HPLC法檢測5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚顆粒劑

徐勇存，金鑫雷，霍春梅，張平，周建成(浙江天豐生物科學有限公司檢測中心，浙江 金華 321000)

0 引言

5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚顆粒劑為三元復配混劑，是由符合標準的丙草胺原藥、噁草酮原藥、乙氧氟草醚原藥及載體和助劑制成。藥劑通過雜草的根部、葉片吸收，是一種水稻田選擇性除草劑。試驗結果表明，該制劑對一年生雜草有優良的防除效果。目前此三元復配混劑的檢測方法未見報道。本文列舉的丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚檢測方法可將丙草胺、噁草酮、乙氧氟草醚及其雜質快速的分離、測定。有利于幫助企業組織生產，并進行科學全面的質量管理，維護公司產品的信譽和用戶的利益。

1 實驗部分

1.1 儀器設備

高效液相色譜儀LC1260：配有二極管陣列檢測器(美國Agilent 公司)、色譜柱：Eclipse Plus C18，4.6×50 mm(i.d.)1.8 μm(美國Agilent 公司)、超聲波清洗器：KQ-400B(昆山市超聲儀器有限公司)、超純水機：Milli-Q(美國Millipore 公司)。

1.2 試劑

乙腈：色譜純；異丙醇：色譜純；磷酸：分析純；丙草胺標樣、噁草酮標樣、乙氧氟草醚標樣：采購自國家農藥質量監督檢驗中心(沈陽)，其質量分數分別為98.3%、99.2%、98.9%；5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚顆粒劑(3.2%丙草胺+1.1%噁草酮+0.7%乙氧氟草醚)：浙江天豐生物科學有限公司。各有效成分結構式如圖1、圖2、圖3 所示[1]。

圖1 丙草胺結構式

圖2 噁草酮結構式

圖3 乙氧氟草醚結構式

1.3 標準溶液和試樣溶液的制備

1.3.1 標樣溶液的配制

準確稱取丙草胺標樣0.064 g、乙氧氟草醚標樣0.014 g、噁草酮標樣0.022 g(精確至0.000 02 g)置于100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解，超聲波浴槽中脫氣10 min，取出降至室溫后，用甲醇補加至刻度，搖勻，經微孔濾膜過濾，此為標樣溶液。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約2 g(精確至0.000 02 g)置于100 mL 容量瓶中，加入5 mL 水超聲使樣品化開，加甲醇溶解，超聲波浴槽中脫氣10 min，取出降至室溫后，用甲醇補加至刻度，搖勻，經微孔濾膜過濾，此為試樣溶液。

1.4 HPLC 分析條件

流動相：Ψ(乙腈+異丙醇+0.05%磷酸水溶液)=15+28+57(V/V/V)；流速：1.4 mL/min；檢測器波長：245 nm；柱溫：50 ℃；進樣體積：5 μL[2]。

1.5 測定和分析

在上述操作條件下，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，計算各針有效成分響應值的重復性，待相連兩針各有效成分的峰面積變化小于1.5%時，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚顆粒劑典型的標樣、試樣色譜圖如圖4和圖5 所示，丙草胺保留時間約5 min、乙氧氟草醚保留時間約8min、噁草酮保留時間約9 min。

圖4 標樣色譜圖

圖5 5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚顆粒劑試樣色譜圖

1.6 計算

將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標樣溶液中的峰面積分別進行平均。丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)的質量分數X1按式(1)進行計算：

式中：r1為標樣溶液中丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)峰面積的的平均值；r2為試樣溶液中丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)峰面積的平均值；m1為標樣的質量(g)；m2為試樣的質量(g)；p為標樣中丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)的質量分數(%)[3]。

2 結果和討論

2.1 色譜條件的選擇

檢測波長的確定：用二極管陣列(DAD)檢測器進行光譜掃描，在245 nm 波長處3 個有效成分(丙草胺、噁草酮、乙氧氟草醚)吸收值較大且雜質1、雜質2、雜質3 吸收值較小，故選擇245 nm 為檢測波長。

流動相的選擇：流動相選用甲醇-0.05%磷酸水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液不同配比濃度時，有效成分和雜質不能完全分離，在乙腈-0.05%磷酸水溶液中加入異丙醇時，分離度有明顯改善，經過試驗發現當流動相選用Ψ(乙腈+異丙醇+0.05%磷酸水溶液)=15+28+57(V/V/V)時，各有效成分及雜質得到很好地分離，峰形對稱。

2.2 方法線性相關試驗

結果表明，丙草胺(圖6)在此分析條件下具有良好的線性關系。線性回歸方程為y= 848.6x-5.664 5，相關系數R2=0.999 5。乙氧氟草醚(圖7)在此分析條件下具有良好的線性關系。線性回歸方程為y= 6 901.8x-8.346 9，相關系數R2=0.999 8。噁草酮(圖8)在此分析條件下具有良好的線性關系。線性回歸方程為y= 708 7x-9.534，相關系數R2=0.999 9。

圖6 丙草胺標準曲線圖

圖7 乙氧氟草醚標準曲線圖

圖8 噁草酮標準曲線圖

2.3 方法精密度的測定

按上述方法平行檢測6 次，測得丙草胺標準偏差為0.02，變異系數為0.58%，乙氧氟草醚標準偏差為0.01，變異系數為1.77%，噁草酮標準偏差為0.01，變異系數為1.30%(如表1所示)。

2.4 方法準確度的測定

采用加標回收率法測定回收率，結果表明此方法具有較高的回收率(如表2 所示)。

表1 方法精密度

表2 丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚加標回收率

3 結語

經過上述試驗表明，此檢測方法具有線性關系好、精密度高、回收率高、分離效果好的特點，適用于企業生產過程中的定性定量分析。