妊娠期肝內膽汁淤積癥患者膽固醇代謝相關基因表達及意義

張 娟，樊延霞

(1.寶雞市婦幼保健院產科，陜西 寶雞 721000；2.延安市第四人民醫院產科，陜西 延安 716000)

妊娠期是女性特殊的生理時期，隨著體內胎兒的生長，母體也伴隨有相應的生理變化，在一定條件下可出現各種特有疾病[1]。妊娠期肝內膽汁淤積癥(Intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)就為妊娠期特有的疾病，臨床主要表現為皮膚瘙癢、黃疸，可造成胎兒宮內窘迫、新生兒窒息、早產等，甚或死胎、死產[2-3]。該病的具體發病機制還不明確，可能是由多種因素相互依存、共同作用形成的。研究表明妊娠期膽固醇水平呈現顯著波動狀況，孕31周左右達到高峰，以總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)變化為主[4]。妊娠期膽固醇水平的升高除了滿足胎兒正常發育需要，還可為妊娠期儲備能量[5]。不過如果膽固醇水平嚴重異常可能增加不良妊娠結局的發生。而孕期膽固醇代謝異常與肝內膽汁淤積癥的發生也有一定的相關性，可能與膽汁酸參與了膽固醇的調節相關[6]。在膽固醇代謝相關基因中，免疫相關基因NOS2編碼的蛋白與葡萄糖和膽固醇代謝有關，具有調節血管舒張、血管生成、血小板聚集、免疫功能等多種生理功能。由SFTPD基因編碼的表面活性蛋白D(Surfactant protein D，SPD)是調節炎癥反應、介導機體清除病原體的重要先天性免疫調節劑，也與其他的糖脂代謝存在相關性[7-8]。本文探討了ICP患者膽固醇代謝相關基因NOS2與SFTPD的表達及意義，希望為闡明ICP的發生機制提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2018年12月至2020年7月選擇在本院診治的ICP患者102例作為病例組，選取同期在本院正規產檢并分娩的健康孕婦102例作為對照組。納入標準：具有本地區戶籍或者居住在本地區≥3年；病例組符合ICP的診斷標準；漢族；孕周≥28周；孕婦知情同意本研究；本院倫理委員會批準了此次研究；年齡20～40歲；單胎妊娠。排除標準：存在其它嚴重疾病者或其他妊娠合并癥；孕28周前存在肝功能異常或胎兒發育異常者；臨床資料缺乏者；其他疾病引起的皮膚瘙癢、黃疸者。兩組孕婦的孕周、產次、孕次、體重指數、年齡等對比差異均無統計學意義(均P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料對比

1.2 膽固醇代謝血清學指標檢測 采集所有孕婦的空腹靜脈血2～3 ml，3000 r/min離心10 min，取上層血清，采用日立全自動生化分析儀檢測甘油三酯(TG)、TC、載脂蛋白A(ApoA)、載脂蛋白B(ApoB)、LDL-C、高密度脂蛋白(HDL-C)含量。

1.3 膽固醇代謝相關基因表達檢測 取1.2中的血清學樣本，采用qPCR方法檢測NOS2與SFTPD相對表達水平，按Trizol RNA提取試劑操作說明提取血清總RNA，逆轉錄得到總cDNA，然后進行qPCR。NOS2上游引物：5’-GACCACCAAGGGCCAAGGCAGATTCT-3’；下游引物：5’-TTAGTCAAAGGGAATTCCAGCGATG-3’。SFTPD上游引物：5’-AGCAGAAAGTCAAAGGGTCATAAGCCA-3’；下游引物：5’-GCAGTAATCTCCCGGGATTACTAAG-3’。PCR反應條件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，45次循環，以U2作為內標準，計算目的基因的相對表達水平。

