保健酒急性毒性和亞急性毒性實驗研究

郭 艷，王 睿，蔣中仁

（四川省疾病預防控制中心，四川成都 610041）

保健酒在我國有深厚的文化傳統和群眾基礎，由中藥材泡制的保健酒尤其受到消費者歡迎。某牌保健酒以傳統中藥材黃芪、大棗、枸杞子、茯苓、制何首烏、三七、熟地黃、黃精為主要原料，經浸漬、滲漉后與白酒（60 %vol）配制，再經陳化、冷藏、過濾等工藝制成。黃芪、制何首烏、三七、熟地黃屬于可用于保健食品的物品名單，大棗、枸杞子、茯苓、黃精屬于“既是食品又是藥品的物品名單”?，F代藥理學研究結果表明，某品牌保健酒配方中原料含有豐富的有效成分，具有多種生物活性（見表1）[1-15]。黃芪、大棗、枸杞子、茯苓、三七、黃精等具有補中益氣之效；制何首烏也是補益藥材，同時也含有具有體外肝細胞毒性的沒食子酸和大黃素[16]。對此保健酒進行急性毒性和亞急性毒性研究，為科學評價其食用安全性提供了試驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

受試物：某公司研發生產的某品牌保健酒，其功效成分粗多糖含量15 mg/100 g，總皂苷含量10 mg/100 g，人體推薦量為100 mL/60 kg·BW，試驗樣品為其23倍濃縮液，酒精度0%vol。用60%vol基酒和蒸餾水配制受試物溶液，冷藏保存。

表1 某品牌保健酒原料的主要有效成分和生物活性

動物：由四川省中醫藥科學院實驗動物中心提供的SPF 級KM 小鼠、SD 大鼠，生產許可證號SCXK（川）2013-19；由四川省醫學科學院四川省人民醫院實驗動物研究所提供的飼料，生產許可證號SCXK（川）2015-01；四川省疾病預防控制中心屏障級實驗動物房，溫度20～25 ℃，相對濕度40%～70%，使用許可證號SYXK（川）2016-043。

儀器設備：奧林巴斯AU-400 全自動生化分析儀、XT-2000i 型全自動血細胞分析儀、OLYMPUSBH-2 型顯微鏡、超凈工作臺、METTLER 電子天平、解剖器械。

1.2 試驗方法[17]

1.2.1 大鼠、小鼠急性經口毒性試驗

采用最大耐受劑量法，大鼠、小鼠分別隨機分成2 組，共4 組，每組同系同性10 只動物。設15000 mg/kg·BW 1 個劑量組，1 次經口灌胃，觀察1周內動物中毒表現和死亡情況，試驗結束后稱體重，處死動物作大體解剖。

1.2.1 30 d喂養試驗

設3個劑量組1.81 mL/kg·BW、3.62 mL/kg·BW、7.25 mL/kg·BW（分別相當于人體推薦攝入量的25倍、50 倍、100 倍）、蒸餾水對照組、15 %vol 基酒對照組，采用灌胃法，首次染毒后觀察30 d。

1.3 統計分析

使用SPSS 17.0 for Windows 軟件統計處理數據，30 d喂養試驗數據使用方差分析。

2 結果與分析

2.1 大鼠、小鼠急性經口毒性試驗

給予受試物后，大鼠、小鼠未見異常，觀察期內未見死亡（見表2），試驗結束時處死動物，大體解剖肉眼未見異常。實驗保健酒對大、小鼠急性經口MTD 值均大于15000 mg/kg·BW，按急性毒性分級屬無毒級。

2.2 30 d喂養試驗

試驗期間動物健康狀況良好，體重持續增長，每組大鼠每天經口喂飼不同劑量的受試物后均未出現中毒表現，未見動物死亡。

2.2.1 保健酒對大鼠體重的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的初始體重、1～4 周體重、第30 天體重與陰性對照組比較均無統計學意義（P＞0.05）；3 個劑量組雌、雄大鼠的初始體重、1～4 周體重、第30 天體重與15 %vol 基酒對照組比較均無統計學意義（P＞0.05）（見表3）。

2.2.2 保健酒對大鼠每周進食量的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的每周進食量與陰性對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05）；3 個劑量組雌、雄大鼠的每周進食量與15%vol 基酒對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05）（見表4）。

