蒙藥哈它各其-7散對(duì)壓瘡創(chuàng)面愈合作用的實(shí)驗(yàn)研究

韓巴特爾，包蘇布道，圖娜拉

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院胸外科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院）

壓瘡是臨床常見(jiàn)的并發(fā)癥，是受壓組織持續(xù)性缺血缺氧引起的局限性破損和壞死[1]。壓瘡也是胸外科術(shù)后長(zhǎng)期臥床或軀體移動(dòng)障礙患者中常見(jiàn)的難愈性潰瘍之一，壓瘡會(huì)延長(zhǎng)或加重原來(lái)疾病的病程，使患者的生理和心理受到極大的傷害，并且還會(huì)引起全身衰竭而危及生命[2,3]。蒙藥哈它各其-7散在藥理上具有消腫，消炎，生肌，促進(jìn)傷口愈合等功效。多用于皮膚黏膜疾病的治療，近年來(lái)已有報(bào)道哈它各其-7散治療壓瘡，效果顯著。但在臨床應(yīng)用中缺乏足夠的科學(xué)依據(jù)支撐,其作用機(jī)理尚未闡明，為了進(jìn)一步探索哈它各其-7散促進(jìn)壓瘡創(chuàng)面愈合的作用，本研究建立大鼠壓瘡Ⅲ期模型，觀察哈它各其-7散對(duì)壓瘡大鼠血清白細(xì)胞介素-1（IL-1），白細(xì)胞介素-6（IL-6）和hs-CRP（超敏C反應(yīng)蛋白）表達(dá)水平的影響，以探討哈它各其-7散對(duì)壓瘡創(chuàng)面愈合的影響，并為其哈它各其-7散進(jìn)一步治療壓瘡提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物及分組 雄性SD大鼠32只，體重（250±20）g，選自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0013。其中24只按照缺血再灌注損傷原理造模，造模后按1：1比例進(jìn)行分組，分為蒙藥組，對(duì)照組，模型組；另外8只為假手術(shù)組，不予造模。

1.1.2 主要儀器設(shè)備和試劑 病理切片機(jī)、烤片機(jī)（常州國(guó)華電器有限公司）；倒置顯微鏡、成像系統(tǒng)（日本尼康）、酶標(biāo)分析儀（上海沛歐分析儀器有限公司提供）；哈它各其-7散（由內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院國(guó)家蒙藥制劑中心供應(yīng)）；大鼠IL-1、IL-6、hs-CRP ELISA試劑盒（江蘇澤雨提供）；蘇木素染液、伊紅染液（北京中科萬(wàn)邦生物科技有限公司）；圓形鐵片、圓形磁片、所需器械如剪刀、鑷子、眼科剪、持針器、刀柄、刀片、4號(hào)手術(shù)線等均由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)療術(shù)實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 壓瘡模型的復(fù)制 大鼠分籠喂養(yǎng)7天，隨機(jī)數(shù)字表法編號(hào)并選取8只大鼠作為假手術(shù)組，其余的24只大鼠復(fù)制壓瘡缺血再灌注損傷模型。造模前嚴(yán)禁進(jìn)食，腔內(nèi)注射10%水合氯醛進(jìn)行麻醉，剔除左側(cè)臀部的毛并消毒備皮，在其左側(cè)臀部切開(kāi)長(zhǎng)約2.5 cm，深至肌肉的切口，鈍性分離，將直徑25mm，厚度1.5mm的已消毒的圓形鐵片植入到臀大肌內(nèi)，然后逐層進(jìn)行縫合并消毒。術(shù)后24h，大鼠體外放置直徑25mm，厚度2.5mm的圓形磁鐵，與其使局部組織缺血，每次缺血2h后將外部磁鐵取下，使血液流量恢復(fù)0.5h，以此為1個(gè)循環(huán)，每日進(jìn)行5個(gè)循環(huán)，連續(xù)進(jìn)行4天，以受壓處皮膚變黑變硬，針刺不出血為作為壓瘡模型復(fù)制成功[4,5]。假手術(shù)組剔除臀部毛消毒備皮后不再做任何處理。

