PD- 1、TIM- 3 的表達與乳腺癌臨床病理參數的相關性

姚軍

淄博市中醫醫院病理科，山東淄博 255000

乳腺癌是一種較為常見的惡性腫瘤， 較少發于男性。 雖然目前醫學發展較快，乳腺癌治療也相應取得一定進展，但仍有部分乳腺癌患者發生腫瘤轉移，造成死亡，威脅女性健康[1-2]。 癌細胞具有較高的適應和誘變能力，可成功躲避免疫系統反擊，且生存環境決定癌細胞生長發育速度， 因此乳腺癌的發生和惡化不僅和腫瘤性質有關，也和機體的免疫系統有關[3]。 最新研究表明，T 淋巴細胞的免疫功能和癌細胞的行為有關，可降低治療敏感性。 但T 淋巴細胞不能消退腫瘤，有部分研究學者認為[4]，和程序性死亡受體1-（PD-1）、T 細胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（TIM-3）的高表達有一定關系。 鑒于此， 該研究將該院2018 年1 月—2019 年3 月收治的39 例乳腺癌患者的腫瘤組織標本和癌旁組織標本作為研究對象，旨在分析PD-1、TIM-3 的表達與乳腺癌臨床病理參數的相關性。 現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用回顧性分析方法收集該院收治的39 例乳腺癌患者的腫瘤組織標本和癌旁組織標本分別作為腫瘤組和癌旁組。 年齡28～67 歲，平均（48.57±6.24）歲；病程3 個月～6 年，平均（3.16±2.08）年。

1.2 納入與排除標準

納入標準： ①臨床經影像學和病理結果確診為乳腺癌；②≥18 歲成人患者；③患者或其家屬同意翻閱其病例報告。 排除標準：①合并心、肝、腎等重要器官功能性病變；②合并免疫缺陷等疾病；③合并全身感染等疾病；④伴有其他惡性腫瘤患者；⑤精神障礙或有家族精神遺傳史者。

1.3 方法

①將所有收集的癌旁組織和腫瘤組織的標本剪碎經胰蛋白酶和膠原酶消化后， 行非連續密度離心法將其T 淋巴細胞提取出， 后放入1 mL 的Trizol 中混合均勻，后放置于-80℃下保存。 ②mRNA 表達量：于混合液中，提取出總RNA 和總蛋白，并使用瓊脂糖凝膠電泳檢測出RNA 質量。 蛋白表達量：行Western blotting 檢測方法檢測PD-1、 TIM-3 的蛋白表達量。

1.4 觀察指標

比較腫瘤細胞和癌旁組織細胞中PD-1、 TIM-3 的mRNA 和蛋白的表達量； 分析乳腺癌患者的T 淋巴細胞中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達量和臨床病理參數之間的關系； 采用雙變量Pearson 分析乳腺癌患者的PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達量之間相關性。

1.5 統計方法

2 結果

2.1 癌旁組織和腫瘤組織中PD-1、 TIM-3 的mRNA表達量和蛋白表達量

腫瘤組中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達量和蛋白表達量均高于癌旁組織，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 癌旁組和腫瘤組中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達量和蛋白表達量對比（）

表1 癌旁組和腫瘤組中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達量和蛋白表達量對比（）

組別mRNA 表達量PD-1 TIM-3蛋白表達量（ng/mL）PD-1 TIM-3癌旁組(n=39)腫瘤組(n=39)t 值P 值1.36±0.34 3.24±0.41 22.042＜0.001 0.10±0.06 0.79±0.21 19.730＜0.001 1.68±0.34 3.14±0.38 17.881＜0.001 0.26±0.05 0.95±0.34 12.539＜0.001

2.2 腫瘤組中PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達與臨床病理參數關系

腫瘤大小≥2 的PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達水平高于腫瘤大小＜2，T4 級的PD-1、 TIM-3 的mRNA 表達水平＞T3 級＞T2 級＞T1 級， 淋巴結轉移陽性的PD-1、TIM-3 的mRNA 表達水平高于陰性， 差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表2。

