云南省某規(guī)模化豬場三種主要病毒抗體檢測與分析

馬振乾，王輝之，王宗升，梁俊超，王小龍，夏小靜，王新平

(1.吉林大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)學(xué)院,吉林 長春 130062； 2. 河南科技學(xué)院 動物科技學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003；3.青島易邦生物工程有限公司 動物基因工程疫苗國家重點實驗室，山東 青島 266000)

疫苗免疫是豬場采用的主要手段，為豬場穩(wěn)定生產(chǎn)起著至關(guān)重要的作用[1]。定期對豬群進行疫苗免疫抗體水平監(jiān)測，是衡量免疫效果的主要方法[2]。2019年5月云南某規(guī)模豬場母豬存欄450頭，生產(chǎn)較為穩(wěn)定，疫苗免疫齊全。本試驗對豬場危害較為嚴重的3種病毒性疾病(豬瘟、豬藍耳病、豬偽狂犬病病毒)進行抗體檢測，及時了解豬群的總體免疫水平，并發(fā)現(xiàn)潛在風(fēng)險，對豬場的疫苗選擇、免疫程序調(diào)整和免疫效果提高提供重要依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清 2019年5月份在云南省某規(guī)模場采集92份血液樣品，在公豬、后備母豬、懷孕母豬、哺乳母豬、斷奶母豬豬群中各隨機采集10份血液樣品，4周齡、7周齡、10周齡、13周齡、16周齡、20周齡和26周齡豬群中各隨機采集6份血液樣品，采血后自然凝固，分離血清，置-20 ℃冰箱保存待測。

1.1.2 檢測試劑盒及主要儀器 豬瘟病毒(CSFV)、豬藍耳病病毒(PRRSV)、豬偽狂犬病野毒gpI(PRV-gE)抗體檢測使用美國IDEXX ELISA抗體檢測試劑盒。酶標(biāo)儀(型號TECAN)，購自瑞士帝肯公司；離心機(型號TGL-16)，購自湘儀公司。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法及結(jié)果判定 按照各病毒的試劑盒檢測說明書進行操作，其操作過程大體如下：被檢樣品加入與感作→洗滌→酶標(biāo)二抗的感作→洗滌→加入底物→加入終止液終止→OD值測定與分析。3種病毒抗體檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)按說明書標(biāo)注見表1。阻斷率=(陰性對照OD450值-被檢樣品OD450值)/陰性對照OD450值；S/P=(樣本OD(650)-陰性對照OD(650)平均值) /(陽性對照OD(650)平均值-陰性對照OD(650)平均值)；S/N = 樣本OD(650)/陰性對照OD(650)平均值。

表1 不同病毒抗體檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)Table 1 The standard of criterion for determination of different virus antibodies

1.2.2 數(shù)據(jù)處理 樣品檢測結(jié)果應(yīng)用Excel 2013進行統(tǒng)計學(xué)分析處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬場三種病毒性疾病抗體檢測結(jié)果

該豬場92份血清樣品中，CSFV抗體平均阻斷率為74.76%，陽性率為94.57%，達到國家免疫抗體合格率；PRRSV抗體平均S/P值為1.71，抗體陽性率為86.96%；PRV-gE抗體平均S/N值為0.9，全部為陰性，離散度較低(見表2)。

表2 三種病毒性疾病血清抗體檢測結(jié)果Table 2 Results of serum antibody levels about three viral diseases

2.2 不同生產(chǎn)階段豬群的抗體檢測結(jié)果

2.2.1 不同生產(chǎn)階段豬群的CSFV抗體檢測結(jié)果 由表3可見，在4周齡時，豬群抗體水平最差，陽性率僅為50%，平均阻斷率僅為37%；其次是7周齡豬群，抗體陽性率為66.67%，平均阻斷率為43.44%。其他生產(chǎn)階段豬群CSFV抗體陽性率均為100%，抗體平均阻斷率均在60%以上。

表3 不同生產(chǎn)階段豬群CSFV抗體檢測結(jié)果Table 3 Results of CSFV antibody levels in pigs on different production stages %

