高效液相色譜法同時測定食品中 8種食品添加劑

◎ 王然然，王楠楠，苗育可，張 波

（承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北 承德 067000）

食品添加劑是添加到食品中以保持風味或增強口感、改善外觀或其他品質的物質。食品添加劑根據用途可分為防腐劑、甜味劑、著色劑、增稠劑等，《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》規定了不同食品中可以使用的食品添加劑的種類和限量[1]，按標準要求使用食品添加劑對食品工業發展、食品安全、延長食品保質期有重要的作用，但是違規使用或超量使用食品添加劑，就會給人體帶來危害[2]。

目前，測定食品添加劑的方法主要有液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜-質譜聯用法等[3]，而本文涉及的8種食品添加劑主要是運用的液相色譜法，依據的國家標準有《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》《食品中脫氫乙酸的測定》《食品中阿斯巴甜和阿力甜的測定》《飲料中乙酰磺胺酸鉀的測定》和《食品中納他霉素的測定 液相色譜法》[4-8]。對于同一食品樣品，需要依據多個標準進行多次檢驗，效率較低，亟需建立一種簡單通用的方法，能同時測定多種食品添加劑。

1 材料與方法

1.1 儀器設備

高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測器，美國Waters公司）；ME303T/02型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司)；PB 10型酸度計（德國Sartorius公司）；KS-500DE型超聲波清洗器（昆山潔力美超聲儀器有限公司）；HC-3018R高速冷凍離心機（科大創新股份有限公司中佳分公司）。

1.2 材料與試劑

檢測樣品：來自河北省承德市雙灤區超市，包括飲料、香腸、面包、糕點、辣條等常見食品。試劑：甲醇和乙腈（色譜級，美國Fisher公司）；乙酸銨 （HPLC，99.5%，西亞試劑）；亞鐵氰化鉀和乙酸鋅（分析純，永大試劑）；娃哈哈純凈水。標準品：苯甲酸、山梨酸、糖精鈉（1 mg·mL-1，中國計量科學研究院）；安賽蜜（1 000 μg·mL-1，壇墨質檢）；阿斯巴甜（純度99.5%，Standard Analytical Chemicals）；阿 力 甜 （純度99.2%，ANPEL）；脫氫乙酸（純度99.2%，壇墨質檢）；納他霉素（純度98.6%，TMstandard）。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準曲線的配制

用20%甲醇水配制成阿斯巴甜、阿力甜和納他霉素濃度為100 mg·L-1，其他5種濃度為20 mg·L-1混合中間液。再逐級稀釋至最終濃度：阿斯巴甜、阿力甜和納他霉素：5 mg·L-1、10 mg·L-1、20 mg·L-1、40 mg·L-1、50 mg·L-1和100 mg·L-1，其他5種為1 mg·L-1、2 mg·L-1、4 mg·L-1、8 mg·L-1、10 mg·L-1和20 mg·L-1。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：安捷倫XDB C18反相色譜柱（250 mm× 4.6 mm×5 μm）；流動相：A：20 mmol·L-1乙酸銨、B：甲醇；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL；流量：1 mL·min-1；檢測器：PDA檢測器（190～400 nm）；梯度洗脫程序：0～10 min，95% A；10～20 min，95%～50% A； 20～25 min，50%～20% A；25～30 min，20% A； 30～30.1 min，20%～95% A；30.1～35 min，95%A。

1.3.3 樣品前處理

稱取2 g樣品（精確至0.001 g），置于50 mL離心管中，加入20 mL提取溶劑（20%甲醇水），超聲30 min，然后加入2 mL亞鐵氰化鉀溶液和2 mL乙酸鋅溶液，混勻，在離心機上8 000 r·min-1離心5 min，將上清液倒出，剩余殘渣再提取1次，最后合并兩次提取液，用20%甲醇水溶液定容至50 mL。過0.22 μm有機濾膜，上機分析。

2 結果與分析

2.1 色譜條件優化

2.1.1 色譜柱的選擇

參考國家標準檢測方法[4-8]，C18柱即可滿足要求，于是試驗了兩種色譜柱，當使用Tnature C18時，峰型不好，當使用安捷倫XDB C18色譜柱時，8種添加劑峰型對稱，所以選擇安捷倫XDB C18作為最終的色 譜柱。

2.1.2 流動相組成

參考國家標準檢測方法[4-8]，流動相一般選擇緩沖鹽和有機相體系，當選用乙腈和20 mmol·L-1乙酸銨作為流動相時，由于乙腈的洗脫能力強，大部分添加劑還沒分離就一起被沖下來，無法達到分離效果；當選用甲醇和20 mmol·L-1乙酸銨作為流動相時，8種添加劑的分離效果最好。由于等度洗脫無法達到分離要求，所以通過調整流動相比例和梯度洗脫程序，最終確定了最佳的分離條件。

2.1.3 提取溶劑的選擇

由于不同添加劑的性質不同，使用不同溶劑從食品基質中提取的效率不同，所以選擇標簽上有添加一種或幾種目標物質的食品作為試驗對象，分別用水、20%甲醇水、50%甲醇水和80%甲醇水作為提取溶劑，考察不同提取溶劑的提取效率，結果表明20%甲醇水提取效率最高。

2.1.4 檢測波長的選擇

用二極管陣列檢測器進行全波長掃描，8種添加劑的最大吸收波長為：安賽蜜214 nm，苯甲酸224 nm，山梨酸254 nm，糖精鈉205 nm，脫氫乙酸293 nm，阿斯巴甜和阿力甜200 nm，納他霉素303 nm。如果選用230 nm，阿斯巴甜和阿力甜的響應會低很多，選用220 nm時，8種添加劑的響應都較好，所以選擇220 nm為檢測波長。

2.2 線性回歸方程、檢出限和回收率

將配制好的標準曲線上機分析，得到每種物質的線性方程，在線性范圍內線性較好，相關系數R均大于0.997，以3倍信噪比作為檢出限，以飲料為代表樣品，添加低水平的8種添加劑混標，每個水平重復測定6次，計算平均回收率和精密度，結果見表1。8種添加劑的加標回收率為92.0%～98.2%，相對標準偏差為1.02%～2.99%。

表1 8種食品添加劑的線性方程及相關系數等表

3 結論

該方法前處理簡單、準確、高效，適用于多種食品基質，為同時測定食品中多種防腐劑和甜味劑提供技術支撐，對食品添加劑的監管具有重要意義。