5 種銀杏速溶茶飲料中茶多酚和黃酮類 化合物含量的測定

◎ 孫 巍，方 輝

（南通大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院（海洋學(xué)院），江蘇 南通 226001）

銀杏為銀杏科銀杏屬[1]，是一種藥食同源的植物。銀杏黃酮可以清除自由基，對癌細(xì)胞的生長進(jìn)行抑制，還能改善人體心腦器官循環(huán)，保衛(wèi)人體心腦器官安全。茶多酚是茶葉中酚類化合物及其衍生物的總稱，茶多酚的應(yīng)用廣泛，例如，將其作為保鮮劑，可以替換人工合成的抗氧化劑用來保鮮肉制品。銀杏茶飲料中起降脂作用的藥效活性成分為銀杏黃酮和茶多酚。兒茶素是茶多酚的重要成分，占茶多酚總元素的20%[2]，本文選取泰州市售5 款不同品牌銀杏速溶茶產(chǎn)品，對其兒茶素、黃酮類物質(zhì)進(jìn)行檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

無水乙醇，冰乙酸、甲醇、乙腈、兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品（南京森貝伽生物科技有限公司）、蘆丁對照品（上海哈靈生物科技有限公司）、5% NaNO2、5% Al（NO3）3、4% NaOH 及純水。

泰州市售5 款銀杏速溶茶飲料標(biāo)簽如表1 所示。

表1 5 款銀杏速溶茶飲料的配料表及產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)表

1.2 儀器與設(shè)備

數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、Waters600 型高效液相色譜儀（杭州瑞析科技有限公司）、控制器、氦氣脫氣系統(tǒng)、UV-9000S 紫外可見分光光度計(jì)（廣州瑞豐實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）及721 可見分光光度計(jì)（上海光學(xué)儀器廠）。

1.3 方法

1.3.1 兒茶素含量的測定

（1）樣品預(yù)處理。參照GB 5009.3—2016 測得含水率。準(zhǔn)確稱取銀杏速溶茶預(yù)混粉包的粉末3 g 于100 mL 錐形瓶，加60 mL 無水乙醇，置于75 ℃水溫的超聲波儀器中，250 W 超聲浸提20 min，趁熱抽濾，冷卻后定容。

（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。分別準(zhǔn)確稱取表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、表兒茶素、沒食子兒茶素沒食子酸酯及兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品，配制成100 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)母液。用HPLC外標(biāo)法定量。

（3）HPLC 色譜條件。A 相為0.2%乙酸水溶液，B相為乙腈，流速為1.0 mL·min-1，柱溫25 ℃；梯度洗脫：A 相 梯 度 變 化 為0 ～5 min，93%；5 ～33 min，

93%→70%；33 ～38 min，70%→71%；38 ～46 min，71% →24%；46 ～51 min，24%；51 ～52 min，24%→93%；52 ～60 min，93%。進(jìn)樣量為5 μL，檢測波長280 nm，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，輔以外標(biāo)法峰面積定量。

1.3.2 黃酮類物質(zhì)含量的測定

（1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法。取用適量的樣品液，在5% NaNO2堿性條件中，經(jīng)Al（NO3）3水解顯色，以該溶液為參比溶液。取標(biāo)準(zhǔn)液于比色管，用水稀釋，以試劑為參比，在400 ～680 nm 測吸光度，發(fā)現(xiàn)510 nm波長吸收最大，故選510 nm 做檢測波長。

分別量取蘆丁（0.25 mg·mL-1）進(jìn)行對照0 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL 和12 mL，將量取溶液放入50 mL 容量瓶內(nèi)[3]，勾兌蒸餾水到18 mL，加入5% NaNO21 mL，靜置5 min，加5% Al(NO3)31 mL，靜置5 min，加4% NaOH 8 mL，用蒸餾水補(bǔ)足到刻度，靜置。在510 nm 波長處測吸光度。

