DC-CIK聯合化療對結直腸癌根治術后肝轉移患者療效及對TRF1和TRF2表達的影響

樸龍鎮，金蘭，李滕，胡烏云，梁雪

結直腸癌是臨床最常見的惡性腫瘤，具有較高的發病率和病死率，并呈逐年增長趨勢，已成為威脅人類健康的殺手之一[1-2]。結直腸癌根治術是臨床上重要治療手段之一，一般患者預后較好，但約50%患者會發生術后轉移，其遠處轉移最常見部位為肝臟，若不采取有效治療，其5年生存率不足10%，因此提高其生存率，控制肝轉移是臨床的重大挑戰[3-4]。端粒功能失調是引發癌癥的重要分子機制之一，端粒長度與結構的改變在直腸癌根治術后肝轉移發生發展過程中具有重要作用[5]。端粒重復序列結合因子1(TRF1)和TRF2對維持端粒的結構及實現其功能具有重要意義[6]。樹突狀細胞—細胞因子誘導的殺傷細胞(DC-CIK)免疫技術是一種細胞生物免疫治療方法，是一種新抗腫瘤模式，目前已成為應用最為廣泛的生物治療手段之一[7]。現對結直腸癌根治術后肝轉移患者給予DC-CIK聯合化療，觀察其療效及對TRF1和TRF2表達的影響，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年1月—2015年3月延邊大學附屬醫院腫瘤科收治晚期結直腸癌伴肝轉移患者98例，按隨機數字表法分為對照組(49例)和觀察組(49例)，2組患者性別、年齡、BMI、腫瘤原發部位、肝轉移灶大小、數目比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究經醫院倫理委員會審核批準，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

表1 2組患者臨床資料比較

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準：①符合結直腸癌的診斷標準[8]；②患者均發生肝轉移；③生存期>8周，均為單側病灶。(2)排除標準：①伴有精神類疾病者；②拒絕配合，依從性極低者。

1.3 治療方法 對照組患者采用XELOX方案(奧沙利鉑+卡培他濱)化療：奧沙利鉑(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司生產)130 mg/m2，d 1；卡培他濱(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司生產)1 g·m-2·d-1，2次/d，d 1～21，21 d為1個周期。觀察組在對照組基礎上，第2次靜脈化療結束后第7天連續3 d采用靜脈回輸自體DC-CIK細胞，每次輸注>3×109個DC-CIK細胞，每療程輸注細胞總數>1×1010個。回輸完畢后，再次使用生理鹽水沖管，確保細胞回輸數量。

1.4 觀測指標與方法

1.4.1 CD3+、CD4+、CD8+T細胞測定：治療前后，采集患者空腹肘靜脈血3～5 ml，分離提取血清，采用流式細胞儀(美國BD公司生產)測定CD3+、CD4+、CD8+T細胞。

1.4.2 肝臟TRF1和TRF2表達檢測：治療前及治療后1個月，穿刺患者肝臟活檢，采用免疫組化染色法檢測肝臟TRF1和TRF2表達水平，相關試劑由美國Novus Biologicals公司提供。顯微鏡下細胞呈棕黃色則判斷為陽性。隨機抽取每張切片4個視野(400倍)，計算陽性細胞所占百分比，并進行百分比評分(PP)：0分，無陽性細胞；1分，陽性細胞百分比<5%；2分，陽性細胞百分比5%～20%；3分，陽性細胞百分比>20%。對染色強度進行評分(SI)：0分，無染色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，棕褐色。最終計算出免疫反應評分(IRS)=PP×SI[9]，分值范圍0～9分，得分越高說明陽性表達強度越高。

1.4.3 生活質量評分：治療后，采用QLQ-C30生活質量評分標準(包括社會、情緒、認知、角色、軀體及總健康狀況等6個功能性領域)對2組患者術后生活質量進行評價，將各項得分轉換為百分制，得分越高說明生活質量越好[10]。

1.5 臨床療效評價 依據實體瘤療效評價標準[11]，分為：完全緩解、部分緩解、疾病穩定和疾病進展，以完全緩解+部分緩解為客觀緩解率。

2 結 果

2.1 2組臨床療效比較 觀察組的客觀緩解率明顯高于對照組(67.35%vs.36.73%，χ2=13.848，P=0.003)，見表2。

表2 2組患者臨床療效比較 [例(%)]

2.2 2組治療前后T淋巴細胞亞群水平比較 治療前2組各T細胞亞群水平比較差異均無統計學意義(P>0.05)；與治療前相比，治療后，觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平升高，CD8+水平下降，且觀察組各指標優于對照組(P<0.01)，見表3。

