基于氣相色譜頂空進樣法測定 杏仁露中氰化物的含量

◎ 楊甲忠，馬 麗，馬文靜，張 征，于 揚，高 婧

（承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北 承德 067000）

杏仁露的原材料苦杏仁是一種優良的藥食兩用資源，作為中藥材，功能主治有降氣止咳平喘、潤腸通便等[1]；作為食品因其富含蛋白質、多種維生素及微量元素，還具有美容、健脾等保健功效。研究表明，苦杏仁中含有苦杏仁苷，其在體內能被腸道微生物酶或苦杏仁本身所含的苦杏仁酶水解，產生微量的氫氰酸與苯甲醛[2]，苯甲醛為GB 2076—2011 規定允許使用的食品用合成香料，正常食用沒有毒副作用，而氰氫酸可與細胞線粒體內的細胞色素氧化酶中的3 價鐵起反應，抑制呼吸酶，造成細胞內窒息[3]，常會導致人焦慮、頭痛、頭暈、低血壓、癱瘓、昏迷及意識下降等反應，攝入劑量達0.5 ～3.5 mg·kg-1即可致人急性中毒。目前杏仁露中氰氫酸檢測是依據國家通用檢測標準GB 5009.36—2016[4]，該標準中收錄了紫外分光光度法和氣相色譜法。因苦杏仁主成分苦杏仁苷分解產物苯甲醛會干擾檢測，沒有專屬性，并不適用標準的方法，所以本課題組擬研究氣相色譜頂空進樣法對杏仁露中的氫氰酸進行檢測，并采用該方法對市場銷售的多批次杏仁露中的氫氰酸進行檢測并擬定限度。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Agilent Technologies 7890B 氣相色譜儀（配有ECD 檢測器，7697A 自動頂空進樣器）：美國安捷倫公司；UWV-2 多管旋渦混合器：北京憂晟聯合科技有限公司；KS-250DE 超聲波清洗器：昆山潔力美超聲儀器有限公司。

GBW（E）080115 水中氰成分分析標準物質 （50 μg·mL-1）：購自國家標準物質研究中心；濃磷酸、氯胺試劑T（分析純）、氫氧化鈉：購自福晨（天津市）化學試劑有限公司；試驗用水為哇哈哈純凈水：購自哇哈哈集團有限公司。

樣品的采集：從市場上隨機抽取20 個不同廠家共50 批次的樣品（編號設為Y1 ～Y50）進行試驗。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線溶液的制備

氰離子標準工作溶液：使用時將水中氰成分分析標準物質用水稀釋成質量濃度為0 mg·L-1、0.001 mg·L-1、0.002 mg·L-1、0.010 mg·L-1、0.050 mg·L-1和0.100 mg·L-1的標準工作溶液。精密量取10 mL 標準工作溶液于頂空瓶中，加入17%磷酸溶液，渦流混合，然后加入 0.2 mL 10 g·L-1的氯胺-T 溶液，立即加蓋密封，渦流混 合，待測。

1.2.2 樣品的制備

精密量取10 mL 試樣于頂空瓶中，加入0.2 mL17%磷酸溶液，渦流混合，然后加入0.2 mL 氯胺-T 溶液 （10 g·L-1），立即加蓋密封，渦旋，待測。

1.2.3 氣相色譜條件

色譜柱：WAX 毛細管柱（30 mm×0.25 mm× 0.25 μm）；色譜柱溫度：40 ℃保持5 min，以50 ℃·min-1速率升至200 ℃保持2 min；載氣：氮氣；純度不低于99.999%；進樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：260 ℃；分流比為5 ∶1；柱流速：2.0 mL·min-1。

1.2.4 頂空進樣器條件：

頂空平衡溫度：50 ℃；取樣針溫度：55 ℃；傳輸線溫度：100 ℃；頂空平衡時間：30 min；進樣時間：0.03 min；加壓時間：1 min；載氣壓力：25.5psi 。

