酵母硒對豆粕替代魚粉的作用效果研究
——以大口黑鱸飼料為例

周紹紅, 方懷義, 尹艷鎮, 楊正寬, 張艷秋

(1.廣西大學 動物科學技術學院， 廣西 南寧 530000； 2.北部灣大學 海洋學院， 廣西 欽州 535011；3.北部灣富硒產業研究院， 廣西 欽州 535011; 4.欽州市生物廢棄物資源富硒功能化利用重點實驗室， 廣西 欽州 535011)

大口黑鱸(Micropterussalmoides)，俗稱加州鱸，隸屬于鱸形目，太陽魚科，黑鱸屬，是典型肉食性淡水魚類。大口黑鱸原產于美國加利福尼亞州，因其生長速度快、抗病力強、耐活體運輸、肉質鮮美、營養豐富，現已成為我國淡水養殖的重要經濟魚類[1-2]。豆粕是優質廉價的飼料原料，作為魚粉的替代品已廣泛應用于水產飼料中。然而，豆粕含有多種抗營養因子，硒含量低，會影響動物對營養物質的消化和吸收[3-4]。酵母硒(Selenium yeast)是一種高品質有機硒，其毒副作用小、生物利用率高[5-6]，能夠提高水產動物生長性能和飼料轉化率[7]、提高機體抗氧化能力[8]和增強免疫力[9-10]。飼料中硒缺乏或過量都會抑制魚類的生長[11-12]。本試驗在大口黑鱸幼魚飼料中添加酵母硒，以《中華人民共和國農業部公告第1224號》中飼料硒含量最高推薦劑量(0.5 mg/kg)的約10倍添加量(4.8 mg/kg)作為試驗最高添加量，探究其在大口黑鱸幼魚飼料中的作用效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用大口黑鱸幼魚魚苗購自佛山市三水白金水產種苗有限公司；酵母硒購自安琪酵母股份有限公司，酵母硒中硒的質量分數為2 400 mg/kg；魚粉、菜粕、豆粕和血粉等飼料原料購自廣西澳華農牧科技有限公司。

1.2 試驗設計與分組

試驗以飼料中魚粉的質量分數為32%作對照組，以飼料中魚粉的質量分數為16%，并分別添加0、100、200、400、600、800、1 000、2 000 mg/kg酵母硒作試驗組，分別命名為C、Se0、Se0.24、Se0.48、Se0.96、Se1.44、Se1.92、Se2.4和Se4.8組。各組飼料中硒的質量分數分別為0、0、0.24、0.48、0.96、1.44、1.92、2.4、4.8 mg/kg，各組飼料等氮、等能。將原料粉碎、過40目篩，飼料加工配制參考文獻[13]的做法，飼料貯存在-20 ℃冰箱中備用。飼料配方及風干后質量見表1，營養組成見表2。

表1 實驗飼料配方及風干后質量

表2 每100 g實驗飼料的營養組分

1.3 試驗方法與飼養管理

養殖試驗在北部灣大學海洋學院水產養殖室進行。共設置9個實驗組，每組3個平行。實驗開始前，魚苗停喂1 d，挑選規格相近的健康魚苗并隨機分組，每組25尾魚，共計675尾，分別放入27個養殖桶內，魚苗初始體質量為(8.35±0.05)g，養殖桶為玻璃鋼材質，容積為0.3 m3。

試驗期間，每天的8:00和16:00飽食投喂，投喂量為各組魚體質量的3%左右，每天根據天氣、水溫、魚苗的攝食情況和生長情況適當調整。每天記錄各實驗組攝食量、水溫和魚體活動的情況，發現死魚及時稱重記錄。試驗期間保持自然光照，養殖系統保持水溫在27.0～30.0 ℃、溶氧為6.0～6.5 mg/L、pH為7.5～8.0。養殖持續28 d。

1.4 樣品處理與測定方法

試驗結束前，停止喂食24 h，將每個養殖桶的魚苗全部撈出，計數并稱質量。從各組隨機抽取3尾魚，測量其體重、體長、內臟團質量和肝臟質量，另取5尾魚，稱重后裝進樣品袋密封，置于-20 ℃的冰箱中保存，用于后期測定全魚成分。全魚經在高壓滅菌鍋125 ℃下蒸煮20 min后在烘箱中105 ℃下烘干，粉碎后過40目樣品篩，充分拌勻后裝進樣品袋密封保存，分別測定全魚水分(AOAC法)、粗蛋白質(凱氏定氮法)、粗脂肪(石油醚抽提法)和灰分(550 ℃灼燒法)。各組另取肝胰臟和背側肌肉冷凍干燥后保存，用于測定肝胰臟和肌肉中的硒含量，測定時稱取均勻的樣品置于50 mL聚四氟乙烯消化管中，加入10 mL的優級純濃硝酸，于微波消解儀(CEM-MARS-5 XPRESS)中180 ℃時消化30 min。冷卻后取出，移到50 mL比色管中，用20 mL的超純水分兩次洗滌消化管，合并溶液，用5%的優級純硝酸定容至50 mL，于ICPMS(Agilent 7 900)中進行檢測。

