錯配修復（ＭＭＲ）蛋白（ＭＬＨ１、ＰＭＳ２、ＭＳＨ２和ＭＳＨ６）表達與子宮內膜癌臨床病理特征和預后相關性分析

黃金長 肖英 黃雪梅

[摘要] 目的 分析錯配修復（MMR）蛋白表達與子宮內膜癌臨床病理特征和預后相關性。 方法 選取我院2018年2月至2020年5月收治的70例子宮內膜癌（UCEC）患者，采用免疫組化法對4種蛋白（MLH1、PMS2、MSH2和MSH6）表達情況進行檢測，并將4種MMR蛋白中1種及以上表達缺失判定為錯配修復基因缺陷（dMMR），全部陽性則判定為錯配修復基因完整（pMMR）。檢測UCEC患者MMR蛋白缺失情況并對其與病理特征的關系進行分析。 結果 4種MMR蛋白表達均定位于腫瘤細胞核，可作為內對照;dMMR組與pMMR組年齡、病理組織學類型、臨床分期及淋巴結轉移等比較，差異有統計學意義（P<0.05），表現為dMMR組發病年齡低、腫瘤分期低、淋巴結轉移少見。 結論 dMMR子宮內膜癌比例較低，且MLH1和PM52蛋白表達缺失與MSH2和MSH6相比較為多見。MLH1和PMS2、MSH2和MSH6常協同表達或缺失。MMR蛋白與UCEC臨床病理特征關系密切。MMR蛋白對預測UCEC的惡性程度、臨床預后及UCEC發病機制方面有指導意義。

[關鍵詞] 子宮內膜癌;錯配修復;免疫組化;病理特征

[Abstract] Objective To analyze the correlation between expressions of mismatch repair（MMR） proteins and clinicopathological features and prognosis of endometrial carcinoma. Methods A total of 70 patients with uterine corpus endometrial carcinoma（UCEC） admitted to our hospital from February 2018 to May 2020 were selected， and the expression of four types of MMR proteins was detected by immunohistochemistry. The loss of expression of one or more of the four types of MMR proteins（MLH1， PMS2， MSH2 and MSH6） was judged as different mismatch repair（dMMR） gene defect， and all positive MMR proteins were judged as a complete mismatch repair gene（pMMR）. The MMR protein deletion in patients with UCEC was detected and its relationship with pathological features was analyzed. Results The expression of four MMR proteins were located in tumor nuclei and could be used as internal control.There were statistically significant differences between the dMMR group and the pMMR group in onset age， histological type， clinical stage and lymph node metastasis， etc，the difference was statistically significant（P<0.05）. In the dMMR group，the age of onset was low， the stage of tumor was low， and lymph node metastasis was rare. Conclusion The rate of endometrial carcinoma in dMMR is low， and the loss of MLH1 and PM52 protein expression is more common than MSH2 and MSH6.The MLH1 and PMS2， MSH2 and MSH6 are often co-expressed or absent. MMR protein is closely related to the clinicopathological features of UCEC. MMR protein has guiding significance in aspects of predicting the malignant degree， clinical prognosis and pathogenesis of UCEC.

[Key words] Endometrial carcinoma; Mismatch repair; Immunohistochemistry; Pathological features

子官內膜樣腺癌中的錯配修復（Mismatch repair，MMR）蛋白缺陷患者具有一些顯著不同于傳統Ⅰ型與Ⅱ型癌的特征，腫瘤具有顯著的宿主炎癥反應，主要表現為腫瘤周圍淋巴細胞及腫瘤浸潤淋巴細胞炎癥，伴微囊性、伸長及碎片狀（Microcystic，elongated and fragmented，MELF）浸潤方式。子宮內膜樣腺癌通常伴有纖維黏液樣間質或富含炎性細胞間質：特殊的病理形態常具有隱弊性。兩者在病理形態上有一定的相似性，且伴MELF浸潤的子宮內膜樣腺癌與錯配修復蛋白表達缺失均與FIGO分期、子宮深肌層浸潤、淋巴結轉移率高及淋巴管血管侵犯相關[1-2]。本研究采用免疫組化法對（Uterine corpus endometrial carcinoma，UCEC）患者標本進行MMR蛋白MLH1、MSH2、MSH6及PMS2檢測，并對其與臨床特征的關系進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2018年2月至2020年5月收治的70例子宮內膜癌（Uterine corpus endometrial carcinoma，UCEC）患者，年齡53～76歲，平均（64.59±3.28）歲。所有患者均行病理學活檢切片檢查，并經兩位資深病理醫師進行診斷。其中錯配修復基因缺陷（Deficent mismatch repair，dMMR）患者24例，錯配修復基因完整（Proficient mismatch repair，pMMR）患者46例。納入標準：符合子宮內膜癌診斷標準。排除標準：失訪患者;不愿配合患者。

本研究在赫爾辛基宣言下，其研究內容、研究方法、研究意義均通過我院醫學倫理委員會進行審批，并最終同意本次研究進行。同時，所有患者與患者家屬對本次研究詳細過程與研究意義均已知曉，并在患者及家屬同意下，自愿簽署知情同意書。