2 結果與分析

2.1 樣品前處理條件的選擇

2.1.1 樣品取樣體積的選擇

將樣品Y1 分別按照1 mL、3 mL、5 mL、7 mL和10 mL 體積取樣置于頂空瓶中，分別加9 mL、7 mL、 5 mL、3 mL、0 mL 的 水， 加 入0.2 mL 磷 酸 溶 液（1 ∶5，V ∶V），渦流混合，然后加入0.2 mL 氯胺-T溶液（10 g·L-1），立即加蓋密封，渦旋，按照1.2.3 及1.2.4儀器條件進樣，根據曲線計算，結果精密度為2.5%。相同條件下，取樣體積越大，準確度越高，故取樣體積定為10 mL。

2.1.2 衍生劑用量的選擇

精密量取0.10 mg·L-1的標準工作溶液10 mL 置頂空進樣瓶中，分別添加10 g·L-1的氯胺-T 溶液0.02 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL和0.50 mL，按照1.2.3及1.2.4 儀器條件進樣，結果氯胺T 加入量在0.05 mL 后色譜響應值穩定。但是氯胺-T 作為衍生劑，容易分解，所以為了保證衍生效果，本方法規定加入量為0.2 mL。

2.1.3 衍生酸度的選擇

衍生是在中性和酸性條件下進行的，精密量取 0.10 mg·L-1的標準工作溶液10 mL 置頂空進樣瓶中，加入衍生劑0.2 mL 10 g·L-1氯胺-T 溶液，分別加入17% 磷酸溶液0 mL、0.01 mL、0.02 mL、0.05 mL、 0.10 mL、0.20 mL 和0.50 mL，按照1.2.3 及1.2.4 儀器條件進樣，結果加入量為0.05 mL 以上時，色譜響應值較穩定，所以本方法規定加入17%磷酸溶液0.2 mL。

2.2 線性范圍的考察

將1.2.1 項下配制的標準工作溶液在1.2.3 及1.2.4儀器條件下進行檢測，以對應的峰面積為縱坐標Y，氰離子濃度（ng·μL-1及mg·L-1）為橫坐標X 繪制標準曲線。計算得出線性方程Y=5 669 920X+25 344.102 84， r=0.995 81，結果表明該方法在0.001 ～0.10 mg·L-1范圍內線性關系良好。以3 倍噪聲計算，檢出限為1.76×10-5mg·L-1，以10 倍噪聲計算，定量限為5.87×10-5mg·L-1。

2.3 重復性試驗

將樣品Y1 取樣6 次分別按照1.2.2 方法提取以及在1.2.3、1.2.4 儀器條件下進樣，根據標準曲線計算精密度為2.2%，說明重復性良好。

2.4 精密度試驗

將樣品Y1 取樣按照1.2.2 方法提取以及在1.2.3、1.2.4 儀器條件下連續進樣6 次，根據標準曲線計算RSD 為3.7%，說明精密度良好。

2.5 回收率試驗

將樣品Y1 取9 份，取樣量為5 mL，分別做3 個濃度水平的加標回收試驗，每個水平做3 份，按照按照1.2.2 方法提取以及在1.2.3、1.2.4 儀器條件下試驗。由表1 可知，回收率結果在93.3%～99.8%。樣品加標圖譜見圖1。

表1 回收率結果表

圖1 樣品色譜圖

2.6 樣品測定及限度制定

將樣品Y1 ～Y50 按照1.2.2 方法提取以及在1.2.3、1.2.4 儀器條件下試驗，結果見表2。

在《食品安全國家標準 飲料》（GB 7101—2015） 中規定杏仁露中氰化物的標準為≤0.05 mg·L-1[5]，本研究對20 個不同廠家共50 批次的杏仁露中氰化物進行檢測，結果濃度在0 ～0.024 mg·L-1，均低于標準規定，說明大部分杏仁露廠家原材料苦杏仁脫苦完全，可以安全飲用。

表2 樣品測定結果表

3 結論

本研究建立了對杏仁露中氰化物含量檢測的頂空氣相色譜法，在0.001 ～0.10 mg·L-1范圍內線性相關系數r 為0.995 81，精密度為3.7%，重復性RSD 為2.2%，小于標準方法中對頂空進樣要求的15%，回收率在93.3%以上，綜上，該方法操作簡單、靈敏度高，結果準確度高，能夠為監督檢測部門提供了參考依據。