全球首個單針圓支二聯苗（瑞圓舒）的創新工藝與攻毒試驗

姚 晶，王科文

[碩騰（上海）企業管理有限公司，上海 長寧 200050]

一直以來，疫苗免疫的便捷性是養豬生產者的追求；尤其是在非洲豬瘟大背景下，更加催生了養豬生產者對便捷性的需求。因此，為了迎合養豬生產者的需求，行業內出現了混合疫苗的各種亂象—多種疫苗混合免疫。筆者認為在考慮滿足行業需求的同時，也要考慮是否給養豬生產者帶來了真正的益處。

養豬也是一門生意，最終養豬生產者是要賺取利潤的，如此才能立于行業不敗之地。不合理的混合免疫在當前相對高豬價的行情下帶來的損失可能是可以承受的，但是這其實是在降低豬場生產者的利潤，降低其競爭力；接下來的半年、一年、兩年甚至五年，養豬場還能活多久？行業內不乏有這樣的案例：豬場同樣利潤的情況下，你養的母豬數是別人的好幾倍。

我們不能只看到眼前的方便，還要注重其后期的效果，真正給養豬生產者帶來效益；或者說我們在保障效果的情況下來考慮其便捷性。碩騰即將在中國上市的豬圓環病毒（PCV）與豬肺炎支原體（MH）二聯苗—瑞圓舒—就是既有效果又便捷的單針疫苗。文章將從創新工藝和攻毒試驗來介紹瑞圓舒的有效性。

1 瑞圓舒的創新工藝

研制圓支二聯苗的主要問題：豬血清中生長的豬肺炎支原體抗原和PCV抗原缺乏兼容性。豬血清含有多種針對各種抗原（包括PCV2）的特異性抗體。不幸的是，當把PCV抗原做成聯苗時，豬肺炎支原體部分中的抗PCV抗體會結合PCV抗原。

為解決這個重大問題，針對瑞圓舒中豬肺炎支原體部分的生產，碩騰研究人員開發一種改進的下游生產工藝。

在豬肺炎支原體細胞生長過程中，免疫原性成分被釋放到培養液中；這種無細胞的肺炎支原體培養上清液與沉淀的整個肺炎支原體細胞相比，同樣可以實現對豬肺炎支原體的免疫保護。瑞圓舒疫苗中的肺炎支原體抗原代表了一種無細菌細胞的產品，這意味著只有可溶性豬肺炎支原體蛋白被用來誘導豬的免疫反應，而不是整個滅活的支原體。這樣通過去除疫苗中不必要的成分使其安全性更高，且更有針對性地刺激免疫應答。

簡單地去除肺炎支原體細胞并不能使豬肺炎支原體抗原與PCV2抗原兼容。因此，碩騰科學家引入了一種從含有豬肺炎支原體的培養液中除去抗PCV抗體的方法—“蛋白質A”層析法。通過使用蛋白質A去除肺炎支原體部分的PCV抗體（及其他無關的IgG抗體），聯苗中的PCV抗原仍然有效。事實上，研究評估了多種全細胞和無細胞培養液上清豬肺炎支原體抗原的組合，最后證實了無細胞、蛋白質A處理的豬肺炎支原體抗原是非常高效的。

最后，同樣重要的是找到合適的佐劑來同時優化疫苗中兩種抗原的效力。研究人員進行了多次試驗，比較了3種佐劑，以確定最安全、最有效的佐劑。在評估的佐劑中，選擇了MetaStim，其在聯苗中具有很好的有效性和安全性。幾十年來，MetaStim佐劑已成功地用于豬、牛和馬的疫苗中。該佐劑的優勢包括針對滅活苗和活疫苗均能很好地刺激體液免疫和細胞免疫、不殺害活病毒活性、無礦物油、通針性好及無過敏反應等。

2 瑞圓舒的攻毒試驗

2.1 PCV2攻毒試驗

免疫后3周攻毒試驗：選取了48頭平均3周齡臨床健康的雜種斷奶仔豬，仔豬PCV2血清學陰性并且沒有病毒血癥；所有仔豬隨機（24頭/組）分為對照組（沒有PCV抗原，只有MH抗原）和瑞圓舒組（Fostera PCV MH）；接種疫苗3周后（試驗第21天），豬只通過肌肉注射1 mL和鼻內吸入2 mL共接種3 mL PCV2a（攻毒階段6～9周齡）。