1.2 方法

所有標本均采用4%中性甲醇液進行固定，并采用石蠟進行包埋、HE染色。免疫組化采用Max Vision二步法，石蠟切片脫蠟、水化后PBS沖洗，過氧化物酶阻斷劑封閉內源性過氧化酶活性，加入一抗，室溫孵育，加入生物素標記的二抗，加入鏈霉素抗生物素的過氧化酶溶液，孵育后滴加DAB顯色，蘇木素復染，常規脫水、透明、封片。MLH1、MSH2、MSH6及PMS2均購于福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3 觀察指標

MLH1、MSH2、MSH6及PMS2均定位于細胞核。在對照組織（即腫瘤周圍的正常上皮細胞、腫瘤內浸潤的淋巴細胞、間質細胞均出現細胞核著色）中～強陽性前提下可作為內對照。將4種MMR蛋白中的1種及以上表達缺失判定為dMMR組，全部陽性判定為pMMR組。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件處理數據，各組間MMR蛋白表達與UCEC臨床病理特征參數關系采用Pearson χ2檢驗。MLH1和PMS2缺失表達與MSH2和MSH6缺失表達采用Spearman等級相關性分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MMR蛋白表達情況

4種MMR蛋白表達均定位于腫瘤細胞核，可作為內對照。見表1。子宮內膜樣腺癌MLH1、MSH6、PMS2蛋白缺失免疫組的圖片見封三圖5～7。

2.2 MMR蛋白表達與UCEC臨床病理特征的關系

dMMR組與pMMR組病理年齡、病理組織學類型、臨床分期及淋巴結轉移等比較，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

MMR蛋白缺陷患者具有一些顯著不同于傳統Ⅰ型與Ⅱ型癌的特征，腫瘤具有顯著的宿主炎癥反應，主要表現為腫瘤周圍淋巴細胞及腫瘤浸潤潮巴細胞炎癥。伴微囊性、MELF浸潤方式子宮內膜樣腺癌通常伴有纖維黏液樣間質或富含炎性細胞間質，特殊的病理形態常具有隱弊性。兩者在病理形態上有一定的相似性，且伴MELF浸潤的子宮內膜樣腺癌與錯配修復蛋白表達缺失均與FIGO分期、子宮深肌層浸潤、淋巴結轉移率高及淋巴管血管侵犯相關。

UCEC是臨床中較為常見的惡性腫瘤，對患者健康造成嚴重威脅。通常情況下，UCEC患者到癌癥晚期大多都不會出現明顯臨床癥狀，極易導致患者預后不良。雖然在早期可通過手術或放化療對患者進行治療，但UCEC患者只有少數可在早期得到確診[3-4]。

MMR系統在臨床中首先從大腸桿菌中被發現，其主要依靠MutH、MutL、MUtS等基因編碼酶分子，對堿基發生的錯配進行矯正。人體MMR系統也可用于對DNA期間發生的堿基錯配進行修復，從而有效的對基因組的穩定進行維持。本研究顯示，MMR基因發生突變或蛋白缺失的情況發生時，會導致基因突變的發生率增加，從而促使腫瘤的發生[5-6]。

邱春華等[7]的研究顯示，當MMR蛋白進行基因錯配修復時，會產生不同的作用，包括識別、結合、水解錯配的堿基對等，且彼此結合并產生相互之間的影響。而MSH2蛋白則可與MSH6或者是MSH3蛋白相互結合，從而化為二聚體。而MSH2-MSH6異二聚體可識別、結合單個錯配堿基對或重復單核苷酸繼而在錯配部位形成相互作用，形成滑動夾，這一過程需要消耗一定的能量。隨后核酸內切酶活性的異二聚體則與MutS-DNA等酶與抗原共同作用行錯配堿基修復，合成新的DNA鏈。因此，研究認為，MMR在基因修復過程中，可通過對不同的聚體、抗原、酶等相互作用，通過對能量進行消耗，從而達到對DNA鏈進行修復的目的[8-9]。

臨床上，根據子宮內膜癌特點可將其分為遺傳性與散發性兩種，而散發性是臨床中較為常見的類型[10-11]。在對患者的臨床診斷中，免疫組織化學法已被廣泛運用于臨床診斷中，且具有較高的可靠性[12-13]。

本研究中，針對錯配修復蛋白（MLH1、PMS2、MSH2和MSH6）表達與UCEC臨床病理特征與預后相關性進行研究，得出以下研究結果：4種MMR蛋白表達均定位于腫瘤細胞核，可作為內對照;dMMR組與pMMR組年齡、病理組織學類型、臨床分期及淋巴結轉移等比較，差異有統計學意義（P<0.05）。通過本次研究可為臨床診斷提供可靠參考價值，能通過MMR蛋白表達對患者錯配修復基因是否存在缺失進行判斷，從而為患者預后判斷提供一定的參考依據[14-15]。

綜上所述，錯配修復蛋白（MLH1、PMS2、MSH2和MSH6）表達與UCEC臨床病理特征與預后相關性，能為UCEC患者預后提供可靠的參考依據。

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（收稿日期：2020-09-07）