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羅漢果開發研究進展

2021-03-30 21:04:20蔣彩云馮鑫葦
江蘇調味副食品 2021年1期
關鍵詞:黃酮小鼠方法

蔣彩云,李 苗,馮鑫葦

(江蘇經貿職業技術學院 a.健康學院;b.江蘇省食品安全工程技術研究開發中心,江蘇 南京 211168)

羅漢果,屬于葫蘆科,是能夠多年生長的藤類植物,又被叫作拉汗果、金不換、假苦瓜、光果木鱉等,素有“神仙果”之稱。羅漢果的形狀有些像雞蛋、有些像球,在生長的時候,顏色是綠色的,摘下曬干后呈褐色。羅漢果一般生長在涼爽、潮濕、多風的山區[1],廣西壯族自治區桂林市是其主要產地。羅漢果是我國首批公布的藥食兩用材料之一,具有極高的藥用價值和營養價值。

羅漢果有潤肺止咳、美容養顏、健胃養生、潤腸通便等功效,常被人們用來泡茶飲用,尤其適合健身、肥胖人群。現在市面上有很多羅漢果飲品,如:茶源銀杏果茶,其成分除了水以外,就是白果、羅漢果及綠茶;即溶茶,由羅漢果粉、綠茶粉、杭菊粉組成固體粉末,使用時用熱水沖泡即可;羅漢果蜜,其主要成分是羅漢果提取物。在生活中,羅漢果還經常被用來煲湯、燉肉。羅漢果不僅可以食用,還可以藥用,如復方羅漢果清肺顆粒、羅漢果定喘片、羅漢果止咳膠囊、復方羅漢果含片等。

1 化學成分

1.1 三萜皂苷類

羅漢果中主要的活性物質是三萜皂苷類化合物,其中大部分可溶于水。將羅漢果放在水中搖一搖,會出現泡沫,和肥皂在水里的現象是一樣的。目前,在羅漢果中已經發現了12種皂苷,其中羅漢果甜苷V是主要組成成分[2]。羅漢果甜苷V幾乎沒有熱量,甜度是蔗糖的300倍左右。它的熱穩定性很好,并且天然無公害,因此常被人們用作甜味劑。

1.2 黃酮類

黃酮類化合物是一類生物活性溫和且多樣的植物色素。繞榮等[3]利用分光光度法比較了羅漢果果實中的黃酮量和莖葉中的黃酮量,得出果實中的黃酮總含量為13.87 mg/g,莖葉中的黃酮總含量為345.11 mg/g。張妮等[4]采用溶劑提取、柱層析色譜分離法從羅漢果葉中提取了阿魏酸、4′-甲氧基二氫槲皮素、大黃素、蘆薈大黃素。可見,羅漢果中含有豐富的黃酮類物質。

1.3 多糖類

多糖通常是由10個以上單糖分子組成的,常見的有淀粉、纖維素等。陳全斌等[5]使用溶劑提取的方法從羅漢果中分離出兩個多糖組分,用高效液相色譜法測得它們的相對分子質量分別為430 000、650 000。李俊等[6]對這兩個多糖組分進行研究分析,采用層析技術測得兩組具體含有的單糖成分,結果發現,鼠李糖和葡萄糖酸醛是其共同含有的成分。

1.4 油脂類

羅漢果中含有豐富的油脂類化合物。根據研究,羅漢果中不飽和脂肪的含量比游離脂肪酸的含量高很多,其中角鯊烯的含量最高,為種子油含量的51.52%[7]。周欣欣[8]使用水煮法提取羅漢果果實中的揮發油,其含量為0.2%~0.3%。經鑒定,揮發油的組成成分有很多,其中,n-十六烷酸的含量最高。

