高效液相色譜法測定棉菜籽中甲萘威殘留量

◎ 劉曉燕

（北京世紀科環生態農業研究院，北京 101102）

甲萘威又名西維因，是一種氨基甲酸酯類殺蟲劑，由于殺蟲譜廣和毒性較低，在農業上應用廣泛。目前，甲萘威殘留檢測多采用HPLC-FLD 柱后衍生法和HPLC-PDA 法。HPLC-FLD 柱后衍生法的靈敏度較高，但前處理復雜，衍生劑穩定性較差，耗時較長，在某種程度上也提高了檢測成本，不宜廣泛使用。HPLCPDA 法前處理簡便，準確性和重復性較好，但在檢測油性產品時，加標回收的數據達不到滿意的效果。為了克服現有方法的不足，建立起廣泛的應用基礎，本實驗采取與GB/T 5009.21—2003[1]完全不同的前處理方法，樣品經乙酸甲醇提取、QuECHERS 試劑凈化后，測定甲萘威的含量。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

棉菜籽，購自超市。

乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、丙酮等為分析純；甲醇、乙腈為色譜純；弗羅里硅土柱：500 mg/6 mL；C18 固相萃取柱： 500 mg/6 mL；艾杰爾ASB-C18色譜柱：250 mm×4.6 mm， 5.0 μm。

甲萘威標準品：1 000 μg·mL-1，購自農業部環境保護科研監測所。

1.2 儀器及設備

LC-20AT 高效液相色譜儀（配二極管陣列（PDA）檢測器、日本島津公司）、FA2204B 分析天平（天津天馬衡基儀器有限公司）、KDC-160HR 低速離心機（安徽中科中佳科學儀器有限公司）

1.3 標準儲備液配制

準確移取濃度為1 000 μg·mL-1的標準物質溶液 1.0 mL，用甲醇定容至10 mL 配制成甲萘威標準儲備液100.0 mg·L-1。

1.4 樣品的提取與凈化

稱取2 g（精確至0.01 g）棉菜籽，加入1 g 氯化鈉和10 mL 1%乙酸甲醇，渦旋3 min，靜置30 min，加入適量的無水MgSO4冷卻后渦旋3 min，5 000 r·min-1離心5 min，取5 mL 上層轉移至分散性固相萃取管 （750 mg 硫酸鎂、150 mg PSA、100 mg GCB）中，充分渦旋，5 000 r·min-1離心5 min，然后取2 mL 上清液轉移至玻璃離心管中，40 ℃氮氣吹干，20%甲醇定容1 mL，渦旋3 min，0.22 μm 有機濾膜過濾，待測。

1.5 色譜條件

色譜柱為艾杰爾ASB-C18：250 mm×4.6 mm， 5.0 μm；流動相：甲醇+水（80+20，V/V）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：280 nm；柱溫：40 ℃；進樣量：10 μL。

2 結果與分析

2.1 實驗條件優化

2.1.1 提取劑的選擇

對樣品棉菜籽中的甲萘威分別采用了正己烷、乙腈、丙酮、1%乙酸甲醇進行提取。如表1 所示，在相同的添加水平下，用1%乙酸甲醇為提取劑時，回收率高達88.8%，且甲萘威在酸性條件下會更加的穩定，雜質較少，峰形更好，因此本文最終選用1%乙酸甲醇作為提取溶劑。在1%乙酸甲醇為提取溶劑時，不用添加有機溶劑可達到去油效果，且對甲萘威的檢測結果無影響。

表1 不同提取溶劑對化合物的回收率表

2.1.2 凈化方法選擇

GB/T 5009.21—2003[1]中的凈化方法非常繁瑣，且稱樣量大。本方法采取1%乙酸甲醇進行提取，通過無水硫酸鎂進行有效的脫水后，將得到的提取液分別移取到分散性固相萃取柱、弗羅里硅土柱和C18 固相萃取柱中。平行測定3 次得到試驗結果。經試驗證實，C18 固相萃取柱和弗羅里硅土柱的平均回收率為65%～70%，分散性固相萃取柱的平均回收率能達到88%～90%，因此本文選用分散性固體萃取柱。

