野蠶豆根總環烯醚萜苷對非酒精性脂肪肝大鼠肝臟功能的影響

李 莉 單 蕊 陳 燕 朱 瑛 杜 冰 李海寧 姚 政*

1. 云南中醫藥大學，云南 昆明 650500;2. 重慶市開州區中醫院，重慶 405400;3. 安徽省宣城市中心醫院，安徽 宣城 242000

野蠶豆根，又名化血丹、小紅藥、金貓頭(廣西)、靈芝草(云南)，原植物來源于玄參科(Scrophulariaceae) 胡麻草屬(Centranthera) 植物大花胡麻草CentrantheragrandifloraBenth，主要分布于云南、貴州、廣西等地，越南、緬甸、印度也有分布[1]。野蠶豆根主要含有環烯醚萜苷類、苯乙醇苷類、類胡蘿卜素類、紫羅蘭酮苷類、單萜苷類等化合物[2]，桃葉珊瑚苷是野蠶豆根中含量最高的環烯醚萜苷類成分[3]。

環烯醚萜苷廣泛存在于自然界許多植物種屬中，在車前科、玄參科、杜仲科、忍冬科等植物中均有發現，具有降糖、保肝、抗炎、抗凝血等作用，還可發揮DNA合成酶抑制劑的作用[1]。

野蠶豆根在其產地云南省紅河州常被用于防治心腦血管疾病，收效甚好。其主要的化學成分為環烯醚萜苷，但有關野蠶豆根的藥理作用研究卻十分有限，關于其藥理藥效方面的研究甚少。因此，對野蠶豆根藥物作用效果及其起效機制進行深入研究是很有必要的。課題組前期對野蠶豆根有效藥物成分進行了提取，發現其總環烯醚萜苷具有抗炎和抗氧化活性[5-6]。本研究取野蠶豆根2年生根，提取其中的總環烯醚萜苷進行動物實驗，觀察其降脂及保肝作用。

1 材料、儀器與試劑

1.1 實驗動物 雄性SD大鼠共21只，體重160～200 g，由長沙市天勤生物科技有限公司提供，許可證號：SCXK(湘)2014-0011。分組情況：正常組7只，模型組7只，總環烯醚萜苷組7只。飼養于云南中醫藥大學動物實驗中心，自由飲食，實驗動物房12 h光照12 h黑暗，溫度控制為22～27 ℃，濕度控制為40%～60%。

1.2 實驗藥物及飼料 野蠶豆根采自云南省紅河州屏邊縣國云種植有限公司(1號、2號種植基地)，經云南中醫藥大學李海寧老師鑒定為玄參科胡麻草屬植物大花胡麻草CentrantheragrandifloraBenth.的根及根莖。

總環烯醚萜苷的制備：取2年生的野蠶豆根藥材(粗粉)，用60%的乙醇超聲得到浸膏，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到正丁醇部分浸膏(總環烯醚萜苷)。

普通飼料配方：玉米粉33%、小麥粉10%、麩皮18%、大米10%、豆粕16%、魚粉3%、雞肉粉2%、骨粉3%、脂肪5.8%。

高脂飼料配方：10%豬油+2%膽固醇+88%普通飼料。

飼料及墊料均購自江蘇美迪生物醫藥有限公司。

1.3 實驗儀器 電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫療儀器有限公司，DZKW-D-4)、YD1508B輪式切片機(浙江金華益迪醫療設備廠)、HI1220烘片機(德國LEICA公司)、HI1210攤片機(德國LEICA 公司)、Nikon ECLIPSE E200顯微鏡(日本Nikon公司)、全自動生化分析儀cobas c311(瑞士羅氏公司)。

2 實驗方法

2.1 非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立 正常組給予普通飼料喂養，模型組、總環烯醚萜苷組給予高脂飼料喂養，飼養于云南中醫藥大學動物房，飼養時間共8周。于第8周末取材。

2.2 動物給藥劑量方法 模型組、總環烯醚萜苷組于第4周開始灌胃給藥，持續4周，劑量參考李儀奎主編的《中藥藥理實驗方法學》，大鼠50 mg/kg·d。正常組灌胃給同等劑量生理鹽水。