1.2.2 給藥治療 假手術(shù)組及模型組大鼠創(chuàng)面不給予任何治療。哈它各其-7散組和云南白藥組大鼠清除創(chuàng)面壞死組織后0.9%氯化鈉注射液沖洗創(chuàng)面和周?chē)つw，拭干后敷上哈它各其-7散或云南白藥散，給藥劑量為10 mg/cm2，均勻覆蓋創(chuàng)面，1次/天，連續(xù)14天。

1.2.3 指標(biāo)檢測(cè)和方法（1）壓瘡創(chuàng)面面積的測(cè)定：除假手術(shù)組外，其余各組大鼠給藥第1天、3天、7天和14天測(cè)量受壓處創(chuàng)面的面積。因創(chuàng)面愈合不規(guī)則，用筆在硫酸銅板紙上畫(huà)出受壓組織的面積后Photoshop圖像處理軟件進(jìn)行分析；（2）病理學(xué)檢測(cè)：取大鼠創(chuàng)面皮膚組織，以創(chuàng)面為中心10mm2正方形皮膚組織修剪后放入模中進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋后進(jìn)行4μm切片，HE染色，光鏡下觀察并采集圖片；（3）IL-1、IL-6及hs-CRP水平的測(cè)定：末次給藥后麻醉各組大鼠，采集腹主動(dòng)脈血液，放入不含抗凝劑的真空試管中，以3600r/min的轉(zhuǎn)速，離心10min，取血清上清液。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)血清中的IL-1、IL-6及hs-CRP含量。酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組之間的差異比較采用單因素方差分析的方法，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 創(chuàng)面面積測(cè)定

模型組各鼠創(chuàng)面具有較多的壞死組織和滲出液，受壓處皮膚組織出現(xiàn)紅腫現(xiàn)象。分組治療的1天、3天、7天、14天時(shí)測(cè)量其受壓處創(chuàng)面的面積，結(jié)果顯示：與模型組相比，哈它各其-7組和云南白藥組在給藥第3天開(kāi)始受壓處創(chuàng)面的面積縮小，在第7天、14天時(shí)，與模型組比較，創(chuàng)面面積更是顯著減小，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這表明哈它各其-7散具有顯著的促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用（見(jiàn)表1）。

表1 哈它各其-7散對(duì)壓瘡大鼠創(chuàng)面面積的影響（n=8，±s）

表1 哈它各其-7散對(duì)壓瘡大鼠創(chuàng)面面積的影響（n=8，±s）

注：與模型組比較，＊P<0.05

組別 創(chuàng)面面積（cm2）1天3天7天14天模型組5.00±0.086.20±0.585.29±0.752.66±0.43其哈-它7各組4.91±0.055.97±0.593.45±0.89*1.39±0.71*云藥南組白4.98±0.066.12±0.663.49±0.99*1.55±0.89*

2.2 壓瘡創(chuàng)面組織病理學(xué)的影響

假手術(shù)組大鼠上皮組織結(jié)構(gòu)比較清楚，屬于復(fù)層鱗狀上皮結(jié)構(gòu)，幾乎未見(jiàn)到炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)（見(jiàn)圖1）。模型組大鼠皮膚表面及結(jié)構(gòu)不夠完整，有些上皮結(jié)構(gòu)出現(xiàn)了斷裂現(xiàn)象，真皮內(nèi)浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞較多。與模型組相比，給藥組（哈它各其-7組和云南白藥組）大鼠皮膚組織上皮結(jié)構(gòu)比較清晰，真皮內(nèi)雖有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，但可見(jiàn)較多的新生肉芽組織及血管。

