養殖實訓場主要病原菌耐藥性檢測

張業懷

（廣西農業職業技術學院，廣西 南寧 530007）

隨著養殖實訓場飼養動物的種類、數量及排泄物不斷增多，隨之帶來的是環境污染、動物發病增多，抗生素長期使用導致病原菌耐藥性產生嚴重。為了更好地防控動物疫病發生，減少環境污染，降低病原菌耐藥風險，以廣西農業職業技術學院養殖實訓場為調研對象，對養殖實訓場環境中細菌種類及主要病原菌污染及耐藥情況進行調查研究，以期為養殖實訓場的環境控制和臨床用藥提供科學指導。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株

選取廣西農業職業技術學院養殖實訓場前期調查研究分離鑒定獲得的具有致病性作用的大腸桿菌（6 株）、沙門氏菌（5 株）、葡萄球菌（12 株）和不動桿菌（6株）共29株。

1.2 培養基及藥敏紙片

普通瓊脂培養基、肉湯培養基由本實驗室提供；16 種抗生素藥敏紙片（見表1、3），均購自杭州微生物試劑公司。

1.3 試驗菌株的藥敏性檢測

采用藥敏紙片瓊脂擴散法對種4 主要病原菌進行藥敏試驗，即將各種病原菌接分別接種肉湯培養基，37℃培養24h，然后用滅菌生理鹽水稀釋，用細菌平板計數法測定并稀釋成含菌量為1×106菌懸液，用滅菌棉簽均勻涂布于普通瓊脂平板上，每個平板均勻地貼5 張藥敏紙片于培養基上，置37℃培養24～48h，分別用游標卡尺測量抑菌圈直徑，每株菌做2個重復，判定標準參照美國臨床實驗室標準化協會（CLSI，2013）推薦的標準，分析4 種主要病原菌的耐藥情況。耐藥率是按同一種細菌的耐藥株數除以總株數×100%來計算。

2 結果與分析

2.1 4種病原菌耐藥性試驗

將4 種病原菌（29 株）對16 種抗生素藥敏試驗結果列于表1，從表1可看出，29株細菌對紅霉素、鏈霉素、卡那霉素、青霉素的耐藥率均較高，分別為86.21%（25/29）、89.66%（26/29）、96.55%（28/29）、79.31%（23/29）；對頭孢噻肟、吡哌酸、恩諾沙星、左氟沙星、環丙沙星、先鋒霉素和丁胺卡那霉素敏感，其中吡哌酸和頭孢噻肟對4 種主要病原菌未檢出耐藥菌株。

表1 養殖場4種主要病原菌耐藥率

2.2 4種病原菌多重耐藥性檢測

將4 種病原菌對多種抗菌素耐藥的結果進行統計列于見表2，結果表明：4 種病原菌均存在多重耐藥菌株，其中，耐3 種抗生素以上的菌株占86.21%（25/29），耐6 種抗生素以上的菌株占44.83%（13/29），耐9 種抗生素的菌株為4 株，所占比例13.79%（4/29）（見表2）。但不同菌種的菌株多重耐藥現象存在差異，其中大腸桿菌、沙門氏菌和葡萄球菌的所有菌株均具有多重耐藥性。

表2 養殖場4種主要病原菌的多重耐藥性

2.3 不同環境中病原菌的耐藥性

將不同來源菌株進行耐藥性比較，結果顯示，空氣、水和土壤中的主要病原菌對抗菌藥物的平均耐藥率為30.31%、57.50%、17.91%，水樣本中的分離菌株耐藥性最強（見表3）。

表3 養殖場不同環境來源菌株的耐藥性

3 討論與結論

在養殖過程中，抗菌藥物的大量使用或使用不合理，容易導致細菌產生耐藥性，往往是從對藥物敏感逐漸變為耐藥，由耐一種藥物到耐多種藥物［1］。隨著耐藥菌株增多及耐藥譜越來越廣，一些在獸醫臨床上未使用的新型抗菌藥物也表現出很強的耐藥性［2］。本課題研究發現，養殖實訓場的空氣、水體及土壤中存在大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、不動桿菌、變形桿菌、蠟樣芽胞桿菌、產氣莢膜梭菌、破傷風桿菌和李氏桿菌等多種致病菌或條件致病菌，其中以大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、不動桿菌為主。

