韋玉勇 徐 步 張蘭琴 張 斌 沈欣悅 龔建森 俞 燕 吳 坤 董永毅*
1.江蘇省家禽科學研究所,江蘇揚州225125;2.江蘇省揚州市江都區畜牧獸醫站,江蘇揚州225200;3.江蘇省揚州市畜牧獸醫站,江蘇揚州225000;4.江蘇省動物疫病預防控制中心,南京210036
2015年下半年開始,江蘇多家養殖企業的雛鵝出現一種以拉白色糞便、腿腳癱瘓為主要癥狀的高發病率與病死率疾病,造成嚴重經濟損失。初步診斷確定為雛鵝腎腫綜合征(俗稱鵝痛風病),通過實驗室病原分離鑒定、動物回歸試驗,確診為由鵝星狀病毒繼發大腸桿菌感染,及時采取治療措施后有效控制了疫情。
經調查得知,江蘇省內的揚州鵝、泰州白鵝、大三花及其雜交品種鵝苗在大規模育雛階段,飼喂全價配合飼料5~7 d 后,約60%的鵝群出現弓背、縮頭、怪叫、拉白色糞便等癥狀;初期病程急且死亡率較高,后期常出現關節腫脹、跛行、癱瘓,總體死淘率呈逐年升高趨勢,最高近30%;發病鵝群一般在1日齡、4~5日齡采取小鵝瘟抗體注射。有部分養殖企業曾用星狀病毒抗體預防,也有部分養殖場用小蘇打、雙尿酸鈉飲水對癥治療,但效果不顯著[1]。
雛鵝發病初期表現為弓背縮頭、行動遲緩、蹲伏、不愿走動(圖1A),有的甚至癱瘓(圖1B),精神沉郁,食欲減退,羽毛蓬亂,排灰白色水樣稀糞或石灰渣樣糞便(圖1C)。隨著病程發展,出現趾跗關節腫脹、突出(圖1D),部分伴有發熱。本病病程通常7 d 左右,病情嚴重者可達10 d 以上。一旦有混合或繼發感染,癥狀更為復雜并出現批量死亡。

圖1 臨床癥狀
病死雛鵝剖解病變可見:心臟表面尿酸鹽及絮狀物沉積、部分雛鵝心包積液或絨毛心(圖2A),心肌增生肥大、心臟血管充盈(圖2B);肝臟表面尿酸鹽沉積,質地變脆(圖2C);腎臟極度腫脹、出血,形成典型花斑腎,兩側腎小管里面有大量尿酸鹽沉積(圖2D);部分病死鵝在肌肉組織、關節組織(圖2E)、腸腔及腹膜上有廣泛性尿酸鹽沉積(圖2F);嚴重病例可見腺胃內尿酸鹽廣泛沉積(圖2G)。

圖2 病理變化
選擇腎臟病變典型的雛鵝腦組織樣品,無菌條件下取腦組織分別接種于普通營養瓊脂、麥康凱培養基,置37 ℃培養24 h。臨床多份腦組織樣品在麥康凱培養基上呈現圓形隆起、邊緣整齊、表面光滑、大小不等的紅色菌落。
對分離的細菌采用革蘭氏染色鏡檢,可見兩端鈍圓、革蘭氏陰性、無芽孢的小桿菌、符合大腸桿菌形態特點;生化試驗結果顯示,其能發酵棉子糖、山梨醇、葡萄糖并產生氣泡,能利用硝酸鹽,不能利用尿素、枸櫞酸鹽(表1)。判定分離菌為大腸桿菌。

表1 4 株分離菌生化反應結果
針對分離的多株大腸桿菌,結合臨床用藥實際,篩選部分藥物進行藥敏試驗[2],其藥敏結果顯示,分離菌株對頭孢噻呋鈉、大觀霉素高度敏感,宜作為治療時首選藥物;對強力霉素、黏桿菌素低敏(表2)。

表2 藥敏試驗結果
將采集的有典型病變雛鵝的肝、腎等組織樣品,研磨成勻漿后反復凍融3 次,離心取上清,0.22 μm 濾器除菌后,將濾液分成2 份待用,一份用于病毒分離,另一份用于相關病毒PCR 檢測。
1)病毒分離。取組織樣品濾液經卵黃囊途徑接種10 枚10日齡鵝胚,置37 ℃溫箱孵育,連續觀察5~10 d,收集尿囊液,病變明顯的尿囊膜和組織臟器研磨并混勻。收獲的組織處理液繼續接種10日齡鵝胚,連續盲傳至第4 代。在第3 代開始發現胚體死亡,絨毛尿囊膜增厚并附有尿酸鹽沉積(圖3A),胚體發育不良伴有水腫、出血,剖檢胚體發現肝臟呈現土黃色、斑塊狀出血(圖3B);個別胚體腎臟蒼白、雙側輸尿管尿酸鹽輕度沉積。

圖3 鵝胚病變
2)RT-PCR 檢測。取接種前處理組織樣品1 份、接種后處理組織樣品1 份,分別抽提RNA 并反轉錄為cDNA。根據GenBank 上已發表的鵝星狀病毒(GAstV)的ORF1 基因序列,使用Primer5.0 軟件設計1 對特異性鑒定引物,引物序列如下:上游引物F:5'-GATTGGACCCGTTATGATGG-3',下游引物R:5'-TTTGACCCACATACCAAAGAC-3',用于擴增鵝星狀病毒ORF1b 約435 bp 的片段[3]。對組織樣品cDNA 進行PCR 擴增檢測,結果發現,經鵝胚接種后的組織樣品顯示較強星狀病毒特異性引物擴增條帶(圖4)。檢測結果表明,樣品中存在星狀病毒,由此推斷患病鵝群感染了鵝星狀病毒。

