RBP4、Hcy、血脂與動脈粥樣硬化的關系

孔凡斌， 袁 勇， 吉 永， 李 錚， 陳 琪， 吳曉明， 高 輝

（昆明醫科大學附屬延安醫院檢驗科，云南 昆明 650051）

視黃醇結合蛋白4（retinol binding protein 4，RBP4）是一種具有多重生物學活性的脂肪因子[1]，可通過促進胰島素抵抗、引起向心性肥胖、影響糖脂代謝和參與慢性炎癥反應等作用導致動脈粥樣硬化[2-3]。同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）也可通過多種途徑引起動脈粥樣硬化[4]。因此，RBP4、Hcy和血脂在動脈粥樣硬化的形成和發展過程中可能有相互作用和協同作用[5]。目前，有關動脈粥樣硬化的發生機制及其各因子在其中所起的作用尚未被完全闡明，特別是關于Hcy與RBP4相關關系的研究很少。為此，本研究擬通過頸動脈內膜中層厚度（intima-medium thickness，IMT）這一動脈粥樣硬化早期指標分析RBP4、Hcy、血脂與動脈粥樣硬化的關系，為動脈粥樣硬化發生機制的研究提供相關依據。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2017年7月—2018年11月在昆明醫科大學附屬延安醫院進行頸動脈IMT測量的門診、住院和體檢患者236例，其中男123例、女113例，年齡（63.14±9.23）歲，包括高血壓70例、冠心病35例、腦梗死22例、其他疾病（支氣管炎、心悸待查、頭暈待查等）109例。排除患2型糖尿病、腎功能不全、甲狀腺功能減退患者，以及服用氨甲喋呤、抗癲癇藥物的患者。根據超聲測量結果，將IMT＜1 mm的患者納入IMT正常組（39例），將IMT≥1 mm的患者納入IMT增厚組（197例）[6]。2個組之間年齡和性別差異均無統計學意義（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 采集所有患者測定IMT當日空腹靜脈血3～5 mL，625×g 離心10 min，分離血清，于-70 ℃保存待用。

1.2.2 IMT測量 采用550型B超機（探頭頻率7～12 MHz，美國惠普公司）分別檢查患者頸總動脈和分叉部、頸內、頸外動脈顱外段，舒張末期測量頸總動脈分叉處近端 1 cm后壁的IMT，測量 3 次，取平均值。

1.2.3 RBP4、Hcy和血脂相關指標檢測 Hcy采用循環酶法檢測，載脂蛋白A1（apolipoprotein A1，apo A1）和載脂蛋白B（apolipoprotein B，apo B）均采用免疫透射比濁法檢測，試劑盒（批號分別為18-0302、18-0421、18-0416）均購自北京九強公司。總膽固醇（total cholesterol，TC）采用膽固醇氧化酶法檢測，三酰甘油（triglyceride，TG）采用磷酸甘油氧化酶-過氧化物酶法檢測，試劑盒（批號分別為20180312、20180411）均購自上海科華公司。高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）采用選擇性抑制法檢測，低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）采用表面活性劑清除法檢測，試劑盒（批號分別為811RFM、831RDP）均購自日本積水公司。生化復合室內質控血清購自美國賽默飛世爾公司。檢測儀器為AU5421全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）。RBP4采用酶聯免疫吸附試驗（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）測定，試劑盒（批號201711）購自美國R&D公司，檢測儀器為iMark酶標儀（美國伯樂公司）。所有項目均在室內質控在控的情況下測定。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行統計分析。呈正態分布的數據以±s表示，2個組之間比較采用t檢驗。呈非正態分布的數據以中位數（M）[四分位數（P25～P75）]表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。采用Spearman相關分析評估各項目之間的相關性。采用Logistic回歸分析評估各項指標之間的關系。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IMT正常組與IMT增厚組各項指標的比較

IMT增厚組TG、LDL-C、Hcy和RBP4水平均高于IMT正常組（P=0.000），HDL-C和apo A1水平均低于IMT正常組（P=0.000）。TC和apo B水平2個組之間差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 IMT正常組和IMT增厚組各項指標的比較

2.2 各項目之間的相關性分析

對IMT正常組與IMT增厚組之間差異有統計學意義的項目（TG、LDL-C、Hcy、RBP4、HDL-C和apo A1）進行Spearman相關分析。結果顯示，R B P 4與T G呈正相關（r=0.745，P＜0.05），與HDL-C和apo A1呈負相關（r值分別為-0.727、-0.512，P＜0.05）；TC與LDL-C、apo B呈正相關（r值分別為0.881、0.852，P＜0.05）；TG與HDL-C、apo A1呈負相關（r值分別為-0.682、-0.353，P＜0.05）。其他各項目之間均無相關性（P>0.05）。見表2。

