孟魯司特上調Treg數量在兒童急性支氣管哮喘治療中發揮作用

陳石嬌，陳妮，徐莉，王才春

(海南醫學院第二附屬醫院 兒科，海口 570311)

支氣管哮喘是一種常見的慢性氣道持續性炎癥性疾病，中國支氣管哮喘患者數高達3 000萬，且呈逐年上升趨勢[1]。嬰幼兒哮喘多數在上呼吸道病毒感染后被誘發，起病較緩慢，而兒童哮喘多由吸入的變應原誘發，起病較急[2-4]。支氣管哮喘以氣道高反應性為主要病理特征，發病受遺傳和環境因素的共同影響，但具體發病機制尚不清楚。研究報道，支氣管哮喘與氣道炎癥、過敏反應等因素密切相關[5-6]。糖皮質激素治療是急性支氣管哮喘最常用的方案，具有很強的抑炎和免疫抑制作用。然而，長期使用糖皮質激素會導致明顯的不良反應和戒斷效應[7]。近年來，國內外大量臨床報道表明，孟魯司特可替代糖皮質激素治療急性支氣管哮喘[8-9]。孟魯司特是一種半胱氨酰白三烯(CysLTs)受體拮抗劑，可調節白三烯相關通路活性，臨床上用于哮喘的短期和長期治療，目前廣泛應用于兒童哮喘的治療[10]。此外，孟魯司特可與靶細胞表面的CysLT1受體結合以阻斷由其介導的促炎作用[11]。Treg可調節機體免疫平衡并介導免疫耐受，據報道，Treg可抑制Th2型細胞因子的產生和氣道嗜酸性粒細胞的聚集[12]。因此，研究孟魯司特在治療兒童急性支氣管哮喘時對Treg的影響，探討孟魯司特的可能作用機制具有一定可行性。研究圍繞孟魯司特對兒童急性支氣管哮喘的臨床療效及對Treg的影響，探究其作用機制，為孟魯司特治療兒童急性支氣管哮喘提供一定理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料收集2016年3月至2018年6月于海南醫學院第二附屬醫院就診的急性支氣管哮喘患兒108例，所有病例均符合《預防和治療指南》中的支氣管哮喘診斷標準[(1)反復喘息，呼吸急促，胸悶和咳嗽；(2)在哮喘發作過程中可聽到呼氣相喘息性啰音；(3)以上癥狀可自發或在治療后緩解]。孟魯司特治療組患兒63例，于每晚睡前口服5 mg孟魯司特鈉片(四川大冢制藥有限公司)。常規治療組患兒45例，給予抗感染聯合氨茶堿治療。治療以1周為1個療程，至少治療4個療程，所有患兒的療效觀察時間點為D3和D7。在此治療期間患兒沒有出現自身免疫性疾病或肺部感染，并且治療前1個月內無糖皮質激素或白三烯受體拮抗劑服用史。2組患兒的一般臨床資料如下(表1)。研究獲得患者的監護人知情同意簽字并通過醫院醫學倫理委員會批準。

表1 2組患兒的一般臨床資料比較

1.2 方法

1.2.1 2組患兒肺功能的檢測 檢測患兒的肺功能，詳細記錄相關參數：第1秒用力呼氣容積/用力肺活量(forced expiratory volume in one second/forced vital capacity， FEV1/FVC)比值和呼氣流量峰值(peak expiratory flow， PEF)。

1.2.2 2組患兒治療效果的評估 具體標準如下(表2)。

表2 療效評估評分標準

1.2.3 2組患兒外周血Treg的分離和檢測 治療前后分別抽取患兒空腹靜脈血5 mL；混勻抗凝劑和抗CD4、CD25多色標記熒光抗體混合物；以IgG1-FITC和IgG1-PE為陰性對照。 于室溫下避光孵育混合物10 min，FCM檢測。根據檢測結果計算患者外周血Treg百分比和1 μL 外周血中Treg的絕對數量。

1.2.4 2組患兒血清炎性因子水平的檢測 分離患兒外周血，ELISA檢測IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IgE及 IFN-γ水平，并在相應孔中加入標準樣品。每組血清樣本用稀釋劑稀釋10倍，于室溫靜置60 min。吸去上清液，加入相應的生物素標記抗體于37 ℃反應60 min，后加入100 μL抗生物素蛋白-過氧化物酶復合物于37 ℃反應30 min。終止反應，于酶標儀檢測光密度D(570 nm)值并繪制標準曲線，通過該曲線計算IL-4、IL-5、IL-6、IFN-γ、IL-10和IgE水平。