圖4 鵝胚組織樣品PCR 檢測結果
為了解分離的病毒是否為引起雛鵝發病的病原,從未發生雛鵝痛風病的種鵝場購買了20 只已接種小鵝瘟抗體的健康苗鵝,隨機分為A、B 兩組,每組10 只。A 組經肌肉接種0.5 mL 發病雛鵝病毒分離尿囊液,B 組作為對照組不作處理。接種后分別隔離飼養,觀察14 d。
A 組苗鵝接種后,前5 d 精神、食欲正常,第7天開始陸續表現出減食、拉白痢、弓背、關節腫脹等雛鵝腎腫綜合征自然病例類似的早期癥狀,并死亡2 只,第10、11 天各死亡3 只,死亡苗鵝剖檢后發現關節囊、心肌表面、腹膜、腎臟等部位有廣泛性尿酸鹽沉積;同時伴有腎臟腫脹及輸尿管尿酸鹽沉積等病變。無菌采集攻毒后死亡苗鵝病料,按常規方法處理后經卵黃囊途徑接種10日齡鵝胚,收取死亡鵝胚的尿囊液,經RT-PCR 檢測鵝星狀病毒陽性。B 組鵝苗在隔離飼養期間一切正常,RT-PCR 檢測陰性。
根據患鵝的臨床癥狀、剖檢病變,結合實驗室相關診斷,對臨床類似病例初診疑為鵝星狀病毒感染誘發雛鵝腎腫綜合征。在發病初期一般可采取全群對因注射抗病毒、對癥口服中藥或二者結合方案的抗病毒治療方案[4-8]。
1)方案一:50 萬IU/瓶干擾素按200 羽/瓶劑量、2 mg/mL 反義核酸按0.2 mL/羽劑量、2 000 羽/瓶白介素按200 羽/瓶劑量、1 g 頭孢噻呋鈉按100 kg體重劑量和勻配合鵝星狀病毒高免抗體肌注2.5 mL/只,隔日視情況復注1 次;禽用口服補液鹽快速飲水,連用3~5 d;柴胡護肝顆粒+車錢草提取物飲水,連用3~5 d。
2)方案二:雙黃連注射液1 mL/kg,頭孢西丁1 g/100 kg,地塞米松0.05 mg/kg,混合均勻后肌注。隔日觀察,必要時復注。
3)方案三:干擾素配合白介素混合飲水250 羽/套,2~3 h 用完;痛星舒散方劑(主藥:黃芪、枳殼)拌料500 g/80 kg 料,全天使用,連用4~5 d;速控痛星舒(主藥:金銀花、茵陳、車前草、澤瀉、牛膝)方劑飲水(1 000 只鵝/500 g),連用4~5 d;晚上結合禽用口服補液鹽(主要成分為雙乙酸鈉)飲水,200 g/300 kg,連用5 d。
積極采取上述治療方案,同時降低飼喂日糧蛋白水平,有目的地降低嘌呤代謝水平。加強對鵝群動態觀察,及時隔離發病患鵝或淘汰無治療價值的患鵝;調節適宜育雛溫、濕度;適當降低日糧蛋白水平[8-9],增飼青料,減少夜間飼料投喂;有條件時加強戶外運動。加強消毒防范措施,對鵝舍和活動場地進行噴霧消毒,早晚各1 次。
針對雛鵝腎腫綜合征發病初期采取上述治療方案或措施,一般2~3 d 后鵝群健康狀況總體有所好轉,第5 天精神狀態恢復、偶發零星死亡,第7 天臨床癥狀完全消失,飲水、采食恢復至正常水平。據統計,2019年2月-2020年6月臨床共診治86 例雛鵝腎臟腫脹綜合征,治愈率達85%,說明藥物的使用可以有效抑制或減緩本病在鵝群進一步發生與發展。對于本病中后期患病鵝群療效有待進一步評估與分析。在雛鵝腎腫綜合征高發病區域應慎重采取注射式治療方案,在病情判斷不明時,不當使用易誘發雛鵝大量死亡,建議采取中藥對癥、對因治療方案。對鵝養殖量較大的肉鵝場,建議在育雛階段采取早期藥物投飼與飼養管理相結合的方式加強對本病的防控。后期跟蹤調查顯示,發病鵝群經治愈后生產性能略受影響,一般推遲5~7 d 出欄,推測為雛鵝發病期間飼料攝入量不足而引起。
雛鵝腎臟腫脹綜合征在江蘇省內呈現流行性態勢,該病的發生、發展及其危害日趨加重,影響了全省鵝產業持續性發展、提質增效進程。為確切了解該病發生情況,摸清發病原因,尋找防治方案,在江蘇省內展開了針對本病的流行病學調查工作,重點調查分析疫病分布、流行特點、發病原因。通過調查研究得出如下幾點意見,供業界同仁參考:①無序種源雜交可能是誘發本病的源頭[3];②苗鵝頻繁被動免疫存在人為傳播的風險和速度;③種鵝發生黃病毒病與雛鵝發生本病存在直接或間接聯系;④部分炕孵業種蛋來源不確定性增加本病防控難度;⑤現有商品鵝生產模式與方式促進了本病的傳播;⑥育雛鵝料營養水平有待進一步研究[9];⑦密切關注大日齡鵝發病情況,警惕隱性感染。