新型組織脫水包埋盒在提高組織脫水效率中的應用

鄭夢莎，王海軍

病理診斷是臨床疾病診斷中的“金標準”，也是疾病診斷中的最終結果。組織切片質量優良直接影響病理醫師對結果的判讀，制片的關鍵步驟是組織處理，其包含組織固定、脫水、透明、浸蠟的過程。本實驗對新型組織脫水包埋盒與傳統組織脫水包埋盒進行對比，觀察單位時間內的固定效果，間接反應單位時間內的試劑交換量，提高組織的脫水效率。

1 材料與方法

1.1 材料豬肝臟和腎臟組織；新型組織脫水包埋盒，由杭州海世嘉公司遵循浙江大學實用新型專利(專利號ZL201620582691.5)生產。傳統組織脫水包埋盒為常見組織脫水包埋盒(圖1)；脫水機使用賽默飛ES脫水機。新型組織脫水包埋盒在傳統組織脫水包埋盒的基礎上，其盒身側壁多了4個開口，開口深度達2 mm，合上蓋子后能保留1 mm的試劑交換口(圖2)。

圖1 傳統組織脫水包埋盒 圖2 新型組織脫水包埋盒

1.2 方法

1.2.1豬腎、肝臟組織固定 分別取豬腎、肝臟正常大小的組織塊[1]，大小1.5 cm×1 cm×0.3 cm，以及過大、過厚的組織塊[2]，大于1.5 cm×1 cm，厚度>0.3 cm，分別放入新型組織脫水包埋盒和傳統組織脫水包埋盒中，標記為腎臟實驗組和肝臟實驗組(表1、2)。標本均經10%中性福爾馬林固定[3]，推薦固定時間>5 h。本實驗固定時間為6 h，分別在2、4、6 h等3個時間點觀察對應包埋盒中組織塊的狀態。

表1 豬腎臟組織實驗標記方法

1.2.2新型組織脫水包埋盒切片穩定性實驗 將豬腎、肝臟組織進行脫水、浸蠟處理，最后通過包埋制成蠟塊，對使用新型組織脫水包埋盒的組織蠟塊進行切片，觀察蠟塊在切片過程中的穩定性。

表2 豬肝臟組織實驗標記方法

1.3 結果判讀新鮮組織均經10%中性福爾馬林滲透浸漬，1 h滲透深度可達0.2～0.3 cm，組織顏色由鮮紅色逐漸變為灰白色[4]。經過較長時間的固定液滲透浸漬，醛基與氨基基團形成可逆的羥甲基衍生物和穩定的亞甲基橋，從而使甲醛和組織中的蛋白質發生廣泛的交聯，使組織變硬[5]。

2 結果

2.1 豬腎、肝臟組織固定實驗(1)固定2 h后的組織狀態：新型組織脫水包埋盒內組織切面灰白色部分比例明顯高于傳統組織脫水包埋盒內組織；兩種組織脫水包埋盒內組織表面均呈灰白色，無明顯差異(圖3)。(2)固定4 h后的組織狀態：新型組織脫水包埋盒內組織切面灰白色部分比例高于傳統組織脫水包埋盒內組織，但差異縮小；觸摸新型組織脫水包埋盒內組織硬度明顯大于傳統組織脫水包埋盒內組織。(3)固定6 h后的組織狀態：兩種組織脫水包埋盒內組織切面顏色均呈灰白色，無明顯差異；觸摸新型組織脫水包埋盒內組織比傳統組織脫水包埋盒內組織質地稍硬(圖4)。肝臟組織實驗結果與腎臟組織實驗結果一致。

圖3 A.腎過大、過厚組織固定2 h：新型組織脫水包埋盒內組織(腎1-1)切面灰白色部分比例明顯高于傳統組織脫水包埋盒內組織(腎3-1)；B.腎正常大小組織固定2 h：新型組織脫水包埋盒內組織(腎2-1)切面灰白色部分比例明顯高于傳統組織脫水包埋盒內組織(腎4-1) 圖4 A.腎過大、過厚組織固定6 h：兩種組織(腎1-3、腎3-3)脫水包埋盒內組織切面顏色均呈灰白色，無明顯差異；B.腎正常大小組織固定6 h：兩種組織(腎2-3、腎4-3)脫水包埋盒內組織切面顏色均呈灰白色，無明顯差異

2.2 新型組織脫水包埋盒切片穩定性實驗使用新型組織脫水包埋盒的組織蠟塊在切片時未發現跳片、震顫等，切片不穩定現象。

3 討論

良好的病理組織切片是保證病理診斷質量或準確的基礎。在制片流程中，組織脫水處理的效果直接影響組織切片和染色質量及后續的免疫組化檢測結果[6-8]。因此，保證良好的脫水流程是臨床工作中的關鍵步驟。

目前，脫水機組織處理缸主要有兩種運行方式：(1)以賽默飛公司為代表的組織旋轉運動型；(2)以徠卡公司為代表的試劑攪拌旋轉運動型。無論何種運動方式，其目的均為促進試劑流動，增加與組織的接觸以達到更快滲透和交換的作用[9]。本實驗應用新型組織脫水包埋盒，通過在原傳統包埋盒的側壁上增加4個小口，使組織處理時試劑不僅可從原前后壁柵欄狀開口進入包埋盒，也可從側壁開口進入包埋盒以浸漬、滲透組織，特別是在組織塊過大、過厚，且在脫水架內緊密排放影響試劑從前后開口進入包埋盒時，能起更好的處理作用。

本實驗通過觀察豬腎、肝臟組織在固定液中浸泡的過程，發現各組在相同固定時間有不同的固定效果。實驗中固定效果存在差異說明固定液進出組織(包埋盒)的量不同，本組新型組織脫水包埋盒的盒身側壁多了4個開口，使組織在脫水機內進行處理時，試劑不僅可以從包埋盒前后壁進出，還可以從包埋盒側壁進出，增加單位時間內包埋盒內的試劑交換量，提高單位時間內的組織處理效果或縮短組織處理時間。

日常工作中使用的切片機樣本夾是對包埋盒4個角進行固定，保持蠟塊在切片時的穩定性。本實驗在側壁上含有4個開口的新型組織脫水包埋盒在切片時與普通組織脫水包埋盒穩定性一致，不存在跳片、震顫等切片不穩定現象。

目前，新型組織脫水包埋盒能提高組織脫水效率，投入日常工作中，單位時間內能獲得更好的脫水效果，相同組織處理質量要求下可縮短部分時間。