單純機械治療對慢性牙周炎患者齦下菌群微生態的影響

王延峰， 曾佳駿， 袁喬， 欒慶先

1. 北京大學口腔醫學院·口腔醫院牙周科，口腔數字化醫療技術和材料國家工程實驗室，口腔數字醫學北京市重點實驗室，北京（100081）； 2. 北京大學口腔醫學院·口腔醫院第二門診部，口腔數字化醫療技術和材料國家工程實驗室，口腔數字醫學北京市重點實驗室，北京（100101）

牙周炎是以牙菌斑中的致病微生物為始動因素，宿主免疫反應等多因素共同作用導致的感染性疾病［1］。齦下菌群微生態的失調，以及牙周致病相關微生物的出現，在牙周炎的發生和發展過程中起到了關鍵性作用［2］。牙周治療的主要方法圍繞減少或消除相關致病因素為目的，機械治療包括齦上潔治、齦下刮治及根面平整，作為牙周序列治療的第一步，已被證明可以有效清除菌斑和牙石，緩解局部炎癥，促進牙周組織健康［3］。牙周炎的治療效果需要維持長期的穩定，作為基礎治療手段，僅機械治療是否可以改善齦下菌群微生態的失調狀態并維持其長期穩定值得關注。DNA 分子雜交技術［4］可以實現對特異DNA 序列的定量檢測，但是只能檢測已知序列的微生物，無法提供菌群的全面信息。基于細菌16S rRNA 的高通量測序技術將未知菌的序列與基因庫進行相似性比對，在進行半定量分析的同時，極大程度提高了對齦下菌群微生態的檢測深度和全面性［5］。既往研究中，高通量測序技術多用于比較牙周炎患者與健康人群齦下菌群微生態的差異來尋找牙周致病相關微生物，除了牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis）、齒垢密螺旋體（Treponema denticola）和福賽坦氏菌（Tannerella forsythia）等經典牙周致病菌紅色復合體外，發現齦溝產線菌（Filifactor alo?cis）、牙髓卟啉單胞菌（Porphyromonas endodontalis）等多個菌種為牙周致病相關微生物，而副流感嗜血桿菌（Haemophiluspara influenzae）、內氏放線菌（Actinomyces naeslundii）等菌種為牙周健康相關微生物。目前采用高通量測序技術比較牙周治療前后齦下菌群微生態差異的研究，多集中于侵襲性牙周炎且觀察時間不超過3 個月［6?8］。本研究采用16S rRNA 高通量測序技術，對慢性牙周炎單純機械治療前及之后6 個月內齦下菌群微生態以及臨床指標的變化進行探討，為牙周炎的病因學研究以及機械治療的長期療效提供依據。

1 資料和方法

本研究的研究方案通過北京大學口腔醫院生物倫理委員會審核（倫理審批號：PKUSSIRB?201839128），符合赫爾辛基宣言倫理原則，并已在中國臨床試驗注冊中心注冊（注冊號：ChiC?TR2000029831）。所有受試者納入研究前均已簽署知情同意書。

1.1 研究對象

本研究中，在北京大學口腔醫院牙周科就診的患者中篩選根據1999 年關于牙周病分類的國際研討會［9］診斷為廣泛型中重度慢性牙周炎的患者。本研究共納入12 名受試者（6 名男性，6 名女性），平均年齡（40.75 ± 9.1）歲，全部完成復查并進入最終分析。納入標準：①全口牙中有附著喪失和骨吸收的位點占總位點數> 30%，為廣泛型慢性牙周炎；②臨床附著喪失≥3 mm 為中重度。排除標準：①吸煙者；②女性處于懷孕或哺乳期；③有全身系統性疾病，如高血壓病、糖尿病、心血管疾病等；④近半年口服或局部使用抗生素；⑤近半年接受過任何牙周治療；⑥除去第三磨牙后，全口可保留牙少于20 顆。隨機納入受試者除去第三磨牙和無望保留患牙的上頜單側區段，基線探診深度（probing depth，PD）≥4 mm 的患牙及位點。

1.2 臨床指標

PD 每顆牙均記錄6 個位點（頰側遠中、中央、近中及舌側近中、中央、遠中），使用尖端直徑為0.5 mm 的Williams 牙周探針，采用標準力量以適宜的角度插入袋內，遇到阻力之后停止，齦緣所在刻度為PD，取最接近的毫米刻度。出血指數（bleed?ing index，BI，Mazza，1981）和菌斑指數（plaque in?dex，PLI，Silness & Lo?e，1964）每顆牙記錄兩個位點（頰側、舌側），記錄指數分別為0～5 和0～3。