1.5 氨基酸和蛋白質

蛋白質是生命的基礎。羅漢果中蛋白質的含量約為10%。此外,羅漢果中還含有許多人體必需的氨基酸[9],其中,谷氨酸的含量最高。

1.6 無機鹽類

無機鹽是植物生長所必需的營養成分。羅漢果中含有鐵、錳、硒、鎂、碘、錫等26種無機元素。孟夏林等[10]使用原子吸收分光光度計和等離子光度計,測得羅漢果中含有豐富的人體必需的微量元素,其中硒含量很高,是糧食中硒含量的3倍左右。

1.7 其他成分

除了上述內容,豐富的維生素C、維生素E以及D-甘露醇等都是羅漢果所含有的活性成分。徐位坤等[11]采用紅外光譜、薄層層析等方法,從羅漢果中分離提取出了D-甘露醇,其顏色呈白色,味道比蔗糖甜一些。

2 藥理作用

2.1 止咳祛痰、潤腸通便

中醫學很早就使用羅漢果作為止咳祛痰、潤腸通便的藥物。王勤等[12]采用對照的方法給小鼠和大鼠做實驗,發現羅漢果水提取物可以使小鼠氣管的酚紅排出量和大鼠氣管排出痰量都有所增加,小鼠的咳嗽次數明顯下降,說明羅漢果對咳嗽有抑制作用。另外發現正常和便秘小鼠的排便量增加,且糞便含水量增加。陳瑤等[13]建立小鼠便秘模型,使用墨汁灌腸,結果顯示,羅漢果甜苷可以減少便秘小鼠第一次排便的時間,且糞便量增加,這說明羅漢果具有潤腸通便的作用。

2.2 活血化瘀

陳全斌等[14]采用靜脈注射的方法來觀察小鼠的腦血栓、凝血時間以及血小板等方面是否受羅漢果黃酮的影響。研究發現,羅漢果黃酮對小鼠腦血栓有40%的恢復率,對大鼠血小板聚集有22%左右的抑制率,并且能夠延長小鼠的血凝固時間,這說明羅漢果黃酮具有良好的活血化瘀作用。

2.3 抗氧化損傷

長時間的疲勞鍛煉會導致身體的抗氧化能力下降。姚績偉等[15]采用對照法得出,灌服羅漢果提取液的小鼠游泳力氣用盡的時間和對照組小鼠相比,會有所延遲。研究發現,羅漢果提取物可以讓血紅蛋白在運動時減緩下降,并且在運動后,能夠促進血紅蛋白的合成。同時,能使血乳酸降低或消失,增強機體抗氧化能力,從而有效控制機體脂質的過氧化。張俐勤等[16]證實了羅漢果提取物MGC、MGI、MGII可以有效清除自由基,清除率分別達51.05%、48.14%、43.62%,并且可以減少紅細胞溶血現象。

2.4 保護肝臟

肝臟是人體的重要器官。肖剛等[17]建造肝損傷模型,研究羅漢果甜苷對由四氯化碳引發的小鼠急性肝損傷的作用,結果顯示,羅漢果甜苷組比模型組的小鼠肝損傷要輕很多,而且甜苷的含量越高,效果越明顯,表明羅漢果甜苷對減輕肝組織病理變化有很好的效果。同時,他們還對由四氯化碳所致大鼠慢性肝損傷做了研究,結果表明,羅漢果甜苷可以顯著減輕肝損傷,有效緩解肝纖維化。

2.5 抗衰老

衰老是所有生命體必然經歷的一個過程,機體的衰老程度可以通過丙二醛的含量來反映,提高體內的超氧化物歧化酶(SOD)水平對延緩衰老、延年益壽具有重要意義。肖剛等[18]采用D-半乳糖衰老模型證實了羅漢果甜苷使得小鼠腦組織和血清中SOD的含量明顯增加,且丙二醛含量有所下降。果蠅的壽命實驗結果顯示,羅漢果甜苷可以推遲大多數果蠅的死亡時間,并且延長它們的壽命。這些都顯示了羅漢果對衰老有一定的抑制作用。