（2）測定黃酮類物質(zhì)含量的方法。取茶粉末3 g于燒瓶中，加30 倍量的乙醇（70%），80 ℃水浴回流，冷卻[4]。用乙醇補(bǔ)足消減的重量，過濾后轉(zhuǎn)移。取樣品液1 mL 放入50 mL 容量瓶[5]，加入蒸餾水稀釋至12 mL。加5% NaNO21 mL，靜置5 min，加Al(NO3)31 mL，靜置5 min，加4% NaOH 8 mL，蒸餾水稀釋至刻度，靜置，510 nm 波長處測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 兒茶素含量的測定結(jié)果

2.1.1 高效液相色譜的定量標(biāo)準(zhǔn)方程兒茶素的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程見表2。

2.1.2 銀杏茶飲料中兒茶素含量

高效液相色譜對5 種銀杏速溶茶進(jìn)行兒茶素含量測定，見圖1。

計(jì)算兒茶素類濃度和不同銀杏茶中兒茶素的絕對總量，詳見表3。

表2 兒茶素的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程表

圖1 高效液相色譜疊加圖

表3 5 款速溶銀杏茶飲料中兒茶素含量表

2.2 黃酮類物質(zhì)含量的測定結(jié)果

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，所得線性回歸方程為y=0.859 3x-0.016 8，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5。測定結(jié)果見表4。

表4 蘆丁對照品測定結(jié)果表

2.2.2 黃酮類物質(zhì)含量

黃酮含量的計(jì)算結(jié)果詳見表5。

表5 銀杏速溶茶飲料的黃酮類含量測定結(jié)果表

2.3 討論

5 種樣品的茶多酚和總黃酮含量如表6 所示，變異系數(shù)如表7 所示。

表6 5 款銀杏速溶茶中茶多酚和總黃酮含量表

表7 5 款銀杏速溶茶中茶多酚和總黃酮含量分析結(jié)果表

茶多酚含量平均值為2 697 mg·kg-1，變異系數(shù)為40.59%，數(shù)據(jù)之間離散程度高，表明不同品牌銀杏速溶茶飲料之間茶多酚含量差異明顯，茶飲料茶多酚含量差異會(huì)對茶飲料質(zhì)量特性產(chǎn)生影響。國家市場監(jiān)督管理總局要求茶多酚含量不得低于200 mg·kg-1，5 種銀杏速溶茶中茶多酚含量為1 420 ～4 250 mg·kg-1，測定結(jié)果表明，泰州市售5 款銀杏速溶茶中茶多酚的含量均能達(dá)到國標(biāo)要求。經(jīng)實(shí)驗(yàn)測定，含水率、總黃酮含量的平均值分別為8.68%、6.428%，變異系數(shù)均小于5%，說明在該5 種銀杏速溶茶中含水率、總黃酮含量差異不明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，5 款銀杏速溶茶飲料的質(zhì)量指標(biāo)均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，品牌5 的茶多酚含量最高，品牌3 的茶多酚含量最低，綜上所述，筆者認(rèn)為品牌5 為5 種品牌中的高品質(zhì)銀杏茶飲料。

3 結(jié)論

有醫(yī)學(xué)研究表明，當(dāng)人體一次攝入茶多酚的劑量達(dá)到160 mg 時(shí)，茶多酚可有效抑制亞硝化反應(yīng)，產(chǎn)生保健效果，一次攝入480 mg 時(shí)起到最大抑制作用。按照建議沖泡量，飲用一杯品牌5 銀杏速溶茶飲料所攝入的茶多酚含量可達(dá)到有效量。銀杏黃酮對人體肝臟損傷具有較好的生理修復(fù)作用，由于人體不能直接合成黃酮類化合物，因此銀杏速溶茶作為人體從外界獲取黃酮類化合物的途徑顯得十分重要。銀杏茶樣品中總黃酮的含量最高為品牌5 的6.47%，本文5 種樣品中的品牌5 為5 種品牌中的高品質(zhì)銀杏茶保健飲料。