聯合檢測尿總蛋白避免尿微量白蛋白鉤狀效應的方法

旦 曲， 羅桑次珍， 澤仁曲措， 馬超超， 劉治娟

（1.西藏自治區人民醫院檢驗科，西藏 拉薩 850000；2.北京協和醫院檢驗科，北京100730）

尿微量白蛋白（microalbumin，mAlb）在腎臟早期損傷的診斷和治療中有重要的參考價值[1]。尿白蛋白/肌酐比值（albumin to creatinine ratio，ACR）已成為慢性腎臟疾病篩查和分期的重要指標之一[2-3]。目前，尿mAlb的檢測方法主要有免疫散射比濁法、免疫透射比濁法和放射免疫分析法、時間分辨免疫分析法等。免疫透射比濁法與免疫散射比濁法有較高的一致性[4]，但由于方法學的原因，免疫透射比濁法難以避免產生鉤狀效應。雖然已有樣本預稀釋和抗原過量檢查、反應特征曲線設置和報警、計算反應完成率等新技術[5-8]可用于避免鉤狀效應，但不同儀器和試劑的參數設置和功能不同，上述新技術不具有普遍適用性。有些開放系統甚至無任何鉤狀效應的預防措施。本研究擬通過尿總蛋白（total protien，TP）與尿mAlb的聯合檢測，構建線性回歸模型，在結果審核時以該方程為驗證規則，以避免免疫透射比濁法檢測尿mAlb時的鉤狀效應。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2018年1—12月西藏自治區人民醫院同時檢測尿mAlb和尿TP的患者1 711例，其中男943例、女768例，年齡18～78歲。另收集檢測尿mAlb時產生鉤狀效應的陰性或弱陽性尿液樣本35份。

1.2 試劑與儀器

尿mAlb試劑盒（免疫透射比濁法）和配套校準品購自四川邁克生物科技股份有限公司。腦脊液/尿TP試劑盒（鄰苯三酚紅鉬比色法）7170瓶型和配套校準品購自四川新健康成生物股份有限公司。檢測儀器為ARCHITECT C16000全自動生化分析儀（美國雅培公司）。尿液化學質控品購自美國伯樂公司（貨號為397、398，批號為68521、68522，有效期至2019年12月31日）。本實驗室2018年度尿mAlb中、高水平質控品的室內變異系數（coefficient of variation，CV）分別為4.83%、4.43%，尿TP中、高水平質控品的室內CV分別為3.19%和2.05%，2018年國家衛生健康委臨床檢驗中心室間質量評價成績合格。

1.3 方法

收集所有對象的晨尿，盛集于潔凈的容器內，30 min內完成檢測。渾濁尿液采用1 200×g離心10 min，取上清液進行檢測。排除影響尿mAlb和尿TP檢測結果的非病理性因素（各種因素引起的尿液污染）。

以尿TP為因變量（Y），尿mAlb為自變量（X），建立線性回歸方程。將發生鉤狀效應的35份樣本的尿mAlb檢測值（記為尿mAlb鉤狀）代入線性回歸方程，計算得到尿TP值（記為尿TP鉤狀），隨后將尿液樣本稀釋并檢測尿mAlb，將檢測結果記為尿mAlb稀釋，代入方程后計算尿TP值（記為尿TP稀釋），與尿TP實測值（尿TP實測）進行比較。

1.4 統計學方法

采用Excel 2010軟件及SPSS 25.0軟件進行統計分析。采用Kolmogorov-Smirnov檢驗進行正態性檢驗。尿TP結果呈偏態分布，經對數轉換后呈正態分布。采用Spearman相關分析評估尿mAlb與尿TP的相關性。以尿mAlb檢測值為X，尿TP檢測值為Y，繪制散點圖，建立線性回歸方程。不同方法得出的尿TP結果之間的比較采用Dunni檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 尿TP與尿mAlb的相關性及線性回歸方程

Spearman相關分析結果顯示，尿TP與尿mAlb呈正相關（r=0.880，P=0.000）。以尿TP為因變量（Y），尿mAlb為自變量（X），建立線性回歸方程：Y=116.361+1.245X（r2=0.921，P=0.000）。見圖1。

圖1 尿mAlb與尿TP的相關性

2.2 審核規則的驗證

把線性回歸方程列入實驗室信息系統（laboratory information system，LIS）的審核規則中進行驗證。結果顯示，尿TP實測與尿TP鉤狀比較，差異有統計學意義（P＜0.001）；與尿TP稀釋比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

免疫比濁法是基于抗原抗體反應的檢測方法，而抗原抗體反應的特點就是抗原和抗體等比例反應。當抗原或抗體過量時，就會產生鉤狀效應，可導致假陰性或弱陽性結果。為了保證檢驗結果的準確，儀器和試劑廠商采取各種措施來避免鉤狀效應的產生。但并不是所有的檢測項目都適用這些方法。因此，本研究通過建立尿TP和尿mAlb的線性回歸方程來判斷是否產生了鉤狀效應，為部分無力購置昂貴設備的基層醫院提供新的思路。

白蛋白從腎小球濾過后，絕大部分在腎小管被重吸收，正常人尿中白蛋白含量極微。但在一些早期的腎臟病變中，尿mAlb水平會升高。因此，尿mAlb和ACR已在臨床上被普遍用于腎臟疾病的診斷。目前，尿mAlb的檢測方法主要為免疫比濁法，某些儀器具有監測反應曲線和帶檢查報警的功能，可以提示鉤狀效應的發生[9]，但一些型號較老的儀器沒有這些功能。因此，臨床實驗室需要一種較為簡單的方法來提示鉤狀效應的發生。

本研究結果顯示，尿TP與尿mAlb呈正相關（r=0.880，P=0.000），可建立一元線性回歸方程，在一定程度上反映了尿TP與尿mAlb之間的關系。當發生鉤狀效應時，尿mAlb和尿TP之間的關聯性不能滿足一元線性回歸方程。因此，可以把建立的線性回歸方程作為一個經驗公式，用于尿mAlb檢測結果的審核。各臨床實驗室可建立適合自己實驗室的線性回歸方程，并定期驗證。有條件的實驗室應參照WS/T 616—2018《臨床實驗室定量檢驗結果的自動審核》的要求，分析尿TP與尿mAlb之間的相關性，進一步挖掘二者間的關系，深入揭示二者在疾病發展和治療中的病理生理特征，以便更好地為臨床服務。

綜上所述，雖然不同的腎臟疾病尿TP的成分及水平均有一定的差異[10-11]，但尿mAlb與尿TP的比值在一定程度上可反映疾病的類型。聯合檢測尿TP和尿mAlb雖然稍微增加了患者的負擔，但最終的檢測結果更為準確，有助于臨床對病情的判斷。由于本研究的樣本量較小，建立的線性回歸方程尚不能完全反映尿mAlb與尿TP之間的關系，因此還有待進一步擴大樣本量進行驗證。