1.3 臨床操作流程

受試者納入研究后，接受口腔衛生宣教，并同時進行齦上潔治。齦上潔治后1 周復診，由檢查者記錄基線臨床指標并采集齦下菌斑，受試者隨后轉至治療者對PD ≥4 mm 的位點在局麻下進行齦下刮治及根面平整，首先超聲齦下刮治去除大塊牙石，再進行手工齦下刮治及根面平整，至根面光滑堅硬，最后進行每顆牙約1 min 的超聲齦下刮治，治療時間約為30 min。治療后3 個月和6 個月，檢查者對受試者進行復查，記錄臨床指標并采集齦下菌斑。若在3 個月復查時仍有PD ≥4 mm 位點，轉至治療者繼續進行每顆牙1 min 的超聲齦下刮治。

1.4 齦下菌斑采集及16S rRNA V3?4 區測序

根據基線臨床指標，在受試者研究區段前磨牙或第一磨牙區選擇PD ≥4 mm 的最深位點，避開存在根分叉病變位點，采用紙尖法進行齦下菌斑取樣。在去除齦上菌斑、軟垢并進行隔濕后，將30號吸潮紙尖輕柔地插入牙周袋內，遇到阻力時停止，30 s 后取出放入Eppendorf 管，放置于-80 ℃冰箱內保存。所有樣本送至北京奧維森基因科技有限公司進行微生物16S rRNA V3?4 區測序分析。采用PowerSoil 微生物基因組提取試劑盒（MoBio Laboratories 公司，美國），按照說明書對樣本中的細菌DNA 進行分離提取，隨后利用Illumina MiSeq 平臺進行16S rRNA V3?4 區測序，引物序列（338F：5′?GTACTCCTACGGGAGGCAGCA?3′；806R：5′?GTG?GACTACHVGGGTWTCTAAT?3′）。測序后對有效序列進行過濾并去除嵌合體，得到可以用于后續分析的優質序列。利用Qiime 軟件對優質序列按照相似度97%為閾值進行聚類，獲得可操作性分類單元（operational taxonomic units，OTUs），并與人類口腔微生物數據庫（human oral microbiome data?base，HOMD）進行比對，對每個OTU 進行注釋，獲得分類學信息。

1.5 統計學分析

采用Statistical Product and Service Solutions 23.0 軟件（IBM 公司，美國）進行數據分析。臨床指標采用均值± 標準差的形式表示。對于所有納入位點，不同時間點兩兩比較采用的是配對樣本的t檢驗；對于取樣位點，不同時間點兩兩比較采用的是Wilcoxon 符號秩檢驗；P < 0.05 為差異具有統計學意義。

微生物Alpha 多樣性指數采用Mothur 計算，Turkey 檢驗比較不同時間點間指數差異；Beta 多樣性分析采用Qiime 軟件進行基于Unifrac 的主成分分析（principal coordinates analysis，PCoA），不同時間點微生物菌群差異的比較采用ANOSIM 相似性分析；微生物門水平、屬水平和種水平相對豐度的比較采用Wilcoxon 符號秩檢驗；在組間具有差異的微生物基礎上，通過線性判別分析效應（linear dis?criminant analysis effect size，LEfSe）尋找各組樣本間差異最明顯的生物標志物，閾值設定3；P < 0.05為差異具有統計學意義。數據分析采用R 語言（Stats 包）處理。

2 結 果

2.1 臨床指標

相較于基線，治療后3 個月和6 個月臨床指標PD、BI、PLI 均明顯降低，差異具有統計學意義（P<0.05）（表1）。

表1 慢性牙周炎患者治療前后臨床指標的變化Table 1 Changes in the clinical parameters of patients with chronic periodontitis before and after treatment

相較于治療后3 個月，治療后6 個月所有研究位點的PD 稍有增加，組間差異具有統計學意義（P < 0.05）；取樣位點趨勢相同，但組間差異無統計學意義。

2.2 微生物Alpha 多樣性及Beta 多樣性分析

對采集樣本進行篩選，共有30 個樣本符合測序要求，基線水平及治療后3 個月各有12 個樣本，治療后6 個月有6 個樣本。所有滿足測序要求的樣本共產生1 682 483 條優質序列，經過聚類后抽平共獲得700 個OTUs，平均每個樣本獲得258.1 個OTUs。