1.5 計算方法與數據分析

實驗樣品魚的增重(WG,g/fish)、成活率(SR,%)、攝食率(FI，%/day)、飼料轉化率(FCR，g/g)、特定生長率(SGR，%/day)、肥滿度(CF，g/cm3)、肝體比(HSI，%)、臟體比(VSI，%)、飼料氮沉積率(NRE，%)、飼料氮廢物排放[TNW，g·N/(kg·fish·gain)]按如下公式計算：

m=Wt/Nt-W0/N0

(1)

SR=100×(Nt/N0)

(2)

FI=100×I/[(W0+Wt+Wd)/2×t]

(3)

FCR=I/(Wt-W0+Wd)

(4)

SGR=100×[ln(Wt/Nt)-ln(W0/N0)]/t

(5)

(6)

HSI=100×Wl/Ws

(7)

VSI=100×Wv/Ws

(8)

NRE=100×(Wt×CNt-W0×CN0+Wd×CN0)/(I×CNf)

(9)

TNW=1 000×(I×CNf)×(1-NRE/100/(Wt-W0+Wd)

(10)

式中，I為每個養殖桶投喂飼料的質量(g)，W0和Wt分別為實驗開始和結束時每個養殖桶內實驗魚的總質量(g)，Wd為每個養殖桶生長養殖實驗過程中死魚的重量(g)，t為實驗持續的時間(d)，Ws、Ls、Wv和Wl分別為實驗取樣魚的體質量(g)、體長(cm)、肝質量(g)和內臟質量(g)，N0和Nt為實驗開始和結束時每個養殖桶內魚的數量(尾)，CN0和CNt分別為實驗開始和結束時魚體的氮含量(g)，CNf為飼料氮質量(g)。

實驗數據采用Excel2013軟件進行處理，通過SPSS22.0軟件進行單因素方差分析，所有以百分數表示的數據先經反正弦轉換后再進行方差分析。所得數據用平均值±標準誤差表示，若組間差異顯著，采用Duncan test法進行多重比較，差異顯著水平為P<0.05。

2 結果與分析

2.1 大口黑鱸幼魚的生長性能

由表3可知，各組大口黑鱸幼魚成活率差異不顯著(P>0.05)，C組的末均重、增重和特定生長率與Se0.48組差異不顯著(P>0.05)，但明顯低于其余各組(P<0.05)；隨著飼料中酵母硒含量的增加，各試驗組的末均重、增重和特定生長率呈先升高后降低趨勢；除對照組外，各組間的末均重、增重和特定生長率均無顯著差異(P>0.05)。

表3 大口黑鱸幼魚的初均重、末均重、增重、成活率和特定生長率狀況

2.2 大口黑鱸幼魚的飼料利用率和飼料氮廢物排放

由表4可知， C組的攝食率與Se0.48和Se0.96兩組的差異不顯著，但顯著低于其余各組(P<0.05)；C組的飼料轉化率與Se0.48組的差異不顯著，但顯著高于其他各組(P<0.05)；Se0.48組的飼料轉化率顯著高于Se0.24、Se1.44和Se1.92組(P<0.05)，其余各組間的飼料轉化率無顯著差異(P>0.05)。各組間的飼料氮沉積效率無顯著差異(P>0.05)。豆粕替代50%魚粉對大口黑鱸幼魚飼料氮廢物排放無顯著影響；隨著飼料中酵母硒含量的增加，飼料氮廢物排放無規律性變化，Se1.92組的飼料氮廢物排放最高，Se1.44組的最低，最高組是最低組的1.21倍，各組間無顯著性差異(P>0.05)。

表4 大口黑鱸幼魚的攝食率、飼料利用率和飼料氮廢物排放情況

2.3 大口黑鱸幼魚的形體指數

由表5可知，豆粕替代飼料中50%的魚粉后，大口黑鱸幼魚的肥滿度、臟體比和肝體比均有所降低，且肝體比降低顯著(P<0.05)；隨著酵母硒含量的增加，各組大口黑鱸幼魚的肥滿度和臟體比均無顯著差異(P>0.05)，Se0.48組的肝體比明顯高于其余各組(P<0.05)。