圖1 各組大鼠創(chuàng)面皮膚組織病理變化（HE染色，×200）

2.3 血清IL-1、IL-6和hs-CRP水平的影響

表2 各組大鼠血清IL-1、IL-6和hs-CRP水平的比較（n=8，±s）

表2 各組大鼠血清IL-1、IL-6和hs-CRP水平的比較（n=8，±s）

注：與假手術(shù)組相比，＊＊P<0.01；與模型組相比，ΔP<0.01；與云南白藥組相比，#P<0.05；

組別IL-1(ng/I)IL-6(pg/mL)hs-CRP(μg/I)假手術(shù)組38.77±10.0263.63±9.642.31±0.78模型組77.56±13.03**97.07±13.76**3.53±0.90**哈它7各組其-41.28±7.10Δ61.71±13.92Δ1.72±0.64**Δ#云南白藥組44.13±17.38**Δ69.39±26.81Δ2.31±0.59**Δ

3 討論

壓瘡是臨床常見(jiàn)的難愈合性潰瘍，是局部的受壓組織因其反復(fù)出現(xiàn)缺血再灌注而形成的不可逆損傷的現(xiàn)象。缺血再灌注損傷被認(rèn)為是導(dǎo)致壓瘡的重要因素，其主要與氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥反應(yīng)，細(xì)胞凋亡等因素有關(guān)。炎癥因子可促進(jìn)巨噬細(xì)胞成熟、中性粒細(xì)胞聚集，進(jìn)而導(dǎo)致炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，加重組織損傷。白細(xì)胞介素主要以激活免疫細(xì)胞,介導(dǎo)T細(xì)胞和B細(xì)胞活化并增殖作用，進(jìn)而參與其炎癥反應(yīng)；而hs-CRP能夠與膜脂蛋白結(jié)合，激活機(jī)體的補(bǔ)體系統(tǒng)，大量的炎癥介因此產(chǎn)生質(zhì)。強(qiáng)炎癥介質(zhì)IL-1β、IL-6等可誘導(dǎo)產(chǎn)生其大量的破壞創(chuàng)面完整性的酶，而這類(lèi)酶會(huì)降解創(chuàng)面細(xì)胞基質(zhì)，并且纖連蛋白進(jìn)而導(dǎo)致創(chuàng)面難愈合。因此影響炎癥介質(zhì)IL-1、IL-6、hs-CRP等的合成及釋放均能在一定程度上改變壓瘡病理進(jìn)程[6]。

壓瘡屬蒙醫(yī)“瘡瘍”病范圍，而哈它各其-7散是蒙醫(yī)傳統(tǒng)瘡瘍病驗(yàn)方之一，在蒙醫(yī)臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，對(duì)于壓瘡具有較好的療效[7,8]。本研究從組織形態(tài)學(xué)及其炎癥因子水平探討了蒙藥哈它各其-7對(duì)大鼠壓瘡創(chuàng)面愈合作用及其可能作用之療效。通過(guò)復(fù)制III期壓瘡模型，以臨床廣泛使用的云南白藥為對(duì)照藥物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠創(chuàng)面壞死后鈣化嚴(yán)重，且血清中的IL-1、IL-6、hs-CRP含量較高，病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)局部皮膚組織內(nèi)有較多的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。哈它各其-7散外敷創(chuàng)面后能明顯縮小壓瘡創(chuàng)面面積，而且出現(xiàn)了較多的新生肉芽組織，病理學(xué)檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)皮膚組織中有較少的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，并能顯著降低壓瘡大鼠血清中炎性因子IL-1、IL-6、hs-CRP的表達(dá)。

綜上所述，通過(guò)復(fù)制大鼠壓瘡模型，應(yīng)用哈它各其-7散進(jìn)行治療，能夠明顯抑制由壓瘡引起的全身性的炎癥反應(yīng)，減少炎癥因子的釋放，減輕或抑制炎性反應(yīng)，并能縮短創(chuàng)面修復(fù)的時(shí)間。哈它各其-7散創(chuàng)面愈合作用可能與之抑制炎癥因子釋放有關(guān)，本研究結(jié)果為臨床中應(yīng)用哈它各其-7散治療壓瘡提供了新思路、新方法，乃至進(jìn)一步研究哈它各其-7散奠定一定的基礎(chǔ)，為其治療難愈性創(chuàng)面領(lǐng)域增添蒙醫(yī)藥新內(nèi)容。