急性胰腺炎患者血清miR-148a-3p和miR-551b-3p的表達(dá)水平及其臨床價(jià)值

許海梅 李永超 劉海珊 廖雪霞 張?jiān)Ｕ?/p>

海南儋州市人民醫(yī)院消化內(nèi)科， 儋州 571179

AP是常見的消化系統(tǒng)疾病，輕癥患者病情較輕，可自愈，而重癥AP(SAP)病情進(jìn)展迅速、并發(fā)癥多、預(yù)后較差，給臨床治療造成了極大的困難。因此，如何對(duì)SAP進(jìn)行早期診治和預(yù)后判斷是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)問題。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一種由21～25個(gè)核苷酸組成的非編碼RNA分子，通過轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)，參與AP的發(fā)病過程[1]。研究表明，miR-148a-3p及miR-551b-3p在AP時(shí)異常表達(dá)，其與AP患者的發(fā)病及病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，是AP預(yù)后監(jiān)測(cè)、靶向治療的潛在生物學(xué)標(biāo)志物[2-3]。本研究通過檢測(cè)AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p的表達(dá)水平，分析其判斷SAP患者預(yù)后的價(jià)值，以期為SAP的早期救治提供指導(dǎo)。

資料與方法

一、一般資料

選取2017年1月至2020年9月間儋州市人民醫(yī)院收治的152例AP患者，其中男性95例，女性57例，年齡27～68(50±11)歲。根據(jù)病情嚴(yán)重程度分為MAP組(70例)、MSAP組(40例) 和SAP組(42例)。另根據(jù)42例SAP患者的預(yù)后情況，分為生存組(25例)和死亡組(17例)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合中國(guó)急性胰腺炎診治指南(2014)AP診斷及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[4]；(2)發(fā)病入院時(shí)間<72 h。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并嚴(yán)重心、肝、腎、呼吸系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤者；(2)已接受外院治療后轉(zhuǎn)診來院者。另選取同期50例體檢健康者作為對(duì)照組，其中男性34例，女性16例，年齡30～65(51±10)歲。本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

二、血清 miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)檢測(cè)

所有AP患者于發(fā)病當(dāng)天(對(duì)照組于體檢時(shí))采集空腹靜脈血5 ml，置于無(wú)抗凝劑的離心管中，離心分離血清，采用ABI 7500型熒光定量PCR儀進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。miR-148a-3p正向引物序列為5′-AGATCGCATCATCGATAGAC-3′，反向引物序列為5′-GATAGCCTGTACGTGCAGCT-3′；miR-551b-5p正向引物序列為5′-GACTAGCTGCAGCGTAGTAG-3′，反向引物序列為5′-ACTTCAGATGCATGCACATG-3′；內(nèi)參照U6正向引物序列為5′-CTGAGTCACTAGCTAGA-3′，反向引物序列為5′-ACTGTGCAGCGTAGCAT-3′。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min、95℃變性15 s、60℃復(fù)性60 s，45個(gè)循環(huán)。通過儀器自帶軟件獲取Ct值，采用2-△△Ct公式計(jì)算miR-148a-3p及miR-551b-5p的相對(duì)表達(dá)量，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)復(fù)管，取均值。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、各組一般資料比較

各組性別、年齡及體重指數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性(表1)。

表1 3組急性胰腺炎患者與健康對(duì)照者一般臨床資料比較

二、AP組和對(duì)照組miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平比較

AP組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平分別為3.18±1.27及1.94±0.85，明顯高于對(duì)照組的0.96±0.28及0.51±0.12，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為16.412、13.115，P值均<0.001)。

三、病情嚴(yán)重程度不同的AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平比較

SAP組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平分別為4.36±1.70及2.80±1.04，均明顯高于MSAP組的2.84±1.10及1.68±0.53和MAP組的2.50±0.92及1.42±0.45，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為12.850、11.273，P值均<0.001)；而MSAP組與MAP組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