2.2.3 保健酒對大鼠食物利用率的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的每周食物利用率及總食物利用率與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）；3 個劑量組雌、雄大鼠的每周食物利用率以及總食物利用率與15%vol 基酒對照組比較，各項指標均無顯著性差異（P＞0.05）（見表5）。

2.2.4 保健酒對大鼠血液學的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的血液學常規檢測結果與陰性對照組比較，除雌鼠的白細胞計數升高顯著性差異外（P＜0.05），其余各項指標均無顯著性差異（P＞0.05）；3 個劑量組雌、雄大鼠的血液學常規檢測結果與15%vol 基酒對照組比較，各項指標均無顯著性差異（P＞0.05）。以上所測值均在本室正常值范圍內（見表6）。

2.2.5 保健酒對大鼠末期血生化的影響

15%vol 基酒對照組雌、雄大鼠的末期血生化指標檢測結果與陰性對照組比較，除雌鼠的尿素氮和甘油三酯升高有顯著性差異外（P＜0.05，P＜0.01），其他指標無顯著性差異（P＞0.05）；3 個劑量組雌、雄大鼠的末期血生化指標檢測結果與15%vol基酒對照組比較，各項指標均無顯著性差異（P＞0.05）。以上所測值均在本室正常值范圍內（見表7）。

表2 某品牌保健酒對大鼠、小鼠急性經口毒性試驗結果(）

表2 某品牌保健酒對大鼠、小鼠急性經口毒性試驗結果(）

表3 某品牌保健酒對大鼠體重的影響()

表3 某品牌保健酒對大鼠體重的影響()

表4 某品牌保健酒對大鼠每周進食量的影響()

表5 某品牌保健酒對大鼠食物利用率的影響()

表5 某品牌保健酒對大鼠食物利用率的影響()

表6 某品牌保健酒對大鼠血液學指標的影響()

表6 某品牌保健酒對大鼠血液學指標的影響()

注：△表示與陰性對照組比較P＜0.05。

表7 某品牌保健酒對大鼠末期生化檢驗結果()

表7 某品牌保健酒對大鼠末期生化檢驗結果()

注：與陰性對照組比較△P＜0.05，△△P＜0.01。

表8 某牌保健酒對大鼠臟體比的影響()

表8 某牌保健酒對大鼠臟體比的影響()

2.2.6 保健酒對大鼠臟體比的影響

15 %vol 基酒對照組雌、雄大鼠的臟體比值與陰性對照組比較均無顯著性差異（P＞0.05）。3 個劑量組雌、雄大鼠的臟體比值與15%vol 基酒對照組比較，經統計學處理，各項指標均無顯著性差異（P＞0.05）（見表8）。

2.2.7 病理學檢查

試驗結束后處死動物，進行大體解剖，肉眼未見異常改變。組織病理學檢查結果顯示：蒸餾水對照組有1 例動物腎組織局灶性腎小管輕度擴張；15%vol 基酒對照組有1 例動物肝組織匯管區局灶性輕度炎細胞浸潤；受試物高劑量組有腎組織局灶性腎小管輕度擴張；其余受檢組織形態結構正常。以上所發現均為動物自發病變，未見受試物高劑量組引起動物中毒性損傷改變。

3 討論

實驗結果顯示，某品牌保健酒對大、小鼠急性經口毒性試驗結果MTD 值均＞15000 mg/kg·BW。30 d 喂養試驗，可見動物生長發育及活動正常，未見動物出現中毒癥狀及死亡。15%vol 基酒對照組的動物體重、每周進食量、每周食物利用率及總食物利用率、臟體比值、血液學常規檢測及末期血生化指標檢驗結果與蒸餾水對照組比較，雌鼠的白細胞計數、尿素氮和甘油三酯均升高有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.05，P＜0.01），其他各項指標無顯著性差異（P＞0.05）。3 個劑量組雌、雄大鼠的每周體重、每周進食量、每周食物利用率、總食物利用率、臟體比值、血液學指標及末期血生化指標檢測結果與15%vol 基酒對照組比較，各項指標均無顯著性差異（P＞0.05）。以上所測值均在本室正常值范圍內。組織病理學檢查結果，除動物自發病變外，未見受試物高劑量組引起動物中毒性損傷改變。由此可見，在本試驗條件下，某品牌保健酒按急性毒性分級屬無毒級，且無亞急性攝入危害?？稍诖嘶A上針對長期飲用某品牌保健酒的安全性進行進一步研究，并開展功能學試驗，將其開發成保健食品，以滿足消費者需求。