2 結果

2.1 肺功能的檢測常規治療組與孟魯司特治療組在治療前的FEV1/FVC比值、PEF差異均無統計學意義(P>0.05)。治療7 d后，常規治療組FEV1/FVC未有顯著改變，孟魯司特治療組FEV1/FVC改善顯著(P<0.01)。2組治療后PEF均顯著提高，且孟魯司特治療組改善較顯著(P<0.05，P<0.01)。

注： 與治療前相比，*P<0.05，**P<0.01。圖1 治療前后2組患者的肺功能比較

2.2 治療1周后的療效評估治療1周后療效評估結果顯示，孟魯司特治療組的療效評分顯著高于常規治療組(P<0.05， 表3)。

2.3 2組患兒治療前后外周血Treg的變化分別檢測2組患兒治療前后外周血Treg的數量及百分比變化。結果顯示，2組Treg的數量和百分比在治療后均顯著提高(P<0.05，P<0.01，圖2)。

表3 治療1周后的療效評估

注：A. FACS分析Treg占患兒外周血CD4 + T細胞百分比；B. 2組患兒治療前后Treg數量的變化；C. 2組患兒治療前后Treg百分比的變化。與治療前相比，*P<0.05，**P<0.01。圖2 2組患兒治療前后外周血Treg的數量和百分比變化

2.4 2組患兒治療前后外周血炎性因子的變化2組患兒治療后與治療前相比IL-4、IL-5和IL-6水平均顯著降低；常規治療后與常規治療前相比IL-10水平顯著增加，IFN-γ和IgE水平沒有顯著變化；孟魯司特治療后與治療前相比IL-10、IFN-γ和IgE水平均顯著增加。(均有P<0.05， 表4)

表4 2組患兒治療前后外周血炎性因子的變化

3 討論

CysLT是白三烯的代謝產物，在哮喘患者外周血中濃度較高，是引起疾病的重要因素之一[13]。孟魯司特是一種非甾體類抗炎藥，可選擇性與CysLT的受體結合，緩解支氣管哮喘患者的氣道痙攣癥狀[14]。此外，孟魯司特可以抑制氣道炎癥細胞的增殖，減少腺體分泌黏液，影響淋巴細胞的分化和活化，降低血管通透性，在治療肺纖維化和氣道重塑中發揮重要作用[15]。Han等[16]研究表明，孟魯司特可顯著降低卵清蛋白誘導的小鼠哮喘模型氣道局部嗜酸性粒細胞水平，減少黏液栓的形成并抑制氣道平滑肌細胞增殖。Treg是一類調節體內免疫反應的T細胞亞群，可將其分為CD4+CD25+Treg、Th3和Tr1。這些細胞與支氣管哮喘及其他過敏性疾病的發生密切相關[17]，其中Th1誘導的Th1/Th2失衡是哮喘發作的重要機制。

研究將孟魯司特用于兒童急性支氣管哮喘的治療，通過臨床癥狀和肺功能的檢測評估其療效，并進一步檢測其對Treg和血清炎性因子的影響。經過1周的治療，患兒肺功能得到明顯改善，治療有效率也較高，說明孟魯司特可有效治療兒童急性支氣管哮喘，改善患兒肺功能。IFN-γ可抑制IL-4誘導的IgE高表達和過敏反應，IL-4和IL-5則可促進CysLT的合成[18-19]。在支氣管哮喘患者中IFN-γ表達降低，IL-4和IL-5表達增加[20]。該研究發現，孟魯司特治療1周后可顯著降低患兒IL-4、IL-5和IL-6的水平，提高IFN-γ、IL-10和IgE的水平，增加與支氣管哮喘有關的Treg水平，從而調節Th1/Th2平衡進而有效改善支氣管哮喘癥狀。

總之，研究發現孟魯司特可以調節Th1/Th2平衡，增加Treg數量，抑制肺部炎癥，改善肺功能，對兒童急性支氣管哮喘具有重要的治療作用。