四、SAP死亡組和生存組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平比較

SAP死亡組血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平分別為5.30±1.95及3.62±1.37，均明顯高于生存組的3.47±1.40及2.08±0.91，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為14.820、13.624，P值均<0.001)。

五、血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平判斷SAP患者預(yù)后的價(jià)值

miR-148a-3p及miR-551b-5p判斷SAP患者預(yù)后的最佳截?cái)嘀捣謩e為4.15、2.70，二者聯(lián)合判斷SAP患者預(yù)后的AUC值明顯高于miR-148a-3p、miR-551b-5p單項(xiàng)指標(biāo)(P值均<0.001)，其靈敏度為98.3%，特異度為84.6%(圖1、表2)。

圖1 血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平判斷重癥急性胰腺炎患者預(yù)后的ROC曲線

六、 SAP患者血清miR-148a-3p與miR-551b-5p表達(dá)水平的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析顯示，SAP患者血清miR-148a-3p與miR-551b-5p表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.835，P<0.001，圖2)。

討 論

miRNA是一類短序、內(nèi)源啟動(dòng)的小分子RNA，具有組織特異性、性質(zhì)穩(wěn)定和易于獲取等特點(diǎn)，為其成為新的生物標(biāo)志物提供了較好的前景[5-6]。miRNA參與細(xì)胞生長(zhǎng)、促血管生成、誘導(dǎo)細(xì)胞分化和調(diào)節(jié)免疫，可能在AP的發(fā)病過程和預(yù)后判斷中發(fā)揮了關(guān)鍵作用[7-8]。有研究指出，miR-148a-3p及miR-551b-5p參與介導(dǎo)炎癥反應(yīng)相關(guān)的基因調(diào)節(jié)過程，在胰腺組織異常表達(dá)，且參與胰腺炎的發(fā)生發(fā)展，具有成為SAP診斷及預(yù)后判斷的生物學(xué)標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)的潛能[9-10]。

表2 血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平判斷重癥急性胰腺炎患者預(yù)后的價(jià)值

圖2 重癥急性胰腺炎患者血清miR-148a-3p與miR-551b-5p表達(dá)水平的相關(guān)性

本研究顯示，與對(duì)照組比較，miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平在AP組中明顯升高，提示其在AP發(fā)病中發(fā)揮了一定作用。與MSAP組和MAP組比較，miR-148a-3p及miR-551b-5p表達(dá)水平在SAP組中明顯升高，且miR-148a-3p及miR-551b-5p在死亡組的表達(dá)明顯高于生存組，說明高表達(dá)的miR-148a-3p及miR-551b-5p可能促進(jìn)AP的病情進(jìn)展，導(dǎo)致預(yù)后較差。這主要是miR-148a-3p及miR-551b-5p參與調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞因子，兩者的高表達(dá)促使各種因子及炎癥遞質(zhì)釋放，造成全身炎癥反應(yīng)綜合征，導(dǎo)致循環(huán)、呼吸或腎功能衰竭，進(jìn)而造成SAP患者死亡。有研究認(rèn)為，SAP患者miRNA表達(dá)水平明顯高于MAP和MSAP患者，miRNA對(duì)判斷AP的病情進(jìn)展具有較好的幫助[11]。Zhang等[12]和Kus′nierz-Cabala等[13]研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，miR-551b-5p在MSAP和SAP患者中的表達(dá)明顯升高，其可能通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)來參與SAP的發(fā)生，有望作為SAP病情判斷的一個(gè)可靠指標(biāo)。另有研究表明，miR-148a-3p在AP中高表達(dá)，參與了AP發(fā)病過程，在AP診斷和預(yù)后判斷中具有較大的幫助[14]。本研究結(jié)果顯示miR-148a-3p及miR-551b-5p對(duì)SAP患者預(yù)后判斷均具有一定的價(jià)值，兩項(xiàng)聯(lián)合判斷的靈敏度更高，說明miR-148a-3p及miR-551b-5p可作為判斷患者SAP預(yù)后的良好指標(biāo)，兩項(xiàng)聯(lián)合的效能更好。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突