表2 腫瘤組中PD-1、TIM-3 的mRNA 表達與臨床病理參數關系

表2 腫瘤組中PD-1、TIM-3 的mRNA 表達與臨床病理參數關系

病理參數PD-1 TIM-3腫瘤大小（cm）＜2（n=26）≥2（n=13）t 值P 值腫瘤分級T1 級（n=12）T2 級（n=13）T3 級（n=8）T4 級（n=6）F 值P 值淋巴結轉移陰性（n=21）陽性（n=18）t 值P 值2.67±0.34 3.69±0.61 6.735＜0.001 3.07±0.62 3.89±0.74 3.650 0.001 2.69±0.31 3.24±0.53 3.34±0.67 3.87±0.74 6.776 0.001 3.01±0.52 3.17±0.56 3.74±0.66 4.18±0.94 5.820 0.002 2.58±0.67 3.68±0.92 4.260＜0.001 3.25±0.54 4.07±0.81 3.771 0.001

2.3 乳腺癌患者T 淋巴細胞PD-1 和TIM-3 的mRNA 表達量之間的相關性分析

相關性分析顯示，乳腺癌患者T 淋巴細胞中PD-1和TIM-3 的mRNA 表達量呈正相關（r=0.819，P＜0.001）。

3 討論

準確尋找乳腺癌的預后標志物， 可有效預防乳腺癌的發生以及復發， 對改善乳腺癌患者預后具有重要作用[5]。 相關研究表明[6]，免疫抑制性分子可降低機體對腫瘤的抵抗作用， 因此提高機體抗腫瘤的免疫作用需降低機體中免疫抑制性分子水平， 也可通過檢測人體中免疫抑制性分子水平初步判定機體抗腫瘤能力。

該研究結果顯示， 腫瘤組織中T 淋巴細胞的PD-1、TIM-3 的mRNA 表達量[（3.24±0.41）、（0.79±0.21）]以及蛋白表達量[（3.14±0.38）ng/mL、（0.95±0.34）ng/mL]均高于癌旁組織[mRNA 表達量（1.36±0.34）、（0.10±0.06）]及蛋白表達量[（1.68±0.34）ng/mL、（0.26±0.05）ng/mL]，PD-1、TIM-3 的mRNA 表達量呈正相關 （r=0.819，P＜0.001），和沈輝等[7]研究結果一致，腫瘤組織淋巴細胞的PD－1、TIM－3 的mRNA 表 達 量 [（3.09±0.38）、（3.42±0.31）]和蛋白表達量[（0.66±0.08）ng/mL、（0.80±0.11）ng/mL]高于癌旁組織表達量[mRNA 表達量（1.26±0.23）、（1.57±0.29）及蛋白表達量（0.10±0.01）ng/mL、（0.26±0.02）ng/mL]， 表明PD-1、TIM-3 在乳腺癌患者中呈高表達，且直接參與了乳腺癌的發生以及發展過程。 且會隨著腫瘤大小、腫瘤分級、腫瘤轉移程度加深而升高。 分析其原因在于，人體的免疫機制工作原理是消耗機體中T淋巴細胞的，封閉PD-1 分子，并同時阻斷PD-1 和配體1 的結合作用，最終恢復了T 淋巴細胞的應答，從而提高機體的抗腫瘤免疫作用[8]，因此該研究中腫瘤組織中PD-1 的mRNA 和蛋白水平均較高。 但也有部分研究學者認為，PD-1 和腫瘤患者預后有關的原因在于其表達抑制，使得其和其配體傳遞信號過程阻斷，從而腫瘤患者癥狀有改善趨勢。 還有部分研究學者認為，單獨PD-1 不能夠有效起到逆轉T 淋巴細胞消耗， 需聯合T淋巴細胞負調節物TIM-3 共同作用[9]，而該研究中腫瘤組織TIM-3 的mRNA 和蛋白水平較高，證實這一點。近年來， 聯合多種免疫檢查點為人們治療乳腺癌提供了新的思路， 早期研究表明，PD-1、CTLA-4 聯合作用，可將腫瘤微環境中T 淋巴細胞產生過程阻斷， 降低髓系細胞和Treg 細胞的表達，從而增強機體抗腫瘤免疫應答[9-10]，由此可得，阻斷PD-1 和TIM-3 的兩個檢驗點的信號通路， 也可達到抑制腫瘤增長得目的。 PD-1、TIM-3的mRNA 和蛋白水平呈高表達， 從而降低T 淋巴細胞的應答作用，降低其抗腫瘤作用，增加了癌細胞的轉移速率[11-12]， 因此在乳腺癌患者機體中，PD-1 和TIM-3的mRNA 水平呈正相關。

綜上所述，PD－1、TIM－3 水平在乳腺癌患者中呈高水平表達且呈正相關，腫瘤越大、腫瘤分級越高以及淋巴結呈陽性，其水平越高。