對各時間點樣本微生物Alpha 多樣性進行分析，Chao 1 指數反映群落的豐富度，用以估計群落中的OTU 數目；Observed species 指數反映群落的豐富度，為物種的數量；Shannon 指數反映群落的多樣性，基線水平、治療后3 和6 個月的各組樣本之間差異均無統計學意義（P＞0.05）（表2）。

表2 治療前后齦下菌斑樣本的微生物多樣性指數Table 2 Microbial richness and diversity of subgingival samples before and after mechanical debridement

Beta 多樣性的主成分分析，每個點代表單個樣本，圖中點與點之間的bray?curtis 距離反映樣本微生物群落組成的相似性，距離越近說明差異越小。基線與治療后3 個月的樣本多位于不同象限（圖1），治療后3 個月與基線的樣本微生物群落結構差異具有統計學意義（P＝0.014）；治療后6 個月的樣本散落在上述兩組樣本之間（圖1），與基線、治療后3個月的微生物群落結構差異均無統計學意義。

Figure 1 Principal coordinates analysis of subgingival samples before and after treatment圖1 機械治療前后齦下菌斑樣本的主成分分析

2.3 微生物群落特征分析

2.3.1 門水平的差異分析 基線時，樣本中的優勢菌門（相對豐度>1%）依次為擬桿菌門（Bacteroide?tes）、變 形 菌 門（Proteobacteria）、厚 壁 菌 門（Fir?micutes）、梭桿菌門（Fusobacteria）、螺旋體門（Spiro?chaetes）和放線菌門（Actinobacteria）；治療后3 個月，樣本中的優勢菌門依次為變形菌門、擬桿菌門、厚壁菌門、梭桿菌門、放線菌門、螺旋體門和Saccharibacteria TM7；治療后6 個月，樣本中的優勢菌門依次為變形菌門、梭桿菌門、擬桿菌門、厚壁菌門、放線菌門和螺旋體門，具體如圖2 所示。

Figure 2 Mean relative abun?dance of dominant phyla before and after treatment圖2 治療前后微生物群落優勢菌門相對豐度圖

治療后3 個月，樣本中的螺旋體門（11.57% vs.2.19%）和 互 養 菌 門（Synergistetes）（0.33% vs.0.27%）的相對豐度顯著降低（P < 0.05），而Ab?sconditabacteria SR1 的相對豐度顯著升高（0.02%vs.0.08%，P< 0.05）。治療后6 個月，樣本中上述優勢菌門的相對豐度與基線水平和治療后3 個月的差異均無統計學意義。

2.3.2 屬水平的差異分析 在各時間點樣本中平均相對豐度排名前25 的菌屬如圖3a 所示。

基線時，按照相對豐度排序前5 依次為卟啉單胞菌屬（Porphyromonas）15.96%、梭桿菌屬（Fuso?bacterium）14.81% 、密 螺 旋 體 屬（Treponema）11.57%、鏈球菌屬（Streptococcus）7.2%和奈瑟氏菌屬（Neisseria）6.74%。

治療后3 個月，按照相對豐度排序前5 依次為梭桿菌屬11.11%、嗜血桿菌屬（Haemophilus）10.81%、奈瑟氏菌屬10.0%、鏈球菌屬8.62%和卟啉單胞菌屬6.06%。

治療后6 個月，排序前5 依次為梭桿菌屬18.75%、奈瑟氏菌屬15.94%、鏈球菌屬6.66%、放線菌屬（Actinomyces）6.50%和卟啉單胞菌屬5.79%。在各時間點平均相對豐度排名前25 的菌屬中，卟啉單胞菌屬、密螺旋體屬、坦納氏菌屬（Tannerella）在治療后3 個月時樣本中的相對豐度顯著降低，產線菌屬（Filifactor）在治療后3 個月和6 個月時均顯著降低（P < 0.05）；二氧化碳噬纖維菌屬（Capnocy?tophaga）和金氏菌屬（Kingella）在治療后3 個月和6個月時相對豐度均顯著升高，而奧托氏菌屬（Ot?towia）在治療后3 個月時較基線水平相對豐度顯著升高，而在治療后6 個月時較基線顯著降低（P <0.05）。

