血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及基質(zhì)金屬蛋白酶在喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷及預(yù)后判斷中的意義分析

王曉輝，沙樹奎，閆嘉俊，姚明月

作者單位：南陽(yáng)市中醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，河南 南陽(yáng)473003

喉鱗狀細(xì)胞癌是喉癌來(lái)的主要病理類型，也是耳鼻喉科常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在頭頸部上皮來(lái)源的原發(fā)性惡性腫瘤中排名第二。喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷時(shí)通常處于中晚期，病人預(yù)后較差。探索喉鱗狀細(xì)胞癌臨床分期及預(yù)后的潛在標(biāo)志物對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌病人的早期診斷并及時(shí)采取措施、改善病人預(yù)后具有積極的意義。基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑是細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)的關(guān)鍵酶，也是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡的重要參與者，其可作為臨床惡性腫瘤診斷的標(biāo)志物。本研究分析VEGF 及MMPs 在喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷及預(yù)后判斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以河南省南陽(yáng)市中醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科2010年12月至2015年12月收治的喉鱗狀細(xì)胞癌病人180例為研究對(duì)象（觀察組）。其中男99 例，女81 例，年齡范圍62～77 歲，年齡（66.7±8.4）歲，其中Ⅰ期34 例，Ⅱ期48 例，Ⅲ期56 例，Ⅳ期42例。以河南省南陽(yáng)市中醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科同期健康體檢者160例為對(duì)照組，男85例，女75例，年齡范圍62～76歲，年齡（66.5±8.3）歲。兩組研究對(duì)象在性別比例、年齡分布等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=0.120，

P

=0.730；

t

=0.221，

P

=0.826）。

1.2 觀察指標(biāo)

分析各組研究對(duì)象血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1（VEGFR1）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2（VEGFR2）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3（VEGFR3）、基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）和金屬蛋白酶組織抑制因子1（TIMP1）及金屬蛋白酶組織抑制因子2（TIMP2）水平的變化，并分析不同VEGF、MMP2和MMP9表達(dá)強(qiáng)度病人預(yù)后情況。

1.3 試劑與檢測(cè)方法

抽取各組研究對(duì)象清晨空腹靜脈血6 mL，3 000 rpm離心10 min后分離上層血清，-20 ℃保存，待用。VEGF、VEGFR1蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)自碧云天生物科技有限公司；VEGFR2、VEGFR3檢測(cè)試劑盒購(gòu)自R&D公司；MMP2和MMP9蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)自IBL 公司；TIMP1 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自CST 公司；TIMP2蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Santa Cruz公司。所有檢測(cè)的操作過(guò)程均按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人VEGF 表達(dá)分析

研究發(fā)現(xiàn)，不同臨床分期觀察組VEGF 的表達(dá)水平均高于對(duì)照組（

P

＜0.05）；不同臨床分期觀察組VEGF 及其受體表達(dá)存在明顯的差異性，隨著病人臨床分期的升高，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)逐步增強(qiáng)（

P

＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 喉鱗狀細(xì)胞癌180例與健康體檢者160例VEGF表達(dá)分析/±s

2.2 不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人MMP2 和MMP9 蛋白表達(dá)分析

研究發(fā)現(xiàn)，不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人MMP2 和MMP9 蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組（

P

＜0.05）；不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人MMP2 和MMP9 表達(dá)存在明顯的差異性：隨著病人臨床分期的升高，MMP2 和MMP9 的表達(dá)逐步增強(qiáng)（

P

＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 喉鱗狀細(xì)胞癌180例與健康體檢者160例MMP2和MMP9蛋白表達(dá)分析/±s

2.3 不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人TIMP1 和TIMP2蛋白表達(dá)分析

研究發(fā)現(xiàn)，不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人TIMP1和TIMP2蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組（

P

＜0.05）；不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人TIMP1 和TIMP2 表達(dá)存在明顯的差異性：隨著病人臨床分期的升高，TIMP1 和TIMP2 的表達(dá)逐步增強(qiáng)（

P

＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 喉鱗狀細(xì)胞癌180例與健康體檢者160例TIMP1和TIMP2蛋白表達(dá)分析/±s

2.4 VEGF 表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析

研究發(fā)現(xiàn)VEGF 表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，隨著血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子蛋白表達(dá)的增強(qiáng)，病人的預(yù)后逐漸變差，見(jiàn)圖1。

圖1 VEGF表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析。

2.5 MMP2 蛋白表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析

研究發(fā)現(xiàn)MMP2表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，隨著MMP2 表達(dá)的增強(qiáng)，病人的預(yù)后逐漸變差，見(jiàn)圖2。