1.4 妊娠結局調查 調查兩組孕婦的妊娠結局，包括早產、剖宮產、新生兒窒息、產后出血、羊水污染等。

2 結 果

2.1 兩組膽固醇代謝血清學指標對比 病例組的TG、TC、LDL-C、ApoB值均高于對照組(均P<0.05)，HDL-C、ApoA值均低于對照組(均P<0.05)，見表2。

表2 兩組膽固醇代謝血清學指標對比

2.2 兩組膽固醇代謝相關基因相對表達水平對比 病例組的NOS2與SFTPD基因相對表達水平均高于對照組(均P<0.05)，見表3。

表3 兩組膽固醇代謝相關基因相對表達水平對比

2.3 兩組妊娠結局對比 病例組的早產、剖宮產、新生兒窒息、產后出血、羊水污染等發生率均高于對照組(均P<0.05)，見表4。

表4 兩組妊娠結局對比[例(%)]

2.4 相關性分析 在病例組中，NOS2、SFTPD基因相對表達水平與早產、剖宮產、新生兒窒息、產后出血、羊水污染都存在相關性(均P<0.05)，見表5。

表5 ICP患者NOS2、SFTPD基因相對表達水平與妊娠結局相關性

3 討 論

ICP多發于妊娠中晚期，該病的發生與感染、中毒、遺傳等有關，受遺傳、內分泌和環境因素的共同影響[9]。本研究顯示病例組的TG、TC、LDL-C、ApoB值均高于對照組，HDL-C、ApoA值均低于對照組，表明ICP患者多伴隨有膽固醇代謝異常。從機制上分析，肝臟是膽固醇代謝的重要器官，高水平的膽酸對細胞膜有破壞作用，可致肝細胞損傷，從而導致膽固醇異常[10-11]。ICP患者雌激素水平增高可導致血脂增高，引起內皮細胞功能紊亂，膽固醇代謝障礙，也可刺激前列腺素釋放，導致機體膽固醇代謝異常[12]。

ICP在臨床上主要表現為手足瘙癢與膽汁酸水平升高，也可增加妊娠期婦女緊張情緒，從而增加孕中晚期心理負擔。該病患者也可伴隨有白細胞炎癥反應、胰島素抵抗、膽固醇代謝異常，伴隨有氧化應激相關基因表達異常。本研究顯示病例組的NOS2與SFTPD基因相對表達水平均高于對照組，從機制上分析，NOS2基因過表達導致NO水平增高，這與ICP的發生相關；其高表達也可促進血管平滑肌細胞炎癥因子的表達，導致機體動脈粥樣硬化發生風險增大[13-14]。肝細胞內的膽汁酸濃度，SFTPD可增強機體清除病原體，調節炎癥反應，也是機體糖脂代謝相互影響的重要因素[15-16]。ICP患者SFTPD基因表達水平上調，可能為高膽固醇環境誘導機體發生氧化應激和炎癥反應，進而促進SPD的高表達[17]。

ICP患者血脂異常可引起胎盤血流灌注量不足，胎兒易發生缺氧，導致妊娠結局不佳[18]。本研究顯示病例組的早產、剖宮產、新生兒窒息、產后出血、羊水污染等發生率均高于對照組；ICP患者的NOS2、SFTPD基因相對表達水平與早產、剖宮產、新生兒窒息、產后出血、羊水污染都存在相關性。從機制上分析，NOS2、SFTPD的高表達可導致胎兒因暴露于高膽汁酸環境時間更持久，在確定胎盤成熟的情況下需要及時引產，從而導致早產率增加[19-20]。并且ICP患者更易出現膽固醇代謝異常，可能是新生兒窒息、羊水污染等原因導致，且膽固醇異常和糖代謝異常關系密切，可能增加早產、剖宮產的發生率[21-22]。

綜上所述，ICP患者伴隨有膽固醇代謝血清指標異常，其可增加妊娠不良結局發生率，NOS2與SFTPD基因表達量也增加，且與妊娠不良結局存在相關性。