2.6 抗糖尿病

糖尿病是一種常見疾病,并且越來越年輕化,但目前沒有根治的辦法,只能抑制。羅漢果中的三萜皂苷類化合物具有降糖作用,它可以通過四種途徑[19]進行調解: 第一種是對胰腺β細胞進行損傷修復;第二種是使胰島素分泌量增多;第三種是激活腺苷酸活化蛋白激酶抑制糖異生途徑,達到控制血糖的目的;第四種是對體內糖苷酶活性進行抑制。徐慶等[20]給志愿者服用羅漢果甜苷,研究其對血糖正常的人是否有影響,結果表明無影響。

2.7 調節血脂紊亂

血脂紊亂是誘發心血管疾病的危害因素之一。血脂紊亂有一個重要特征就是高密度脂蛋白降低。調脂治療是預防和治療心血管疾病的重要方法,通過調節血脂紊亂可以抑制動脈粥樣硬化。張建義等[21]通過建立動物模型研究羅漢果對大鼠膽固醇、脂蛋白等的影響,結果顯示,羅漢果可以使高密度脂蛋白升高,具有調節血脂紊亂的作用。

此外,羅漢果還有很多其他的藥理作用,如抗癌、抗炎、增強免疫等。

3 有效成分的提取技術

傳統的羅漢果有效成分提取方法一般是煮沸或者乙醇浸泡,但是這些方法在操作過程中容易導致有效成分損失,提取效果并不好。近年來,隨著科技的進步,新的提取技術不斷涌現,對于保留羅漢果的有效成分提供了很大幫助。

3.1 三萜皂苷類

3.1.1 煎煮法

煎煮法是歷史悠久的傳統方法,將該方法和膜分離技術一起使用,能夠達到很好的提取效果。近幾年,膜分離技術廣泛應用于很多領域,如食品藥品、環境保護、生物、冶金、化工等。該方法主要是通過半透膜實現分離,不需要添加化學試劑,并且不需要改變溫度,在常溫下就可以進行,適用性非常好,操作比較簡單,耗費能量少,適合工業化生產。

范耀榮[22]使用煎煮法和膜分離技術相結合的方法提取羅漢果甜苷,提取率達86%,其成品符合企業標準。該方法的分離提取濃縮可以直接完成,操作簡便,污染少且效率高,但膜使用時間長,易損壞。蔣明廉[23]采用水提法,用超濾膜進行分離,結果表明,羅漢果甜苷的提取量達到了國際要求,且含量穩定,顏色均勻。

3.1.2 溶劑提取

溶劑提取是一種傳統方法,比較經濟、安全。陳敏等[24]對此方法提取羅漢果甜苷進行了優化,得出在料液比1∶15、浸泡30 min、全程共提取3次、每次60 min的條件下,羅漢果甜苷的提取效果最佳,提取率達5.57%。

溶劑提取法的效果比較穩定,但耗時較長,提取步驟較復雜,容易受到各種條件的制約。

3.1.3 微波提取技術

微波技術可以對物質的不同成分有選擇地進行加熱,使想要的成分直接分離出來,熱損失很少,能量利用率高,操作簡便,且在生產過程中不會有噪音。因此,很多領域都采用微波技術,尤其是天然藥物的提取。

朱曉韻等[25]對影響羅漢果甜苷提取效果的因素進行了分析,得出微波技術提取羅漢果甜苷的最佳方法:放入八倍的水,在微波輸出功率為750 W、提取時間為15 min的條件下進行提取,最終得到7.3 mg/g的甜苷。微波技術的提取效率高于傳統水煮法,但由于設備原因,不適合大規模生產,目前只能應用于實驗室內。

3.1.4 超聲波提取技術

超聲波技術廣泛應用于很多領域,在醫藥領域也有很多的應用,尤其是物質的分離提取方面。超聲波技術提取時間較短,不需要很高的溫度,適用于提取不耐熱的中草藥成分,有著很好的應用前景。