表3 2組患者治療前后T細胞亞群變化情況比較

2.3 2組治療前后肝臟TRF1和TRF2表達水平比較 治療前，2組TRF1和TRF2表達水平比較差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，觀察組肝臟TRF1表達水平高于治療前，且高于對照組，TRF2表達水平低于治療前，且低于對照組(P<0.01)，見表4。

表4 2組患者治療前后肝臟TRF1和TRF2表達水平比較分)

2.4 2組生活質量評分比較 治療后，觀察組生活質量各項維度評分明顯高于對照組(P<0.01)，見表5。

表5 2組患者治療后生活質量情況比較分)

2.5 2組生存率比較 隨訪5年，應用Kaplan-Meier對2組患者進行生存率分析，觀察組患者生存率明顯高于對照組(χ2=4.513，P=0.023)，見圖1。

圖1 2組患者生存率分析

3 討 論

隨著我國居民生活習慣的改變及環境污染加重，結直腸癌的患病率不斷增長，其發病機制是多種因素協同作用所致，如消化道疾病(幽門螺桿菌感染、潰瘍性結直腸炎及克羅恩病)、生活習慣(肥胖、藥物、吸煙、飲酒及心理精神因素)、飲食(高脂、高蛋白飲食、微量元素攝入)及遺傳因素等[12-13]。手術治療是早期結直腸癌唯一可以治愈的手段，但25%～50%患者根治術后因肝轉移而復發，其肝轉移的可能機制為根治術后，患者腹腔內損傷的淋巴管和累積的殘留微小癌灶進入血液或淋巴液中，從而造成癌細胞的遠處轉移[14-16]。常規術后化療雖然可短時間內抑制腫瘤的生長，但卻無法從根本上解決其轉移及擴散的問題，且化療毒副作用導致患者自身免疫力降低，進而導致殘存的癌細胞迅速生長，加速病情的發展，因此如何預防、治療結直腸癌根治術后肝轉移成為臨床研究的熱點。

癌細胞缺少可激活T細胞的分子，不被T細胞識別，無法啟動主動免疫，因此導致結直腸癌在體內發生轉移，CIK細胞可激活T細胞因子，完成主動免疫過程[17-18]。CIK具有超廣的殺瘤譜，對癌細胞的識別能力極強，可增強化療的敏感性，直接精準的殺傷癌細胞，同時不會影響正常的組織與器官。DC是目前已知唯一能激活初始性T細胞的抗原遞呈細胞，其功能最強、最有效，與CIK協同作用，可解除部分結直腸癌患者術后T細胞的免疫無能，快速有效防止腫瘤局部復發和轉移，達到協同抗腫瘤作用。

結直腸癌根治術后肝轉移的發生與發展與免疫功能關系密切[19-20]。CD3+代表全部T淋巴細胞，CD4+對免疫起正調節作用；CD8+會破壞并殺傷感染細胞，對CD4+具有抑制作用，使免疫功能發生紊亂；CD4+/CD8+可反映機體的細胞免疫狀態[21]。本結果顯示，通過DC-CIK聯合化療，不僅可直接殺傷癌細胞，還能激活CD4+，同時抑制CD8+表達，增強人體免疫能力，有效調動和增強機體自主的抗腫瘤免疫反應。

端粒是存在于真核細胞內，用來穩定細胞染色體功能的一種特殊帽狀結構，其長度與細胞癌變相關度高[22]。TRF1和TRF2是2種不同的端粒結合因子，兩者廣泛參與細胞核DNA復制及其損傷修復、維系端粒酶活性和調控端粒長度等生物學活動。TRF1蛋白可調節端粒長度，且這種調節為負性調節，TRF1基因可能作為抑癌基因[23]。TRF2蛋白對端粒的長度具有正相性，TRF2基因則具有癌基因活性，可導致機體腫瘤易感性增加[24]。本結果顯示， DC-CIK聯合化療可將TRF1和TRF2作為潛在靶點，刺激TRF1表達增加，使細胞內染色體端粒的長度縮短，進而抑制乃至阻止癌細胞的增殖；同時下調TRF2表達，阻斷其對端粒DNA閉環結構的穩定作用，進而導致端粒的長度縮短，促進癌細胞凋亡，從而有效防治結直腸癌根治術后伴肝轉移，提高患者的生存質量，并延長其生存期。

綜上所述，DC-CIK對結直腸癌根治術后肝轉移具有較好的療效，可通過調節肝轉移病灶處TRF1與TRF2表達水平，抑制癌細胞生長，延長患者生存時間，值得臨床推廣應用。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

樸龍鎮：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；金蘭：圖表設計，整理資料；李滕、胡烏云：資料搜集整理，論文修改，查找文獻及參考書籍；梁雪：進行統計學分析