治療前后樣本中相對豐度發生顯著性變化（P<0.05）的菌屬如圖3b 所示。

Figure 3 Mean relative abundance at the genus level before and after treatment圖3 治療前后微生物群落菌屬水平相對豐度圖

治療后3 個月共有13 個菌屬的相對豐度顯著降低，4 個菌屬的相對豐度顯著升高；治療后6 個月共有7 個菌屬的相對豐度顯著降低，其中伯杰氏菌屬（Bergeyella）在治療后3 個月時稍有升高，有7個菌屬的相對豐度顯著升高。治療后6 個月與治療后3 個月相比，樣本中未發現上述菌屬的相對豐度發生顯著性變化。

2.3.3 種水平的差異分析 各時間點樣本中平均相對豐度排名前25 的菌種如圖4a 所示。基線時，按照相對豐度排序前5 依次為具核梭桿菌（Fuso?bacterium nucleatum）14.81%、牙齦卟啉單胞菌8.26%、牙髓卟啉單胞菌4.23%、嗜沫聚集桿菌（Ag?gregatibactera phrophilus）3.87%和Streptococcus 071 3.71%。

治療后3 個月，按照相對豐度排序前5 依次為具核梭桿菌11.11%、副流感嗜血桿菌8.81%、Strep?tococcus 071 7.66%、黏液奈瑟菌（Neisseria mucosa）3.47%、天空羅氏菌（Rothiaaeria）3.19%。

治療后6 個月，排序前5 依次為具核梭桿菌18.75%、內氏放線菌6.22%、黏液奈瑟菌6.15%、Streptococcus 071 5.18%和淺黃奈瑟菌（Neisseria sub?flava）4.78%。

在平均相對豐度排名前25 的菌種中，牙齦卟啉單胞菌、牙髓卟啉單胞菌、齒垢密螺旋體、齦溝產線菌在治療后3 個月和6 個月時樣本中的相對豐度均顯著降低，福賽坦氏菌和中間鏈球菌（Strep?tococcus intermedius）僅在治療后3 個月時顯著降低（P<0.05）；口金氏菌（Kingella oralis）在治療后3 個月時在樣本中的相對豐度均顯著升高，牙齦二氧化碳噬纖維菌（Capnocytophaga gingivalis）在治療后6 個月時相對豐度顯著升高，Ottowia 894 在治療后3 個月時較基線水平顯著升高，但在治療后6 個月時較基線顯著降低（P<0.05）。

治療前后樣本中相對豐度發生顯著性變化（P<0.05）的菌種如圖4b、4c 所示，治療后3 個月共有23 個菌種的相對豐度顯著降低，18 個菌種的相對豐度顯著升高；治療后6 個月共有11 個菌種的相對豐度顯著降低，11 個菌種的相對豐度顯著升高。治療后6 個月時與3 個月時相比，上述菌種中Desulfovibrio fairfieldensis、Granulicatella elegans 和非典型韋榮菌（Veillonella atypica）的相對豐度顯著降低，而中間鏈球菌相對豐度顯著升高。

Figure 4 Mean relative abundance at the species level before and after treatment圖4 治療前后微生物群落菌種水平相對豐度圖

2.4 生物標志物

在治療前后各水平微生物差異分析的基礎上，通過LEfSe 分析各組樣本間差異最明顯的微生物作為生物標志物（圖5）。

治療前，樣本齦下菌群的生物標志物包括齒垢密螺旋體、Treponema 258、嗜麥芽密螺旋體（Treponema maltophilum）及其所在的屬、科、目（Spi?rochaetales）、綱和門，牙齦卟啉單胞菌、牙髓卟啉單胞菌，Peptostreptococcaceae XIG?9 brachy 及其所在的屬、Peptostreptococcaceae XIG?4 369 及其所在的屬、齦溝產線菌及其所在的屬、以上3 個菌屬所在的Peptostreptococcaceae XI 科，微小微單胞菌（Parvimo?nas micra）及其所在的屬及其與Peptostreptococcace?ae XI 科所在的梭菌目（Clostridiales）和梭菌綱（Clos?tridia），咽支原體（Mycoplasma faucium）及屬、科、目和綱，中間鏈球菌，昭和彎曲菌（Campylobacter showae），脫硫弧菌目（Desulfovibrionales）及其所在的δ?變形菌綱（Deltaproteobacteria），Bergeyella 907。