表5 大口黑鱸幼魚的肥滿度、臟體比和肝體比狀況

2.4 大口黑鱸幼魚的全魚組成

由表6可知，用豆粕替代飼料中50%的魚粉后，各組大口黑鱸幼魚的全魚水分、粗蛋白質和灰分質量含量均無顯著影響，粗脂肪質量含量顯著升高(P<0.05)；隨著酵母硒質量含量的增加，各組的粗蛋白質和粗脂肪的質量含量無顯著差異；Se0.24組的水分質量含量顯著低于Se0.48和Se1.92組(P<0.05)；Se0和Se0.48組的灰分顯著低于Se0.24、Se0.96、Se1.44、Se1.92、Se2.44和Se4.8組(P<0.05)，其余各組間的差異不顯著。

表6 大口黑鱸幼魚的全魚組成情況單位：%

2.5 大口黑鱸幼魚的肌肉和肝胰臟硒含量

如表7所示，用豆粕替代飼料中50%的魚粉后，大口黑鱸幼魚肌肉和肝臟中硒的質量含量無顯著差異；隨著酵母硒質量含量的增加，Se0.48組肌肉中硒的質量含量顯著低于Se1.92、Se2.4、Se4.8組(P<0.05)，Se4.8組肌肉中的硒質量含量與Se1.92和Se2.4無顯著差異，但顯著高于其余各組(P<0.05)；Se4.8組的肝胰臟中硒質量含量顯著高于其余各組(P<0.05)。

表7 大口黑鱸幼魚的肌肉和肝胰臟硒含量單位：mg·kg-1

3 討論

3.1 酵母硒和豆粕對大口黑鱸幼魚的生長性能和飼料利用率的影響

豆粕替代魚粉水平因豆粕類型不同而有所差異，駱軍寧[14]用脫脂豆粕替代魚粉，當比例超過13%時，隨著替代比例的升高，大口黑鱸的生長性能逐漸下降。王新霞[15]在加州鱸飼料中添加10%的發酵豆粕，能顯著地提高加州鱸的生長性能。在本試驗中用豆粕替代加州鱸飼料中的魚粉，將魚粉含量降低至16%，對大口黑鱸幼魚的生長性能未產生不良影響。在此基礎上添加酵母硒對其增重無明顯促進作用。隨著飼料中豆粕含量的增加，大口黑鱸幼魚的攝食率逐漸升高，飼料轉化率變低，與陳乃松等[16]的研究結果一致。郭正富等[17]的研究表明，鱸魚的增重率、特定生長率隨著飼料中硒質量含量的升高呈先升高后降低的趨勢。在本試驗中，隨著飼料中酵母硒質量含量的增加，各組大口黑鱸幼魚的生長性能、增重、特定生長率和飼料氮廢物排放量均無顯著差異。這與龍萌[6]和許友卿[18]的研究結果一致。但最高組的飼料氮廢物排放量比最低組的高約21%，表明在一定范圍內，高含量的酵母硒會降低大口黑鱸幼魚對飼料中蛋白質的吸收和利用，從而增加飼料氮廢物的排放量，加重對養殖水環境的污染。

3.2 酵母硒和豆粕對大口黑鱸幼魚全魚組成的影響

飼料中不同硒的質量含量對不同魚類全魚體組成的影響存在差異[19]，添加酵母硒對大口黑鱸具有一定的脂肪代謝促進作用[20]、對鯽魚全魚體組成無顯著影響[21]。本試驗中，用豆粕替代50%的魚粉后，對大口黑鱸幼魚全魚體水分、粗蛋白質和灰分的含量均無顯著影響，但粗脂肪的含量顯著升高；隨著酵母硒質量含量的增加，全魚體粗蛋白質和粗脂肪的含量無顯著差異。該試驗結果與酵母硒對團頭魴[6]、鳡魚[18]的影響結果基本一致。

3.3 酵母硒和豆粕對大口黑鱸幼魚肌肉和肝胰臟中硒含量的影響

硒作為機體所必需的微量元素，是多種酶的活性中心，對生物體免疫系統的調節和生理生化代謝過程起著重要作用[2,22]。肝胰臟作為魚類重要的免疫和代謝器官，肝胰臟中的硒含量間接反映魚類的免疫能力和代謝水平。本試驗中，隨著飼料中酵母硒含量的增加，各試驗組的加州鱸肝體比呈先增加后降低的趨勢，表明酵母硒會影響大口黑鱸幼魚肝胰臟的發育，且肝胰臟中硒的含量隨著硒劑量的增加而逐漸增加，與郭正富等[17]的研究結果相似。本試驗中，大口黑鱸幼魚肝胰臟硒的含量明顯高于肌肉中硒的含量，表明大口黑鱸幼魚體內硒累積的主要部位在肝胰臟。這與陳春秀等人[23]對半滑舌鰨的研究結果一致。

4 結論

綜上所述，豆粕替代部分魚粉可將大口黑鱸幼魚飼料中魚粉的質量含量降至16%，添加酵母硒不能顯著地提高在大口黑鱸幼魚飼料中以豆粕替代魚粉的效果。