表2 各項目之間的r值

2.3 RBP4與其他項目的線性回歸分析

以RBP4為因變量，TG、HDL-C、apo A1為自變量，進行線性回歸分析。

RBP4（Y）與TG（X）的回歸方程為Y=32.07X-15.30（r=0.745，P＜0.05）。TG在3.5 mmol/L處有1個折點，部分TG>3.5 mmol/L的患者RBP4水平急劇升高，部分患者RBP4水平升高不明顯。見圖1。

RBP4（Y）與HDL-C（X）的回歸方程為Y=-77.62X+129.3（r=0.452，P＜0.05）。因方程得出的r值較小，進行曲線擬合。結果顯示，RBP4與HDL-C的三次方程得出的相關性最好，回歸方程為Y=-190.84X3+963.61X2-1 493.03X+746.06（r=0.861，P=0.000）。見圖1。

RBP4（Y）與apo A1（X）的回歸方程為Y=-92.739X+166.40（r=0.420，P＜0.05）。因方程得出的r值較小，進行曲線擬合。結果顯示，RBP4與apo A1的三次方程得出的相關性最好，回歸方程為Y=-342.66X3+1 571.76X2-2 372.02X+1 212.93（r=0.670，P=0.000）。見圖1。

圖1 RBP4與TG、HDL-C、apo A1的回歸分析

以RBP4為因變量，血脂相關指標和Hcy作為自變量，用逐步法進行多重回歸分析，得出的回歸方程為RBP4=40.27+29.43×TG-40.18×apo A1（P＜0.05）。

3 討論

目前，我國心腦血管疾病的發病率逐年升高，且發病年齡有年輕化的趨勢[7]。頸動脈內膜中層增厚是頸動脈粥樣硬化的早期征象。血脂是最早被發現和研究的與動脈粥樣硬化相關的因素，其代謝異常是導致動脈粥樣硬化的主要原因，主要機制包括血管內皮損傷、脂質沉積導致最終斑塊形成和破裂[8]。Hcy是近年來發現的心血管疾病的風險因子，其導致動脈粥樣硬化的機制有：（1）對血管內皮細胞的毒性作用；（2）干擾脂代謝正常途徑；（3）促進血管平滑肌細胞增生[9]；（4）影響凝血機制；（5）蛋白質Hcy化[10-11]。脂質代謝異常是動脈粥樣硬化發生的前提。有研究結果顯示，在多種疾病中，RBP4與一些發生異常代謝的脂質或脂蛋白，如TG、TC、LDL-C呈正相關，與HDL-C呈負相關[12]，與本研究部分結果一致。RBP4與脂代謝相關的機制可能是：RBP4能活化維甲酸受體（retinoic acid receptor，RAR）/維甲類X受體（retinoid X receptor，RXR）信號途徑，使脂蛋白酯酶的激動劑血清載脂蛋白CⅢ表達上調，抑制極低密度脂蛋白（very low-density lipoprotein，VLDL）分解，從而間接使VLDL升高，HDL-C降低[13]；潴留的VLDL通過膽固醇酯化轉運蛋白途徑轉化為TG和TC，導致血清TC和TG水平升高[14]。本研究結果顯示，RBP4與TG呈正相關（r=0.745，P＜0.05），但與TC無相關性（r=0.046，P>0.05）。具體原因有待進一步研究。

Hcy一直被認為是動脈粥樣硬化和心腦血管疾病發生的獨立危險因素，其導致動脈粥樣硬化的機制可能是干擾脂質代謝，導致脂質代謝紊亂[15]。對于高Hcy水平的患者，長期服用B族維生素和葉酸可有效降低Hcy水平[16]，但通過上述治療并不能顯著改變動脈粥樣硬化的進程和降低心腦血管事件的發生率[17]。這也使學者們推測Hcy可能不是導致動脈粥樣硬化的因素，只是動脈粥樣硬化代謝過程中的一個產物[18]，但這個觀點目前還沒有被明確的證據證明。本研究結果顯示，Hcy與RBP4和血脂相關指標之間均無相關性（P>0.05）。

本研究在課題設計之初考慮到樣本留取的難度，未局限于某一種單一疾病，而選擇了動脈粥樣硬化這一多種疾病共有的病變，這可能會引入一些混雜因素。然而，在動脈粥樣硬化的發生、發展過程中，血脂、Hcy、RBP4等仍是目前公認的危險因素，分析這些指標之間的關系可為研究動脈粥樣硬化的致病機制及各種因素在其中所起的作用提供一定的參考。