治療后3 個月時樣本中的生物標志物包括Leptotrichia hofstadii、Leptotrichia 219，副流感嗜血桿菌，反硝化金氏菌（Kingella denitrificans）、Granulica?tella elegans，Capnocytophaga 336 及其所在的科、目和綱，Ottowia 894 及其所在的屬，Commamonadace?ae 科。治療后6 個月時樣本中的生物標志物包括Neisseria 020 及其所在的科和目，金氏菌屬及其與奈瑟氏菌門共同所在的β?變形菌綱（Betaproteo bacteria）；Treponema pectinovorum 雖然為生物標志物，但在所有樣本中僅1 次檢出。

Figure 5 Microbial analysis based on LEfSe method圖5 線性判別分析效應圖

3 討 論

牙周炎是以菌斑生物膜為始動因素，宿主免疫反應等多因素共同作用導致的感染性疾病，菌群失調是其發生發展的關鍵因素。在健康人群中，齦上及齦下菌斑的量相對較低，主要由共生菌構成，其通過宿主免疫反應可以被有效調節。當菌斑不斷堆積，引起牙周組織的慢性炎癥，致病微生物的數量增加，宿主免疫反應失調，并在局部因素的刺激下，形成由致病微生物主導的微生態，促進牙周組織破壞。

Socransky 等［4］的 研 究 通 過DNA 分 子 雜 交 技術，將齦下菌斑中的32 個菌種劃分為5 個微生物復合體，其中紅色復合體包括牙齦卟啉單胞菌、齒垢密螺旋體和福賽坦氏菌與牙周炎緊密相關，橙色復合體包括梭桿菌屬、普雷沃氏菌屬（Prevotel?la）、微小微單胞菌（Parvimonas micra）、彎曲菌屬（Campylobacter）等與牙周炎緊密相關的核心群，紅色復合體和橙色復合體均被認為是經典的牙周致病菌。雖然DNA 分子雜交技術可以實現對不可培養菌種的檢測，但是需要提前設計相應的引物，無法獲得齦下菌群微生態的全貌。隨著檢測技術的發展，基于細菌16S rRNA 保守性基因片段中9 個變異區的高通量測序，以未知菌的序列與基因庫中的已知序列進行對比，根據相似性進行分類鑒別，可以對菌斑中的所有細菌進行檢測，提供了齦下菌群的全面信息［10］，本研究中微生物檢測采用的便是基于16S rRNA 的Illumina MiSeq 平臺第二代測序技術。

本研究中納入廣泛型中重度慢性牙周炎患者，在治療前即基線，所有位點的PD 均值為5.28 mm，BI 均值為2.73，牙周炎癥程度較重；PLI 均值為0.87，多數位點牙面存在菌斑附著，口腔衛生控制不佳。同時，微生物結果顯示紅色復合體和橙色復合體及其所在屬、門為菌群中的主要成分，與既往研究的結果相一致［8，11］，同時，其它牙周致病相關微生物如牙髓卟啉單胞菌、齦溝產線菌及其所在的產線菌屬、嗜沫聚集桿菌及其所在的聚集桿菌屬（Aggregatibacter）等的相對豐度均較高（位于菌屬或菌種相對豐度排名前25）［12］。