圖2 MMP2蛋白表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析。

2.6 MMP9 蛋白表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析

研究發(fā)現(xiàn)MMP9表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，隨著MMP9 表達(dá)的增強(qiáng)，病人的預(yù)后逐漸變差，見(jiàn)圖3。

圖3 MMP9蛋白表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后的相關(guān)性分析。

3 討論

隨著現(xiàn)代診療技術(shù)的進(jìn)步和生活環(huán)境的惡化，喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率和死亡率有逐年升高的趨勢(shì)。喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷時(shí)通常處于中晚期，預(yù)后較差。因此，探索其發(fā)病、臨床分期及預(yù)后的標(biāo)志物，對(duì)早期臨床診斷和改善病人預(yù)后具有十分重要的意義。本研究在分析VEGF 及MMPs 在喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷及預(yù)后判斷中的價(jià)值時(shí)發(fā)現(xiàn)不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人VEGF、MMP2、MMP9 和TIMP1 及TIMP2 蛋白表達(dá)存在明顯的差異性：隨著喉鱗狀細(xì)胞癌臨床分期的增加，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員的表達(dá)逐步增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且VEGF、MMP2和MMP9 表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有相關(guān)性，隨著血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員表達(dá)的增強(qiáng)，病人的預(yù)后逐漸變差。因此，VEGF 及MMPs 表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床分期密切相關(guān)，且可作為病人預(yù)后的標(biāo)志物。

基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑參與了多種惡性腫瘤的發(fā)展、發(fā)展及惡化過(guò)程，且與病人的預(yù)后有一定的相關(guān)性。在研究垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1、基質(zhì)金屬蛋白酶-2及基質(zhì)金屬蛋白酶-9在胃癌組織中表達(dá)意義的研究中發(fā)現(xiàn)其可作為胃癌臨床診斷的重要標(biāo)志物。在分析脂聯(lián)素在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與基質(zhì)金屬蛋白酶-9 和腫瘤血管生成關(guān)系的研究中也證實(shí)MMP9的過(guò)表達(dá)與腫瘤血管生成呈明顯的正相關(guān)性。以往的研究還發(fā)現(xiàn)胃癌組織高遷移率族蛋白A2 與基質(zhì)金屬蛋白酶-9 表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9及其抑制劑MMI-166是腫瘤發(fā)展、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的重要參與分子和標(biāo)志物。馬艷艷等也發(fā)現(xiàn)兔肝VX2腫瘤射頻消融術(shù)后殘癌與基質(zhì)金屬蛋白酶9的表達(dá)密切相關(guān)。本研究也發(fā)現(xiàn)不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人MMP2、MMP9蛋白表達(dá)存在明顯的差異性：隨著病人臨床分期的升高，基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員蛋白表達(dá)逐步增強(qiáng)，且存在顯著的差異性；且MMP2 和MMP9 表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，提示基質(zhì)金屬蛋白酶也是喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷與預(yù)后的重要標(biāo)志物。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體也是腫瘤多種病理及生理過(guò)程的重要參與者和調(diào)節(jié)者，也與腫瘤的發(fā)生及惡化過(guò)程相關(guān)。在分析腎母細(xì)胞瘤腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的生理及病理過(guò)程與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)明顯相關(guān)。在研究上皮性卵巢惡性腫瘤組織中環(huán)氧合酶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子CD34 蛋白和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)與上皮卵巢惡性腫瘤的臨床分期密切相關(guān)，且此過(guò)程與堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子有關(guān)。以往的研究也發(fā)現(xiàn)葡萄膜惡性黑色素瘤中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平與腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程相關(guān)，且?jiàn)W沙利鉑聯(lián)合多西他賽對(duì)卵巢癌病人的治療作用與其調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的異常表達(dá)有關(guān)。以往的研究還證實(shí)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在膀胱癌中的表達(dá)是腫瘤轉(zhuǎn)移及惡化的關(guān)鍵過(guò)程。本研究也發(fā)現(xiàn)不同臨床分期喉鱗狀細(xì)胞癌病人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)存在明顯的差異性：隨著病人臨床分期的升高，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體的表達(dá)逐步增強(qiáng)；且血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)水平與喉鱗狀細(xì)胞癌病人預(yù)后有明顯的相關(guān)性，提示基質(zhì)金屬蛋白酶也是喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床診斷與預(yù)后的重要標(biāo)志物。

因此，VEGF及MMPs表達(dá)與喉鱗狀細(xì)胞癌病人臨床分期密切相關(guān)，且可作為病人預(yù)后的標(biāo)志物。