2.3 大鼠肝臟病理形態學觀察 大鼠剖殺后，取肝臟樣本在10%福爾馬林溶液中浸泡24 h，使肝臟組織充分固定，切割至2mm×4mm×2 mm大小，流水沖洗2～3 h。脫水后，進行石蠟包埋，切片，HE染色，病理圖片拍攝。

2.4 大鼠血清生化指標檢測 提取血清，采用全自動生化儀測定血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)含量。

3 數據統計方法

4 實驗結果

4.1 各組大鼠體重變化 正常組大鼠體重增長趨勢較為平穩，模型組大鼠體重整體增長最快，總環烯醚萜苷組體重整體增長較模型組慢。

4.2 肝體指數 肝體指數(%)=(肝臟濕重/體重)×100%。模型組與正常組肝體指數相比較，差異有統計學意義(P<0.05)。總環烯醚萜苷組與模型組相比，差異有統計學意義(P<0.05)。

4.3 大鼠肝臟病理形態學觀察 從HE染色結果可以看出：正常組肝細胞大小正常，肝索分布清晰，肝細胞細胞核大小正常，無細胞脂肪變性；模型組出現較多脂肪空泡，肝索、肝細胞排列開始紊亂，表明NAFLD大鼠模型復制成功。總環烯醚萜苷組存在小脂肪空泡，與模型組相比空泡變小變少。

4.4 各組大鼠血清生化指標檢測 生化分析儀檢測各組大鼠8周末血清生化指標：模型組與正常組比較，血清LDL-C、ALT升高，HDL-C降低，差異有顯著性(P<0.05)；總環烯醚萜苷組與模型組比較，血清TG、LDL-C、ALT均降低，HDL-C升高，差異有顯著性(P<0.05)。總環烯醚萜苷組ALT和TBIL接近正常組水平。

表1 各組大鼠血清生化指標檢測結果

5 討論

野蠶豆根在云南省紅河州一帶資源豐富，是當地苗族民間常用植物藥，常用于心血管系統疾病的防治。野蠶豆根具有抗氧化、抗炎、保肝、抗菌、抗糖尿病、神經保護、抗腫瘤、保護心血管、促進傷口愈合等作用[7]。《中華本草》記載：味酸、微辛，性溫；具有消腫止痛、散瘀止血的功效。主要治療咳血、咯血、吐血、風濕痹痛、跌打骨折、內傷瘀血[8]。現代藥理研究[9-10]表明：野蠶豆根用藥安全，無明顯毒性反應；對大鼠急性缺血模型所致心肌損傷有保護作用，此外，還有抗凝血及抗炎活性。

野蠶豆根主要化學活性物質為以桃葉珊瑚苷為主的環烯醚萜苷類化合物。桃葉珊瑚苷味甘、淡，性溫，具有消腫止痛、散瘀止血的功效，是一類特殊的具有縮醛或半縮醛結構的單萜化合物[11]。有研究[12-16]顯示，桃葉珊瑚苷可抗凝血、抗炎、抗氧化、抗凋亡，同時可調節內質網應激和自噬水平，具有抗腫瘤、保肝、降糖、保護神經系統等作用。桃葉珊瑚苷還具有抑制肝細胞中Ⅰ型膠原纖維、Ⅲ型膠原纖維和基質金屬蛋白酶-2( MMP-2)的表達，減輕肝纖維化的作用[20]。本實驗所用藥物為2年生野蠶豆根中制備的總環烯醚萜苷，其中有較高含量的桃葉珊瑚苷。在成功制備了非酒精性脂肪肝大鼠的基礎上進行給藥觀察，病理結果顯示，總環烯醚萜苷可使脂肪肝大鼠肝細胞中的脂滴減少；血清生化結果顯示，總環烯醚萜苷可以降低非酒精性脂肪肝大鼠血清TG、ALT、HDL-C、LDL-C、TBIL水平。可看出，總環烯醚萜苷可有效改善非酒精性脂肪肝大鼠肝功能，減輕肝細胞中的脂質沉積，降低血脂水平，起到一定的降脂、保肝作用。

本研究結果顯示野蠶豆根在降脂、保肝方面具有較好的藥用價值，可作為防治脂肪肝及心腦血管類疾病的候選新藥。本研究可對野蠶豆根的藥物開發利用提供一定指導，并為民族民間藥物的臨床應用提供實驗依據。