2.2.2 不同生產(chǎn)階段豬群PRRSV抗體檢測 由表4可見，4周齡豬群抗體全部為陰性，平均S/P值最低；其次為7周齡豬群，抗體陽性率為66.67%，平均S/P值為1.7；哺乳母豬群抗體陽性率為80%，平均S/P值為0.55，低于其他種豬群(公豬、后備豬、懷孕母豬和斷奶母豬)抗體水平。

表4 不同生產(chǎn)階段豬群PRRSV抗體檢測結(jié)果Table 4 Results of PRRSV antibody levels in pigs on different production stages %

2.2.3 不同生長階段豬PRV-gE抗體檢測結(jié)果 由表5可見，整體豬群抗體全部為陰性，平均S/N值在0.82～0.94之間，抗體離散度較低，均在9%以下，整齊度好。

表5 不同生產(chǎn)階段豬群PRV-gE抗體檢測結(jié)果Table 5 Results of PRV-gE antibody levels in pigs on different production stages %

3 討 論

豬瘟免疫是豬場重要的基礎(chǔ)免疫之一，豬瘟控制的好壞直接關(guān)系到整個豬群的健康狀況。目前來說，豬瘟普免已經(jīng)是豬場常用的一種免疫方式[1]，對母豬的分娩率、 產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)仔質(zhì)量無顯著影響。王世玉等[2]對紅河州和楚雄州部分地區(qū)進行豬瘟抗體監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，各地豬瘟病毒抗體陽性率均在92%以上，多數(shù)地方豬瘟病毒抗體陽性率已達到100%，抗體水平的整齊度較高，免疫效果較好。本豬場豬瘟抗體陽性率為94.57%，離散度為24.71%，總體豬瘟免疫較為理想，保育階段豬群水平較差，可能與部分母豬或仔豬感染免疫抑制性疾病，干擾豬群免疫反應(yīng)有關(guān)[3]，因此，豬場應(yīng)加強常見免疫抑制性疾病的免疫，如豬藍耳病、豬偽狂犬等，同時，在豬瘟疫苗免疫時可配合免疫增強劑提高疫苗抗體水平，如轉(zhuǎn)移因子等。

藍耳病對豬場危害較為嚴重，可造成母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道癥狀，是豬場重點防控的疾病之一。王釗哲等[4]在2010-2014年期間對云南省部分規(guī)模化豬場高致病性豬藍耳病發(fā)病情況進行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，其陽性率從2010-2013年逐年遞減，2014年又呈現(xiàn)升高趨勢；每年6～8月發(fā)病率最高，多個地區(qū)均有發(fā)病。葉淑均等[5]對重慶市渝北區(qū)某種豬場調(diào)查發(fā)現(xiàn)，豬繁殖與呼吸綜合征病毒的感染程度較高，且在不同豬群普遍存在。雖然目前豬場對于藍耳病免疫爭議較大，但總體來看，藍耳病免疫豬場生產(chǎn)相對更穩(wěn)定。沈燕等[6]對安徽省對319份豬血清樣本和319份豬扁桃體樣本進行檢測，發(fā)現(xiàn)免疫豬群的HP-PRRS抗體陽性率明顯偏高，且病毒核酸陽性率低于未免疫豬群，說明疫苗免疫具有一定的保護作用，保育豬群及育肥豬群感染率相對較高，是該病防控的短板。本試驗中，保育豬群感染壓力也較大，抗體平均S/P值僅為0.14，且哺乳階段母豬抗體水平也較低，因此，豬場應(yīng)加強藍耳病免疫，建議母豬每年增加一次免疫，仔豬間隔3～4周后加強一次免疫，后期再跟蹤觀察抗體水平及生產(chǎn)狀況。

豬偽狂犬病近些年發(fā)生較為頻繁，是豬場重點關(guān)注的疾病。李春芬等[7]通過對2013-2017年安徽省豬群中豬偽狂犬病病毒(PRV)的感染情況與流行趨勢調(diào)查發(fā)現(xiàn)，安徽省豬群中PRV-gE抗體陽性率基本呈逐年上升趨勢，各生長階段均有PRV感染，豬偽狂犬病(PR)在安徽省豬群中持續(xù)流行。但是，隨著豬場對此病的重視，很多豬場可以保持陰性[8-9]，穩(wěn)定生產(chǎn)。本試驗豬場PPV防控較好，PRV-gE呈陰性。