2.1.3 分散性固相萃取柱填料的配比

根據王曉菁等的研究成果[2]，加入50 mg PSA 和150 mg 無水硫酸鎂進行前處理，凈化效果不理想，因此實驗中增加了配比量。因填料中添加GCB、PSA 能進行有效的凈化，所以填料設計分別為1 組：600 mg無水硫酸鎂和100 mgPSA，填料；2 組：900 mg 無水硫酸鎂、100 mg PSA 和15 mg GCB；3 組：750 mg 無水硫酸鎂、150 mg PSA 和100 mg GCB。添加相同量的甲萘威標準儲備液進行加標回收試驗，將不同配比的填料回收率進行比較。根據比對選擇3 組，其配比為750 mg 無水硫酸鎂、150 mg PSA 和100 mg GCB，該配比下的填料凈化回收率最高。3 種不同填料配比實驗回收率結果見表2。

表2 3 種不同填料配比實驗結果表

2.1.4 波長的選擇

將甲萘威標準溶液在高效液相色譜（帶PDA 檢測器）儀上200 ～300 nm 的范圍內進行掃描測定，確認在280 nm 的波長處有最高吸收峰，且雜質也最少。因此選擇檢測波長為280 nm。分別以甲醇和水、乙腈和水作為流動相。

2.1.5 流動相的選擇

甲醇和乙腈作為流動相時分離度均可以達到甲萘威檢測的基本要求。考慮到乙腈成本比甲醇要高，所以選擇甲醇水作為流動相。實驗證明當甲醇與水的體積比為80 ∶20 時，甲萘威峰形對稱性較好，且能有效的分離雜質，所以將流動相定為甲醇∶水（80 ∶20，V/V）。

2.1.6 色譜柱的選擇

色譜柱選用了艾杰爾ASB-C18 型色譜柱和島津ODS-C18 型色譜柱進行色譜分離甲萘威，實驗結果表明，兩種色譜柱所分離出的目標化合物的峰形，分離度都滿足要求，考慮島津ODS-C18 型色譜柱比艾杰爾ASB-C18 型色譜柱的成本要高，所以采用艾杰爾ASB-C18 型色譜柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm），分離的峰形滿意，保留時間為19.910 min。

2.2 線性范圍

根據色譜條件對0.10 mg·L-1、1.0 mg·L-1、2.0 mg·L-1、5.0 mg·L-1和10 mg·L-1甲萘威標準工作曲線進行測定，測定結果見表3。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標進行繪制標準曲線，得回歸方程y=141 016x-8 918.3，相關系數為0.999 8。

表3 甲萘威標準曲線數據表

2.3 檢出限與定量限

在上述樣品處理方法及色譜條件下，以信噪比 S/N=3 計，測得甲萘威檢出限為0.1 mg·kg-1；以信噪比S/N=10 計，測得甲萘威定量限為0.5 mg·kg-1。根據GB 2763—2019[3]規定油料和油脂甲萘威中的最大殘留量為1 mg·kg-1，因此該方法完全滿足棉菜籽中甲萘威殘留量分析的要求。

2.4 加標回收率的測定

對棉菜籽的陰性樣品做加標回收試驗，分別稱取已處理的樣品2.0 g，添加0.500 mg·kg-1、1.000 mg·kg-1、 1.500 mg·kg-1的甲萘威標準工作溶液進行做加標試驗，并設置空白樣，平行測定6 次。結果見表4，在 0.500 mg·kg-1、1.000 mg·kg-1、1.500 mg·kg-1的3 個 不同的加標水平回收率在82.9%～91.9%，相對標準偏差（RSD）在2.17%～4.25%，說明該方法的準確度能夠滿足甲萘威的測定要求。

表4 加標回收率實驗結果表

2.5 精密度

準確配制甲萘威標準工作溶液1.0 mg·L-1，根據上述色譜條件，進樣量10 μL，平行測定7 次。甲萘威色譜峰的保留時間波動小于0.1 min，如表5 所示，峰面積相對標準偏差（RSD）小于10%，表明方法精密度良好。

表5 精密度檢測結果表

3 結論

本文采用QuECHERS 前處理技術以高效液相色譜法測定棉菜籽中的甲萘威，比GB/T 5009.21—2003 的方法操作簡單、準確性高、重現性好，降低了實驗中的成本，提高了操作人員的實驗效率。GB 2763—2019[3]對甲萘威的最大檢出量為0.1 mg·kg-1，用本方法檢測出的甲萘威檢出限小于0.1 mg·kg-1，定量限小于0.5 mg·kg-1，因此該方法適用于在棉菜籽上的殘留量的檢測。