桑黃抗肝纖維化及其作用機(jī)理的探究

王松偉

延邊靈樺工坊生物科技有限公司,吉林 延邊 133608

對(duì)于肝纖維化來(lái)說(shuō)，其是因?yàn)楦螕p傷后而出現(xiàn)的一種病理修復(fù)反應(yīng)。經(jīng)過(guò)相關(guān)的臨床實(shí)踐研究結(jié)果與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均已證明，肝纖維化屬于慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)途徑。而肝纖維化自身具有一定的可逆性，通過(guò)采取有效的預(yù)防措施，可以進(jìn)一步降低炎癥反應(yīng)的程度，并抑制肝臟內(nèi)過(guò)度表達(dá)的膠原合成能力，而且也可以通過(guò)提高膠原酶的活性，使已經(jīng)沉積的膠原可以得到消除。所以說(shuō)，抗肝纖維化，對(duì)肝硬化疾病的預(yù)防與慢性肝病的治療具有非常重要的意義，而在臨床中尋找療效更為確切的藥物，也已經(jīng)成為目前臨床研究的重點(diǎn)內(nèi)容之一，為此，本文主要根據(jù)多孔菌科植物桑黃的藥理特點(diǎn)，開(kāi)展抗實(shí)驗(yàn)性肝纖維化相關(guān)研究，重點(diǎn)探究桑黃抗肝纖維化的作用機(jī)理，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠，性別：雌性；體重：160～200g；

1.1.2實(shí)驗(yàn)試藥

桑黃、四氧化碳、橄欖油、層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸(HA)、III型前膠原(pclll)、IV型膠原(IV-C)放射免疫分析測(cè)定盒。

1.1.3實(shí)驗(yàn)儀器

SN-682型放射免疫計(jì)數(shù)器、7150型自動(dòng)生化分析儀、WH-3微型漩渦混合儀、BH-2型管血顯微鏡和LXJ-II型離心沉淀機(jī)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1桑黃對(duì)大鼠肝纖維化發(fā)生的預(yù)防作用實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1.1配置供試藥液

取適當(dāng)量的桑花，并加入適當(dāng)劑量水，使用小火進(jìn)行煎煮，完成煎煮后，收集煎煮液，將剩余藥渣使用70%乙醇進(jìn)行浸泡，將乙醇提取液和水煎煮液進(jìn)行混合，回收后將乙醇剔除，獲取干燥、濃縮的固體提取物，將其研磨成為細(xì)粉，過(guò)80目篩。在使用前，應(yīng)該利用蒸餾水，配制成為一定濃度的混懸液，留以備用。

1.2.1.2制作大鼠肝纖維化模型

使用40%CCl4/橄欖油為大鼠進(jìn)行皮下注射，首次注射劑量為：0.5ml/100g體重，而后每周完成2次注射，每次注射劑量為：0.3ml/100g體重，持續(xù)為大鼠注射6周。在開(kāi)始造模的第2周，給予大鼠食用低蛋白、高脂肪的復(fù)合飼料，具體為：0.5%的膽固醇、20%豬油和79.5%玉米粉，大鼠使用兩周后，為其飼喂普通飼料。在造模過(guò)程中，應(yīng)該將乙醇作為大鼠的唯一飲用品。

1.2.1.3分組和處理

將大鼠隨機(jī)分為三組，分別為對(duì)照組、模型對(duì)照組和桑黃預(yù)防組，每組各有8只大鼠，為正常對(duì)照組內(nèi)大鼠飼喂普通飲食，具體為：第1天使用蒸餾水灌胃，劑量：1ml/100g體重，每天1次；對(duì)模型對(duì)照組大鼠按模型復(fù)制方法進(jìn)行處理，同時(shí)使用蒸餾水灌胃，劑量：1ml/100g體重，每天1次；為桑黃預(yù)防組胺模型復(fù)制方法處理，使用桑黃提取液(1ml含有0.5g生藥材)進(jìn)行灌胃，劑量：1ml/100g體重，每天1次，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為6周[1]。

1.2.2桑黃對(duì)大鼠肝纖維化的治療作用實(shí)驗(yàn)方法

1.2.2.1制作大鼠肝纖維化模型

使用40%CCl4/橄欖油為大鼠進(jìn)行皮下注射，首次注射劑量為：0.5ml/100g體重，而后每周完成2次注射，每次注射劑量為：0.3ml/100g體重，持續(xù)為大鼠注射6周。在開(kāi)始造模的第2周，給予大鼠食用低蛋白、高脂肪的復(fù)合飼料，具體為：0.5%的膽固醇、20%豬油和79.5%玉米粉，大鼠使用兩周后，為其飼喂普通飼料。在造模過(guò)程中，應(yīng)該將乙醇作為大鼠的唯一飲用品。從第7周開(kāi)始，給予大鼠飼喂普通飲食，并為其維持病因刺激，每周為大鼠注射一次40%CCl4/橄欖油，劑量：0.3ml/100g體重，持續(xù)注射4周。

