雷帕霉素促進(jìn)上頜竇黏膜細(xì)胞成骨分化

林彥君 王榮昌 許江漢 劉超瑋 陳江 吳東

上頜后牙缺失導(dǎo)致的該區(qū)域牙種植手術(shù)中骨量不足或骨缺損在臨床較為常見(jiàn)，目前對(duì)于此類患者的牙種植治療方式一般是進(jìn)行上頜竇提升手術(shù)并種植[1]。經(jīng)牙槽嵴上頜竇底提升術(shù)是一項(xiàng)具有良好遠(yuǎn)期成功率的上頜竇提升術(shù)術(shù)式[2]。而且，很多臨床醫(yī)生在經(jīng)牙槽嵴上頜竇底提升術(shù)過(guò)程中不植入骨替代材料。然而，臨床上可觀察到不植骨同樣可獲得較好的骨增量，滿足了種植手術(shù)對(duì)骨量的要求[3]。目前的研究表明，不植骨下行上頜竇提升術(shù)獲得的充足的骨量和上頜竇的成骨潛能有關(guān)。上頜竇具有成骨潛能的原因之一是上頜竇黏膜內(nèi)含有間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)，即上頜竇黏膜細(xì)胞(maxillary sinus membrane cells，MSMCs)[4]。MSMCs已經(jīng)被證實(shí)具有良好的成骨能力，是一種優(yōu)秀的組織工程種子細(xì)胞[5]。MSMCs作為一種間充質(zhì)干細(xì)胞，具有間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性。牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞作為口腔內(nèi)常見(jiàn)的間充質(zhì)干細(xì)胞類型，其成骨分化已被證實(shí)受自噬影響[6]。而雷帕霉素(rapamycin，RAPA)是經(jīng)典的mTOR抑制劑，可激活細(xì)胞自噬[7]。因此，RAPA對(duì)MSMCs成骨分化是否存在影響以及是否通過(guò)自噬途徑產(chǎn)生影響值得進(jìn)行探討研究。

本研究擬行體外分離培養(yǎng)SD大鼠MSMCs，RAPA誘導(dǎo)建立細(xì)胞自噬模型并使用透射電子顯微鏡(transmission electron microscopy，TEM)驗(yàn)證；檢測(cè)RAPA處理后成骨誘導(dǎo)過(guò)程的3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)的堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)表達(dá)，鈣沉積物數(shù)量，成骨相關(guān)基因Runx2、和Spp1以及自噬相關(guān)基因Anxa3和Becn1的變化，探究RAPA對(duì)MSMCs的成骨分化的影響。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

透射電子顯微鏡(Tecnai G2 F20 S-TWIN，F(xiàn)EI，美國(guó))；……