大腸桿菌和沙門氏菌是養殖實訓場動物腸道常見的主要病原菌，采用抗菌藥物聯合用藥進行治療，一般能得到很好的控制。但如用藥不規范或者存在耐藥菌株，會導致治療效果差及治療成本增加，給養殖實訓場造成經濟損失。同時長期使用或濫用抗菌藥物會造成細菌的耐藥進而發生耐藥基因的轉移，給人類健康造成威脅［4］。研究試驗結果表明，不同的樣本、不同來源的大腸桿菌和沙門氏菌菌株對藥物敏感存在較大差異，且以沙門氏菌耐藥性最高，平均耐藥率為45%，這可能與養殖實訓場平常預防和治療使用抗菌藥物的種類、次數及作為促生長的飼料添加劑長期使用有關。調查發現，該養殖實訓場除了承擔教學實習功能外，也是學生養殖實踐基地。學生為了預防疾病和促進養殖動物的生長，平時常用一些抗菌藥物作為飼料添加劑。大腸桿菌和沙門氏菌對頭孢噻肟、吡哌酸、恩諾沙星、左氟沙星、環丙沙星、先鋒霉素和丁胺卡那霉素敏感。

葡萄球菌廣泛分布于自然界中，是養殖實訓場中繼發感染及外科感染的主要病原菌，常引發皮膚感染滲出性皮炎、蜂窩組織炎、乳房炎、關節腫大和膿腫及全身感染如敗血癥、膿毒癥等。據原衛生部2004～2005 年《細菌耐藥性監測網》報告指出，我國的葡萄球菌特別是金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性葡萄球菌耐藥性都在60%以上［5］，本課題研究發現，葡萄球菌廣泛分布于養殖實訓場的空氣、水體及土壤中，分離率在41%（12/29）以上，在動物群高密度飼養、氣候悶熱及轉群和運輸等應激下，容易發生葡萄球菌病。研究試驗結果表明，12 株葡萄球菌對紅霉素、鏈霉素、卡那霉素、青霉素嚴重耐藥，但對頭孢噻吩、吡哌酸、恩諾沙星、環丙沙星、左氟沙星和氨卞西林敏感，因此在發生此類疾病時可考慮使用這些敏感藥物進行治療。

不動桿菌是一類不發酵糖類、氧化酶陰性、無鞭毛、無動力的革蘭氏陰性桿菌，在自然界分布廣泛，是重要的病原菌，能導致動物發生奶牛子宮內膜炎、仔豬肺部感染及馬流產等疾病［6］。本試驗結果表明所分離的不動桿菌對鏈霉素和卡那霉素耐藥，對頭孢噻吩、恩諾沙星、吡哌酸、阿奇霉素、丁胺卡那霉素、左氟沙星和新霉素敏感。

研究發現，飼料添加劑中濫用抗菌藥物、發生細菌性腸道疾病的動物的排泄物沒經過無害化處理直接進入環境水體中，已經成為耐藥菌株產生的重要源頭，因此養殖實訓場應嚴格做好糞污無害化處理，同時要做好欄舍清潔衛生、定期全面消毒、不定期開展細菌耐藥性監測等，指導首選敏感抗菌藥物進行疾病治療，防止過度用藥，同時做好免疫接種工作等，只有這樣才能有效預防耐藥菌的產生。

綜上所述，通過對本校養殖實訓場分離菌株進行耐藥性監測結果顯示，本校養殖實訓場分離菌株耐藥性比較嚴重，該監測結果可為養殖實訓場的用藥提供依據，同時指導制定防護策略。另外，本研究只選擇了空氣、水和土壤中的主要病原菌進行耐藥性分析，但對養殖實訓場環境中存在的變形桿菌、蠟樣芽胞桿菌、產氣莢膜梭菌、破傷風桿菌和李氏桿菌等多種致病菌或條件致病菌還未進行耐藥性檢測，因此有必要開展進一步檢測工作，以便更全面指導臨床用藥，為保護公共衛生安全提出更為合理的防護建議。