治療后3 個月，Alpha 多樣性指數分析結果顯示齦下菌群中微生物豐富度和多樣性均無明顯變化，但與治療前相比，主成分分析圖示樣本分別位于不同的象限，ANOSIM 相似性分析顯示組間差異具有統計學意義，提示在治療后3 個月時菌斑生物膜已經發生了再植，但是其群落組成卻發生了明顯的變化，目前相關研究的觀察時間多較短，但部分長達3 個月的研究中也觀察到了相似的結果［6，13］。治療后3 個月，螺旋體門相對豐度都顯著降低，而其在菌群失調過程中發揮著重要作用［14］。在屬水平和種水平，紅色復合體所在的卟啉單胞菌屬、密螺旋體屬、坦納氏菌屬，橙色復合體所在的微單胞菌屬（Parvimonas）及屬內多個致病相關菌種的相對豐度均顯著降低，如牙齦卟啉單胞菌的相對豐度從8.26%降至0.68%、齒垢密螺旋體的相對豐度從2.55%降至0.54%、福賽坦氏菌的相對豐度從1.83%降至0.48%、微小微單胞菌的相對豐度從0.66%降至0.12%，同時齦溝產線菌、Peptostreptococcaceae XIG?4 369 及其所在屬、Myco?plasma faucium 及其所在屬、Peptostreptococcaceae XIG?9 brachy、Fretibacterium 360 及其所在屬等牙周致病相關微生物也顯著降低［5，15?16］，經LEfSe 分析這些致病相關微生物為基線樣本菌群的生物標志物。治療后3 個月，二氧化碳噬纖維菌屬及其下菌種如Capnocytophaga 336 等、金氏菌屬及其下菌種如口金氏菌、反硝化金氏菌（Kingella denitrificans）、Granulicatella elegans、Leptotrichia hofstadii 等既往研究中［17］報道的牙周健康相關微生物相對豐度顯著升高。治療后3 個月，菌群微生態中牙周炎致病相關微生物的比例下降，占主要成分的為嗜血桿菌屬、奈瑟氏菌屬、鏈球菌屬等牙周健康相關微生物。值得注意的是，梭桿菌屬在治療前后相對豐度無明顯變化，這可能與其在菌斑生物膜中的作用密切相關，梭桿菌屬下的菌種具核梭桿菌（Fuso?bacterium nucleatum）作為共生菌，既可以與早期定植菌如鏈球菌屬等，也可以與晚期定植菌如牙齦卟啉單胞菌等共聚［18?19］，這也與既往研究結果相似［6，13］。與齦下菌群微生態的變化相一致，無論是在所有納入位點還是取樣位點，PD、BI 和PLI 等臨床指標均得到了顯著改善。

治療后6 個月的臨床指標，所有位點的PD 稍有回升，與3 個月時相比差異具有統計學意義，對于取樣位點也觀察到了一樣的趨勢，但是差異無統計學意義。對樣本進行ANOSIM 相似性分析的結果顯示，治療后6 個月與基線的群落組成差異無統計學意義。門水平分析也未發現與基線的顯著性差異，屬水平分析紅色復合體所在卟啉單胞菌屬和密螺旋體屬的相對豐度與3 個月時相近，但與基線比較無顯著性差異，而坦納氏菌屬（Tannerel?la）的相對豐度稍升高，同樣與基線無顯著性差異。產線菌屬、支原體（Mycoplasma）和Peptostrepto?coccaceae XIG?6 等與牙周炎相關的菌屬以及與牙周健康相關的大部分菌屬仍保持與基線水平的顯著性差異［9］。種水平分析可以觀察到6 個月時，雖然牙齦卟啉單胞菌、齒垢密螺旋體、齦溝產線菌等菌種仍較基線顯著減低，但部分牙周致病微生物相關菌種與基線的顯著性差異消失，福賽坦氏菌的相對豐度從0.48%上升至1.21%，微小微單胞菌的相對豐度從0.11%上升至0.26%。與治療后3 個月相比，Granulicatella elegans 和非典型韋榮菌等牙周健康相關微生物的相對豐度顯著降低，而中間鏈球菌顯著升高，優勢菌種中Streptococcus 071 的相對豐度為5.18%，這些菌種均為牙周致病相關微生物［17，20］，同時生物標志物中牙周健康相關微生物減少。Haffajee 等［21］的研究中提到非手術治療對臨床指標和齦下菌群微生態改善效果最顯著的時間為治療后3 個月，之后可能會因致病微生物的再次定植引起牙周炎癥的復發。需要說明的是，本研究中研究對象為廣泛型中重度慢性牙周炎患者，其牙周炎癥程度較重，單純機械治療具有局限性，尤其是對于深牙周袋內或解剖因素復雜的位點，可能無法完全清除菌斑牙石等致病因素，同時部分牙周致病菌可以進入牙周組織內，這些均可能導致治療后的致病微生物的再植［22?23］，在本研究中也可以看到治療后3 個月和6 個月Saccharibacteria TM7 的相對豐度較高，SaccharibacteriaTM7 G?5 及其下Saccharibacteria TM7 G?5 356 在治療后3 個月顯著升高，而其根據既往研究與牙周炎癥密切相關［15?16］。本研究在治療后6 個月時僅有6 個樣本產生的序列符合測序要求，雖然其檢驗效能可能受到影響，需要增加樣本量進一步證實，但上述結論仍提示僅單純機械治療對于慢性牙周炎臨床指標和齦下菌群微生態維持長期穩定可能存在局限性，而藥物治療及手術治療對于齦下菌群微生態的改善是否具有更加顯著的效果需要未來研究驗證。