TOC法測定清潔驗證中鹽酸林可霉素殘留量

張友冬

摘 要 目的：驗證總有機碳法測定鹽酸林可霉素清潔殘留物的準確性。方法：根據總有機碳法中測定值與濃度正相關的特性來判定林可霉素殘留量。結果：該檢驗方法在0.5～2.0 μg/ml濃度范圍有較好的線性關系，相關系數R2=0.998 6，檢測限與定量限分別為0.504 9 和1.530 3 μg/ml，最低擦拭回收率為73.5%。結論：該方法簡便、快捷、準確，適合林可霉素注射液生產結束清潔后殘留量的檢測。

關鍵詞 總有機碳法 林可霉素 清潔殘留 驗證 方法學

中圖分類號：R951 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2021）09-0067-04

Determination of lincomycin hydrochloride residue in cleaning verification by TOC method

ZHANG Youdong*

（Shanghai Sine-Jinzhu Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 201506， China）

ABSTRACT Objective： To validate the accuracy of determination of lincomycin hydrochloride residue after cleaning by total organic carbon （TOC） method. Methods： The residue concentrations were determined based on the positive correlation between the measured value and the concentration in the TOC method. Results： A good linear relationship was shown when lincomycin hydrochloride concentrations were in the range of 0.5-2.0 mg/ml， with correlation coefficient R2=0.998 6. The limits of detection and quantification were 0.504 9 and 1.530 3 mg/ml， with minimum wipe recovery rate 73.5%. Conclusion： This method is simple， quick and accurate and is suitable for the detection of the cleaning residue after lincomycin hydrochloride production.

KEy WORDS total organic carbon method； lincomycin hydrochloride； cleaning residue； validation； methodology

藥品的生產過程中，由于不同產品共用一條生產線，因此在更換產品時如不注意極易造成微量交叉污染，需要對生產條線重新進行清潔驗證，其前提是需要有合適的方法對目標化合物進行檢驗，即檢驗分析方法學驗證。在我們的生產線上，根據產品清潔的難易程度及綜合溶解度和濃度檢測[1]，發現鹽酸林可霉素是最難清潔的殘留藥物。按照清潔驗證分別采用MTDD法、10 ppm法和LD50法[2]進行計算，選擇最低殘留濃度為≤1.72 mg/ml，在此殘留濃度下我們通過HPLC方法測試，無法滿足方法學驗證要求，通過對總有機碳（TOC）法測定林可霉素殘留物的分析方法驗證開發[3]，以保證數據的準確性。

1 材料和方法

1.1 儀器

HTY-DI1500總有機碳分析儀（浙江泰林生物技術有限公司）；BASA124S分析天平（賽多利斯科學儀器有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸林可霉素標準品（批號130432-201911）、蔗糖標準品（批號111507-201704）和1，4-對苯醌標準品（101197-201904）均購自中國食品藥品檢定研究院。

1.3 方法

根據《藥品生產驗證指南》采用10 ppm法，以日治療量的1/1 000及基于毒性半數致死量確認最低殘留檢測限度為1.72 mg/ml，用鹽酸林可霉素標準品（以C18H37N5O9計）配制成一系列不同濃度的標準溶液，用總有機碳（TOC）測試儀檢測不同濃度溶液所對應的TOC響應值，將所測得的TOC響應值和鹽酸林可霉素濃度關系式建立TOC測定值與鹽酸林可霉素含量之間的線性關系[4-8]。

1.3.1 系統適用性實驗

使用蔗糖標準品（111507-201704）配制成質量濃度為0.5 mg/L的蔗糖標準品溶液，作為易氧化的有機物，并測定其響應值（Rs）。使用1，4-對苯醌標準品（101197-201904）配制成質量濃度為0.5 mg/L的1，4-對苯醌標準溶液，作為系統適用性難氧化的有機化合物，并測定其響應值（Rss）。同時測定用于配制兩瓶標準溶液的空白試劑注射用水的響應值（Rw）。當響應效率R=（Rss-Rw）/（Rs-Rw）×100%達到85%～115%，則符合要求。

1.3.2 鹽酸林可霉素的校準曲線

用注射用水配制鹽酸林可霉素標準品母液的質量濃度為100 mg/ml，然后稀釋成系列供試液，測定每種濃度的溶液總有機碳值，并將林可霉素溶液濃度為橫坐標、總有機碳值為縱坐標作線性圖。

