不同滅菌程序對雙黃連注射液質量的影響

石異 喻勇 佘寧

摘要：為優選雙黃連注射液最佳滅菌條件，采用《中華人民共和國獸藥典》2015版中滅菌法下濕熱滅菌法中3種滅菌程序對雙黃連注射液進行滅菌，運用高效液相色譜法、中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2012.0版本）對3批雙黃連注射液的3種有效成分含量、指紋圖譜相似度進行比較。結果表明，在濕熱滅菌法下，雙黃連注射液采用121 ℃×30 min滅菌程序滅菌效果最佳。

關鍵詞：雙黃連注射液;滅菌程序;比較

中圖分類號：S859.5? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2021）02-0007-02

雙黃連注射液是獸藥中常用的中成藥制劑。其含有新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、連翹脂苷A、黃芩苷和黃芩素等多種成分[1]，這些成分大多含有苷健、酯健等結構[2]，在高溫濕熱滅菌條件下易發生水解或氧化反應，使雙黃連注射液的有效成分發生變化，從而使其質量降低。因此，為了保障雙黃連注射液的質量，研究滅菌溫度和滅菌時間對雙黃連注射液質量的影響是非常必要的。

目前生產上常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法和氣體滅菌法等。而濕熱滅菌法由于滅菌能力強，是目前應用最廣泛的滅菌方法。根據《中華人民共和國獸藥典》（2015年版）滅菌法中相關要求，濕熱滅菌法通常采用121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種程序。

雙黃連注射液主要活性成分是黃芩苷、綠原酸和連翹苷[3]。指紋譜圖可以快速、準確地測定雙黃連注射液中綠原酸、黃芩苷和連翹苷等有效成分的含量[1，4]。所以，本試驗采用濕熱滅菌法，在滅菌程序已驗證，F0≥8的基礎上，比較在121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序下雙黃連注射液的3種有效成分含量及指紋圖譜相似度。通過試驗數據得出雙黃連注射液的最佳滅菌工藝，以期為雙黃連注射液的質量保證提供科學依據。

1 儀器與試劑

SPD-20A型高效液相色譜儀[島津企業管理（中國）有限公司]，320-S型pH計、AE-240型電子分析天平[梅特勒-托利多國際貿易（上海）有限公司]，YXQ.WF-Z型滅菌柜（廣州市科洋醫療設備有限公司），中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2012.0版本）

對照品：綠原酸、黃芩苷、連翹苷（中國獸藥藥品監察所），雙黃連注射液若干（四川齊全紅動物藥業有限公司），其余試劑均為分析純。

2 試驗方法

2.1 生產工藝

將黃芩飲片加適量水煎煮3次，第1次2 h，第2次、第3次各1 h，合并煎液，過濾，濾液濃縮并在80 ℃時加入2 mol/L鹽酸溶液調節pH至1.0～2.0，保溫30 min，靜置12 h，濾過;沉淀加6～8倍量水，攪拌，用40%氫氧化鈉溶液調節pH至7.0，加等量乙醇，攪拌使溶解，濾過;濾液用2 mol/L鹽酸溶液調節pH至2.0，60 ℃保溫30 min，靜置12 h，濾過;沉淀用乙醇洗凈，調節pH至7.0，回收乙醇。金銀花、連翹加適量溫水浸泡30 min，煎煮2次，每次1.5 h，合并煎液，濾過;濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25（70～80 ℃），冷卻至40 ℃時緩慢加入乙醇，使含醇量達75%，充分攪勻，靜置12 h，濾取上清液，殘渣加75%乙醇適量，攪勻，靜置12 h，濾過，合并乙醇液，回收乙醇至無醇味，加入上述黃芩提取物，并加水適量，用40%氫氧化鈉溶液調節pH至7.0，攪勻，冷藏（4～8 ℃）72 h，濾過，濾液調節pH至7.0，加水至1 000 mL，攪勻，靜置12 h，濾過，灌封，滅菌，即得。

2.2 滅菌工藝

采用濕熱滅菌法，比較在121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序下3批雙黃連注射液的3種有效成分含量及指紋圖譜相似度。

3 結果與分析

不同滅菌程序下3批雙黃連注射液3種有效成分含量、指紋圖譜相似度見表1。由表1可見，在116 ℃×40 min的滅菌程序下，雙黃連注射液綠原酸的含量最高，這是由于綠原酸受熱會水解。121 ℃×30 min的滅菌程序下，雙黃連注射液的指紋圖譜相似度最高。

4 結論

試驗按照《中華人民共和國獸藥典》2015版中濕熱滅菌法測定在121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序下3批雙黃連注射液的3種有效成分含量。結果表明，在濕熱滅菌法下，雙黃連注射液采用121 ℃×30 min滅菌程序滅菌效果最好，雙黃連注射液的指紋圖譜相似度最高。

由于《中華人民共和國獸藥典》（2015版）滅菌法中規定：濕熱滅菌法除了可以采用121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序外，還可以采用其他的溫度和時間參數。但無論采用何種滅菌溫度和時間參數，都必須證明所采用的滅菌工藝和監控措施在日常運行過程中能確保物品滅菌后的SAL≤10-6。本試驗只驗證了滅菌法中121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3種滅菌程序。在這3種程序中，121 ℃×30 min滅菌程序對雙黃連注射液影響程度最小。

參考文獻：

[1] 王艷偉，宋立言，代雪平，等.雙黃連注射液HPLC指紋圖譜研究[J].中成藥，2011，33（9）：1461-1464.

[2] 吳立軍.天然藥物化學[M].北京：人民衛生出版社，2007.

[3] 林仙軍. 中獸藥雙黃連注射液鑒偽技術研究[D].杭州：浙江大學，2016.

[4] 李 楠，杜怡婷，馬 鑫，等.雙黃連色譜指紋圖譜和譜效關系研究進展[J/OL].首都師范大學學報（自然科學版）：1-13[2020-12-09].