1.2.2.2分組和處理

將大鼠隨機(jī)分為三組，分別為對(duì)照組、模型對(duì)照組和桑黃預(yù)防組，每組各有8只大鼠，為正常組內(nèi)大鼠經(jīng)皮下注射生理鹽水，并給予其飼喂普通飲食，其他兩組均復(fù)制肝纖維化模型，在治療的第7周開(kāi)始，對(duì)正常對(duì)照組和模型對(duì)照組內(nèi)大鼠進(jìn)行灌胃蒸餾水，劑量：1ml/100g體重，每天1次；桑黃預(yù)防組則為大鼠灌胃1ml含0.5g的桑黃提取液，劑量為1ml/100g體重，每天1次，治療時(shí)間為4周，全部實(shí)驗(yàn)過(guò)程為10周[2]。

1.3觀察指標(biāo)

使用乙醚對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉后，將其眼球摘除，并取血液，離心分離血清。取適當(dāng)量血清，而后使用自動(dòng)生化分析對(duì)總蛋白、總膽紅素、球蛋白、白蛋白、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、A/G比值等級(jí)進(jìn)行檢測(cè)，另取部分血清，使用放射免疫試劑盒方法對(duì)血清膠原成分HA、PClll、IV-C和LN進(jìn)行檢測(cè).

2 結(jié) 果

2.1桑黃對(duì)大鼠肝纖維化發(fā)生的預(yù)防作用

2.1.1大鼠血清酶學(xué)檢查結(jié)果

模型對(duì)照組血清膽紅素、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平明顯高于正常組，血清白蛋白和A/G比值則明顯低于正常組，這也就說(shuō)明模型組內(nèi)大鼠的肝功能受到明顯損傷。桑黃預(yù)防組內(nèi)大鼠的血清膽紅素和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平接近正常組，同時(shí)也提高了血清白蛋白水平，具有糾正A/G的作用，比較有顯著差異(P<0.05)。

2.1.2血清膠原成分檢測(cè)結(jié)果

模型對(duì)照組內(nèi)大鼠血清膠原成分層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸(HA)、III型前膠原(pclll)、IV型膠原(IV-C)含量明顯高于正常組，這也就說(shuō)明模型對(duì)照組內(nèi)大鼠表現(xiàn)出明顯的肝纖維化特征，而桑黃預(yù)防組內(nèi)大鼠的層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸(HA)、III型前膠原(pclll)、IV型膠原(IV-C)含量明顯降低，幾乎接近正常組，比較有顯著差異(P<0.05)

2.2桑黃對(duì)大鼠肝纖維化的治療作用

2.2.1大鼠血清酶學(xué)檢查結(jié)果

模型對(duì)照組內(nèi)大鼠肝功能損傷明顯，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、球蛋白水平明顯高于對(duì)照正常組，A/G比值則低于對(duì)照正常組，桑黃治療組內(nèi)大鼠的總膽紅素、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等水平明顯降低，比較有顯著差異(P<0.05)。

2.2.2血清膠原成分檢測(cè)結(jié)果

模型對(duì)照組內(nèi)大鼠血清膠原成分分層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸(HA)、III型前膠原(pclll)、IV型膠原(IV-C)含量顯著高于對(duì)照正常組，桑黃治療組內(nèi)大鼠分層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸(HA)、III型前膠原(pclll)、IV型膠原(IV-C)含量含量則接近正常組，三組比較有顯著差異(P<0.05)。

3 討 論

經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，桑黃對(duì)肝纖維化具有非常明顯的預(yù)防效果和治療效果，這也為今后的臨床應(yīng)用提供了必要的數(shù)據(jù)支持。對(duì)于人體而言，肝臟屬于人體全身組織含鎂量最為豐富的器官，而且不同的酶在肝小葉不同區(qū)域和肝細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)中的濃度也有所差異，其代謝率和分子量也有明顯的不同，所以在肝臟不同病理狀況下，代謝率和分子量的升降幅度也有明顯的差異。因?yàn)楦卫w維化的形成機(jī)制非常復(fù)雜，而中藥中含有多種活性成分，在此基礎(chǔ)上，就可以將桑黃具有的抗纖維化作用與優(yōu)勢(shì)充分的凸顯出來(lái)。