細胞角蛋白CK14和CK18在早期宮頸癌中的表達及意義分析

馬延偉

河南省葉縣人民醫院婦產科 467200

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤，高發于絕經后女性，近年來發病呈年輕化趨勢[1]。臨床分期Ⅰa～Ⅱa期的宮頸癌患者以手術治療為主，預后較好，但部分患者病情進展快，預后不理想[2]。目前臨床中對宮頸癌診斷的分子標志物較多，但能夠用于早期病情進展及預后評估的分子標志物很少[3]。細胞角蛋白(CK)是一類細胞中間絲蛋白，已發現54種基因型，人體不同類型上皮細胞中表達不同基因型的細胞角蛋白，腫瘤組織中細胞角蛋白表達可用于患者診斷及預后評估[4]。研究者發現，CK14低表達可能與胃癌患者術后癥狀復發有關[5]；CK18表達與乳腺癌患者預后明顯相關[6]。本文比較了正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤變組織、早期宮頸癌組織中CK14、CK18表達水平，分析其與早期宮頸癌患者病理指標的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017年1月—2018年6月在本院行宮頸手術切除樣本的石蠟切片。根據病理檢查結果分為正常宮頸組30例，宮頸上皮內瘤變組30例(低級別瘤變15例、高級別瘤變15例)，早期宮頸癌組60例。納入標準：(1)病理組織活檢確診為早期宮頸癌；(2)病理確診為宮頸上皮內瘤變組織者未合并其他系統腫瘤；(3)正常宮頸組織為距離病灶3cm的癌旁組織。排除標準：(1)有免疫系統疾病，近3個月有免疫治療史；(2)臨床資料不完整者。本研究經醫院倫理委員會批準，患者簽署知情同意書。

1.2 方法 組織標本經10%甲醛溶液固定后石蠟包埋，4μm連續切片，經脫蠟至水后高溫、高壓修復抗原，滴加鼠抗人CK14單克隆抗體(1∶300)、鼠抗人CK18單克隆抗體(1∶300)，4℃過夜，磷酸緩沖液洗滌后滴加HRP標記的山羊抗鼠IgG(1∶2 000)，室溫下孵育30min，加DAB顯色10min、蘇木素復染、脫水、封片，置于光學顯微鏡下觀察。檢測試劑購于上海群己生物科技有限公司。

1.3 評價標準 取5個高倍鏡視野，各計數200個細胞，黃色或棕黃色顆粒為陽性染色，陽性細胞占細胞總數比例：≤5%、6%～25%、26%～50%、51%～74%、≥75%依次記0～4分。細胞染色強度：無色、黃色、棕黃色、黃褐色分別記0～3分。二者評分相乘后0～3分為陰性，4分及以上為陽性。

2 結果

2.1 各組CK14和CK18表達情況分析 CK14陽性表達于細胞質，在正常宮頸組織中表達于棘細胞層與顆粒層之間，見圖1。正常宮頸組、宮頸低級別上皮內瘤變組、宮頸高級別上皮內瘤變組、早期宮頸癌組CK14陽性率比較差異有統計學意義(P<0.01)；CK14陽性率與宮頸病變程度呈負相關(r=-0.426，P<0.01)。CK18陽性表達于細胞質，在正常宮頸組織中無表達，在宮頸低級別上皮內瘤變組織中表達于基底層上部，在宮頸高級別上皮內瘤變組織中表達于基底層中上部，見圖2。在宮頸癌組織中完全覆蓋鱗狀上皮層CK18陽性率之間差異有統計學意義(P<0.01)；CK18陽性率與宮頸病變程度呈正相關(r=0.704，P<0.01)。見表1。

圖1 CK14在不同宮頸組織中的表達(SP法，×100)

圖2 CK18在不同宮頸組織中的表達(SP法，×100)

表1 各組CK14和CK18陽性表達率比較[n(%)]

2.2 CK14、CK18表達與宮頸癌患者臨床病理特征的關系 不同病理類型、組織分化程度、淋巴結轉移情況的宮頸癌患者CK14陽性率比較差異有統計學意義(P<0.05)；其中腺鱗癌CK14陽性率最高，其次為鱗癌，腺癌最低；組織分化中等的CK14陽性率明顯高于低分化者；無淋巴結轉移的CK14陽性率明顯高于有淋巴結轉移者。不同病理類型、組織分化程度的宮頸癌患者CK18陽性率比較,差異有統計學意義(P<0.05)；其中鱗癌和腺癌CK18陽性率明顯高于腺鱗癌，組織分化中等的CK18陽性率明顯低于低分化者。見表2。

表2 CK14、CK18表達與宮頸癌患者臨床病理特征關系[n(%)]

3 討論

細胞角蛋白屬于細胞骨架的中間絲蛋白家族，在細胞分化各階段和不同類型上皮細胞中表達存在差異。研究者發現，細胞角蛋白具有組織特異性和高度保守性，與上皮角質細胞活性明顯相關，在維持上皮細胞形態及功能中發揮重要作用[7]。相關研究顯示，細胞角蛋白CK14在非小細胞肺癌、胃癌、食管鱗狀細胞癌等多種惡性腫瘤組織中均存在表達，但與腫瘤病變程度的關系不一致，在非小細胞肺癌、胃癌組織中CK14陽性率與病變程度呈正相關，在食管鱗狀細胞癌中CK14陽性率與病變程度呈負相關[8-9]。本文結果顯示，細胞角蛋白CK14陽性表達于細胞質，隨著宮頸病變程度的增加CK14陽性表達率逐漸下降，提示CK14低表達可能為宮頸表皮細胞惡性轉變的一個特異性標志物。進一步分析顯示，宮頸癌患者CK14陽性率與宮頸癌患者病理類型、組織分化程度、淋巴結轉移情況明顯相關，CK14陽性率越高宮頸癌組織分化程度越高，淋巴結轉移率越低，預后越好。

研究者發現，CK18廣泛表達于乳腺癌、胃腸道癌等多種惡性腫瘤，能夠用于鑒別腺癌和鱗癌，可作為輔助診斷乳腺癌和胃癌的分子生物標志物[10]。本文中細胞角蛋白CK18陽性表達于細胞質，在正常宮頸組織中不表達，陽性表達率與宮頸癌惡性程度呈正相關，表明CK18高表達能夠提示宮頸表皮細胞惡性轉變。同時，鱗癌和腺癌CK18陽性率明顯高于腺鱗癌，組織分化中等的CK18陽性率明顯低于低分化者，說明CK18在一定程度上能夠預測宮頸病變的發展趨勢，CK18陽性表達的宮頸癌患者未來病情可能進一步發展，而陰性表達患者病情發展的可能性較小。但CK14、CK18對宮頸癌病情發展和預后的預測價值仍需進一步大樣本長期隨訪研究。