李軍生等[26]用超聲波技術提取羅漢果甜苷,并與浸提法進行了比較,結果表明,超聲波技術提取效果良好,甜苷提取率比浸提法要高很多,并且高頻率超聲波作用效果要好于低頻率超聲波。實驗還發現,羅漢果粉末的粗細程度也影響著羅漢果甜苷的提取率,粉末越細,提取率就會越高。但超聲波提取技術和微波提取技術存在一樣的問題,即不適合大規模生產。

3.1.5 閃式提取法

閃提法是一種新型提取方法,它可以在常溫下快速使植物的各個部分破碎,并讓活性成分在組織內外平衡,然后過濾提取。這種方法可以很好地保留物質中的有效成分,提取時間在30 s左右,非常快速,且刀片耐磨、不易破損,適用范圍非常廣泛。

劉兆等[27]采用閃提技術提取羅漢果甜苷,提取率達10.057%。與微波和超聲波技術相比較,閃提技術具有效率高、能耗少、速度快及操作簡單等優點,適合大規模生產。楊曄等[28]采用閃式提取法提取羅漢果甜苷,提取率為8.77%,純度達92%以上,效率非常高。閃提技術在天然物質的開發方面具有很好的應用前景。

3.2 黃酮類

3.2.1 酶解法

酶解法是提取中藥成分的一種有效方法,它的反應條件十分溫和,活性成分不容易改變,有著很高的提取效率,并且不易污染,有利于環境保護。王邕等[29]采用酶解法和溶劑提取相結合的方法提取羅漢果中的黃酮,提取率達6.921%,并且該方法污染少。

3.2.2 溶劑提取

黃酮類物質的提取同樣可以使用溶劑提取法,而且可以和微波、超聲波等技術結合起來使用,效果也非常好。秦滿發等[30]以水-乙醇為提取溶劑,輔以微波技術,得到羅漢果黃酮的量為1.72%。容元平等[31]使用溶劑提取羅漢果中的總黃酮,輔以超聲波技術,使得提取率有了很大的提升,且二次逆流提取率比一次提取率高。楊洋等[32]采用乙醇提取羅漢果黃酮,輔以薄層層析法提純,加入15倍的乙醇,在溫度70 ℃條件下提取2 h,得到0.583%的黃酮。

3.3 多糖類

3.3.1 超聲波提取技術

超聲波技術在多糖的提取上得到了很好的應用。李俊等[33]以超聲波技術提取羅漢果多糖,提取效果很好,提取條件:羅漢果與水為1∶30,溫度為50 ℃,進行3次提取。該方法與傳統的熱水法相比,大大縮短了時間,多糖含量高10.6%,并且在提取過程中不需要很高的溫度,多糖結構不會因高溫而水解,從而保證了多糖的質量。

3.3.2 酶解法

多糖類物質的提取同樣可以采用酶解法。李洪燕等[34]在酶解溫度50 ℃、酶活性500 U/g、pH 6.0、酶解時間55 min的條件下提取羅漢果多糖,提取率達6.82%,比傳統熱水法的提取率增加了10%~22%。

3.4 其他類

蘇小建等[35]采用超濾膜提取羅漢果蛋白酶,結果表明,其酶活與蛋白質主要分布在相對分子量為10萬以上和1萬~5萬,分別占各自總量的59.2%和65.55%,具有很好的利用價值。劉燦等[36]使用閃提技術提取羅漢果多酚,使用響應面分析法確定提取條件,多酚提取率為2.73%。

4 結論與展望

本文介紹了羅漢果的化學成分、藥理作用及其有效成分的提取分離技術。目前,對羅漢果的開發研究存在以下問題:一是對藥理作用研究較多,對臨床應用研究較少;二是對果實的研究很多,對莖、葉、根等部分的研究較少;三是對羅漢果甜苷、黃酮、多糖等成分的研究較多,對其他活性物質的研究較少;四是對羅漢果甜苷、黃酮、多糖的提取研究較多,對其他成分的提取研究較少,并且很多技術只是在實驗室中使用,不適合大規模應用。上述問題都是未來的研究方向。

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