Lowrry法測定蛋白濃度的最佳波長選擇

張鳳國,張永勤,邢明霞,許文廷,呂興霜,王裕曉,王鵬博

(青島科技大學 化工學院，山東青島266042)

Lowrry法[1]作為一種蛋白濃度的測定方法，廣泛應用于食品、醫藥、醫療診斷、酶制劑、生物化工等行業的蛋白濃度測定。相較于BCA法[2-3]、考馬斯亮藍(Bardford)G250法[4-5]、熒光光譜法[6]、紫外法[7]等蛋白濃度測定方法，Lowrry法的靈敏度最高[8]，因而測定不易受雜質干擾而廣為采納。迄今為止，有多項國家標準[9-10]將該方法應用于蛋白酶活力測定中的蛋白濃度測定;Sigma公司也出售相關試劑并提供相應的蛋白濃度測定方法[11]。

該法的測定原理是基于蛋白質分子中所存在的酪氨酸和色氨酸，它們與堿性硫酸銅作用形成銅-肽鍵絡合物，后者與酪氨酸共同作用使酚試劑中的磷鉬酸和磷鎢酸還原生成鉬藍和鎢藍，其顏色與酪氨酸含量成正比。

然而，目前文獻所報道測定條件有多種，主要集中在兩方面。其一，所用的Folin A試劑不同，有的使用Folin A(以下簡稱為Folin A法)[12]，而有的是Na2CO3(以下簡稱Na2CO3法)[9-11];其二，文獻報道的檢測波長有多種[13-25]。但有關測定波長方面的研究至今未見相關報道。NOLASCO-SORIA等[26]較全面地綜述了蛋白酶活力測定方法中的Lowrry法，但并未評述其最適檢測波長，也未比較Folin A試劑及其替代試劑Na2CO3間是否有差異，這為選擇適宜的測定條件帶來了混亂。因此，本工作擬對此進行必要的研究，以便正確地確定Lowrry法測定蛋白濃度的條件。

1 實驗部分

1．1 材料與儀器

酪氨酸、酪蛋白，上海阿拉丁生化科技股份有限公司;牛血清白蛋白，美國Sigma公司;磷酸、鉬酸鈉、鎢酸鈉、溴水、硫酸鋰、碳酸鈉、硫酸銅、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉、磷酸鈉、磷酸二氫鈉，國藥集團化學試劑有限公司?！?br>