色體遺傳病之一。一旦患兒出現(xiàn)重癥β-地貧，只能通過(guò)不斷輸血進(jìn)行治療，但輸血無(wú)法從根本上治愈β-地貧，只能延緩疾病進(jìn)展，延長(zhǎng)患兒生命，而造血干細(xì)胞移植為目前唯一一種可以起到治愈效果的治療手段，但尋求合適配型的難度較大，且造血干細(xì)胞移植治療費(fèi)用過(guò)高，一般家庭難以承受，進(jìn)而會(huì)增加患兒病死率。本研究發(fā)現(xiàn)，β型地貧在地中海貧血患者中的占比為28.03%，高于廣東省平均水平的21.08%，這表明本市應(yīng)加強(qiáng)β型地貧的篩查，完善β型地貧突變圖譜，并嚴(yán)格對(duì)適齡人群進(jìn)行婚前及產(chǎn)前體檢，對(duì)攜帶致病基因的人群進(jìn)行遺傳咨詢和婚配指導(dǎo)，以有效減少β型地貧患兒的出生。

α型地中海貧血是一組常染色體不完全顯性遺傳型慢性溶血疾病，主要是因?yàn)棣林榈鞍谆蛉毕荩瑢?dǎo)致α珠蛋白肽鏈與β珠蛋白肽鏈合成速率不平衡，導(dǎo)致幼紅細(xì)胞利用鐵發(fā)生障礙，紅細(xì)胞參數(shù)發(fā)生變化。本研究發(fā)現(xiàn)，α型患者的MCV、MCH高于β型、α/β復(fù)合型，HbA2低于β型、α/β復(fù)合型，說(shuō)明α型地貧基因患者的血液學(xué)表型不同于β型、α/β復(fù)合型，提示或可通過(guò)檢測(cè)患者血液學(xué)表型來(lái)對(duì)地貧基因類(lèi)型進(jìn)行判斷，為此，筆者進(jìn)行了進(jìn)一步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MCH、HbA2診斷α型地貧基因的AUC>MCV，且均>0.75，說(shuō)明MCH、HbA2對(duì)α型地貧基因具有診斷價(jià)值，故可通過(guò)檢測(cè)MCH、HbA2對(duì)地貧基因類(lèi)型進(jìn)行初步判斷。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，α型地貧基因與血液學(xué)表性參數(shù)變化無(wú)關(guān)，與既往研究結(jié)果存在差異[5-6]，這可能與不同地貧基因類(lèi)型患者的人數(shù)比例不均有關(guān)，故后期需調(diào)整各地貧基因型患者人數(shù)比例以進(jìn)一步分析地貧基因與血液學(xué)表性參數(shù)變化的關(guān)系。

綜上所述，α型地中海貧血為普寧市地中海貧血的主要類(lèi)型，且MCH、HbA2對(duì)α型地貧基因具有診斷價(jià)值，表明可通過(guò)MCH、HbA2診斷α型地貧基因。