1.3.3 擦拭回收率

稱取林可霉素標準品適量，用注射用水分別配制成質量濃度為68.8、86.0、103.2 mg/ml的鹽酸林可霉素溶液。

分別精密量取上述溶液1.0 ml，均勻涂布在劃有多個與設備表面材質相同的10 cm×10 cm方塊的不銹鋼板上，每種濃度各涂3塊，于40 ℃恒溫干燥箱中烘干6 h后取出，放冷。用潤濕的棉簽用力且平穩緩慢地逐一擦拭10 cm×10 cm方塊的不銹鋼板表面，在向前移動的同時將其從一邊移到另一邊并覆蓋整個表面，翻轉棉簽頭，將棉簽頭的另一面也在10 cm×10 cm方塊的不銹鋼板表面上與前次方向垂直擦拭整個表面（圖1）。擦拭完后將棉簽頭小心剪下，分別置50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

1.3.4 準確度

分別精密量取上述68.8、86.0、103.2 mg/ml三種濃度的林可霉素溶液1.0 ml各3份，置于50 ml量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，搖勻。按照TOC測試儀操作規程，測試低、中、高3個濃度的標準溶液樣品的TOC值。

1.3.5 精密度

精密量取上述86.0 mg/ml的鹽酸林可霉素溶液5 ml置于250 ml量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，搖勻。按照TOC測試儀操作規程，連續測試理論濃度為1.72 mg/ml的標準溶液樣品6次，記錄TOC值。

2 結果

2.1 儀器性能確認

系統適用性實驗結果表明0.5 mg/L蔗糖標準品溶液與1，4-對苯醌標準溶液響應效率分別為98.9%與98.6%，符合響應效率R達到85%～115%要求（表1）。

2.2 鹽酸林可霉素的校準曲線

采用TOC法測定不同濃度下的鹽酸林可霉素溶液總有機碳值，將表2數據經線性回歸分析，其回歸方程y=0.356 8x+0.054 6，R2=0.998 6，相關系數R2>0.98[2]。檢測限：LOD=3.3 SD/B；定量限：LOQ=10 SD/B（SD為校正曲線的截距作為標準差；B為校正曲線的斜率）[3]。通過計算得出檢測限和定量限分別為0.504 9和1.530 3 mg/ml，表明這兩者均低于鹽酸林可霉素注射液實際殘留檢測限度。

按照TOC測試儀操作規程，測試供試品的TOC值。由于配制鹽酸林可霉素溶液含有試劑空白水和鹽酸林可霉素標準品中的有機雜質，所以直接用線性關系式計算鹽酸林可霉素濃度，棉簽、鋼板、試管、及鹽酸林可霉素中有機雜質遠遠低于空白試劑注射用水的TOC值，故忽略不計。當y=0時，x=0.153 mg/L即為標準溶液配制背景TOC含量，來源于空白試劑水及鹽酸林可霉素標準品中有機雜質。

2.3 擦拭回收率

考察了在三種濃度下TOC測試值與理論濃度的回收率，結果證實本方法的回收率較高（表3），能夠滿足回收率>50%且RSD<20%的要求。

2.4 準確度

選擇3種不同濃度的樣品進行測試，采用標準曲線法測定鹽酸林可霉素含量，實驗結果能夠滿足準確度RSD≤1%的要求（表4）。

2.5 精密度

選擇理論殘留限度作為精密度濃度的測試標準，平行測定6次，實驗結果表明，RSD為1.23%，符合準確度RSD≤2%驗證檢驗要求（表5）。

3 討論

鹽酸林可霉素（以C18H37N5O9計）分子量為461.02，其含碳百分比為46.85%，TOC可以在一個很高的靈敏度條件下檢測總有機碳。TOC分析儀可以檢測所有的有機殘留，包括培養基和淸洗工藝中的降解物質。由于TOC檢測的是所有有機成分，很難區分檢測的物質是產品有機殘留還是其他有機混合物，所以，TOC方法代表的是“最差情況”；另一方面，在取樣和測試的過程中也有可能會引入污染物，所以所有的取樣人員必須經過嚴格的培訓并掌握淸洗取樣的技術，尤其要注意取樣工具不要對檢測結果帶來干擾。本研究建立的這種非特定方法的優點是靈敏度高、且對多成分化合物有效，缺點是缺乏識別具體分析物的專屬性、測定結果可受其他殘留物的干擾；文獻報道的一些特定方法（高效液相法、滴定法）靈敏度高、能用于相關化合物的定量測定，但其缺點是不能檢查更大范圍的化合物、研究成本高、結果也可能受殘留物干擾[9]。

參考文獻

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