GAL/GALR2促進涎腺腺樣囊性癌細胞神經侵襲的研究

王珺 李歡 楊子檜 完顏超杰 張峰瑞 楊新杰 魏建華 雷德林

涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma, SACC)具有嗜神經侵襲(perineural invasion,PNI)的特性[1]，其病理表現為腫瘤細胞沿神經浸潤生長[2]，患者會出現麻木、面癱等臨床癥狀，導致治療難度增大，預后一般較差。PNI的發生涉及多因素的參與[3]，SACC的PNI機制目前仍不明確，是國內外眾多學者關注的熱點之一[4-5]。

目前，微環境理論學說被廣泛認可，認為腫瘤與神經之間存在某些因子相互介導，從而促進PNI的發生[6]。甘丙肽(Galanin，GAL)作為一種神經肽，與其受體甘丙肽2型受體(GALR2)在中樞和外周神經系統內廣泛分布[7]，在多種腫瘤進展中發揮重要作用[8]。既往文獻報道，GAL與腫瘤不良預后相關[9]。目前GAL及其受體在SACC嗜神經侵襲過程中發揮的作用尚未明確，本研究基于SACC細胞與小鼠背根神經節(DRG)共培養模型及體外神經侵襲模型，通過qRT-PCR、Western Blot、劃痕、遷移侵襲、CCK-8及流式細胞術等實驗方法，分析GAL/GALR2在SACC神經侵襲中的作用，為闡明SACC的PNI機制提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及材料

RNA提取試劑盒、qRT-PCR試劑盒(Takara，日本); BCA蛋白濃度測定試劑盒(西安晶彩生物科技有限公司); RPMI-1640培養基(Hyclone，美國); 胎牛血清(Gibco，美國); GAL細胞因子、GALR2拮抗劑M871(Tocris Biosciences，英國); 凋亡試劑盒(北京四正柏生物科技有限公司); Transwell小室(共培養實驗0.4 μm，遷移侵襲實驗8.0 μm, Corning，美國)。

1.2 細胞

涎腺腺樣囊性癌細胞系SACC-83(北京大學口腔醫學院)培養于含10%胎牛血清和1%雙抗的RPMI-1640培養基中，置37 ℃，5% CO2培養箱(Thermo Scientific，美國)。

1.3 方法

1.3.1 DRG的提取、培養 DRG取自新生BALB/c雄性小鼠脊柱內，取出后置于基質膠中，1640培養基培養48 h，之后更換含0.1% BSA的1640培養基。

1.3.2 qRT-PCR 提取共培養后SACC-83細胞總RNA，并測量各組樣本RNA的濃度和純度(EpochTM超微量微孔板分光光度計)。……