每天觀察豬只的總體健康狀況及呼吸困難、嗜睡等臨床癥狀。每周收集血清樣品和攻毒階段的糞便拭子，并分析PCV2病毒血癥、糞便排毒和抗體水平。攻毒后3周對所有豬只進行剖檢，并采集組織樣品來評估組織細胞浸潤情況、淋巴衰竭和免疫組化（IHC，檢查組織中的PCV）。

試驗結果：瑞圓舒（Fostera PCV MH）組和對照組相比，疫苗接種減少了91.3%豬只病毒血癥的發生率（P≤0.000 1，圖1），糞便排毒顯著降低70.0%（P=0.000 2），免疫豬的抗體滴度均顯著提高（P≤0.005 6），淋巴衰竭減少91.2%，組織細胞浸潤減少100%，組織中檢出的PCV2抗原的數量減少77.4%（圖2）。

圖1 在試驗過程中豬只出現過PCV2病毒血癥的百分比

圖2 PCV2組織分析（微觀病變和免疫組化評分）

2.2 MH攻毒試驗

免疫后3周攻毒試驗：選取了60頭臨床健康的雜種斷奶仔豬，大約3周齡，而且豬肺炎支原體血清陰性；將仔豬隨機分為兩組（30頭/組），即對照組（無MH抗原，只有PCV抗原）和瑞圓舒組（包含MH和PCV抗原）；在接種疫苗后3周，用10 mL含有強毒活MH的肺臟勻漿對豬進行連續2 d氣管內攻毒。每天觀察豬的整體健康狀況和呼吸困難、嗜睡等臨床癥狀，在攻毒后4周對所有豬進行剖檢以評估肺部病變，并收集肺部拭子和組織樣本進行MH檢測。

瑞圓舒組（1.66%）與對照組（7.01%）相比，MH病變肺臟的比例明顯降低（P≤0.000 1）；這表明免疫組比對照組的相對風險降低了76.3%（圖3）。血清學結果表明，接種前所有豬的MH抗體均為陰性（第0天），而瑞圓舒組在MH攻毒后具有記憶應答反應（第48天或第49天，P≤0.000 1）。

圖3 MH病變肺臟的百分比（最小平方均值）

除免疫后3周齡攻毒試驗，還進行了免疫后23周PCV2和MH攻毒試驗；通過控制豬只PCV2病毒血癥、PCV2糞便排毒、淋巴組織中病毒載量、接種疫苗的血清學反應及減輕MH引起的肺部病變的支持數據表明，瑞圓舒中的PCV部分和MH部分均具有至少23周的免疫保護期。

3 總結

通過瑞圓舒的創新工藝可知，瑞圓舒是從“基礎”開始研發的，而不是兩種現有疫苗的簡單混合。在疫苗的MH組分生產工藝中，把富含MH抗原的液體部分中的MH細胞過濾掉，增加疫苗的安全性，并產生更有效的免疫應答；同時，通過“蛋白A”方法從MH部分中去除PCV抗體（和其他無關的IgG抗體），使兩種抗原更加兼容；而且選用MetaStim作為瑞圓舒的佐劑來生產一種安全和高效的聯苗。

在PCV2攻毒試驗方面，試驗結果證實了瑞圓舒中PCV成分能夠幫助預防攻毒后PCV2病毒血癥、顯微病變（淋巴衰竭）及其在淋巴組織的定殖，幫助降低PCV2糞便排毒，接種后產生PCV2主動的抗體應答及攻毒后的記憶應答；在PCV2攻毒試驗方面，試驗結果證實了瑞圓舒中MH成分顯著降低了豬支原體肺炎肺部病變嚴重程度，并對于豬肺炎支原體的攻毒產生了顯著的記憶應答反應；兩者的免疫保護期均達23周之長。

總而言之，瑞圓舒是從源頭研發的圓支二聯苗，在保證有效性的情況下發揮其便利性，給養豬生產者帶來應有的利潤。