泌尿生殖道感染支原體的分布及耐藥性分析

吳振安，魏娜，謝立蘋

（北京市中西醫結合醫院，北京 100039）

0 引言

支原體是一類沒有細胞壁、高度多形性、能通過濾菌器、可用人工培養基培養增殖的最小原核細胞型微生物，其中解脲脲原體（Uu）和人型支原體（Mh）是引起非淋菌性泌尿生殖道感染的常見重要病原體[1-3]。近年來,隨著社會經濟的發展及人們生活習慣的改變，泌尿生殖道支原體感染發病率有逐年上升的趨勢，且由于抗菌藥物的不規范使用和濫用，耐藥菌株日益增多，給臨床治療帶來較大困難。我們對1680 例泌尿生殖道支原體感染患者的培養結果進行了統計分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018 年1 月至2019 年12 月我院門診和住院1680 例疑似泌尿生殖道感染的患者臨床資料，其中女性1528 例，年齡19-58 歲，平均（33.6±4.5）歲；男152 例，年齡22-62 歲，平均（37.5±5.3）歲。所有入選患者均訴有尿頻、生殖道分泌物增加或下腹墜脹感等情況，均無嚴重合并癥，取標本前3天內無性生活，1 周內未用抗菌藥物。多次就診者選取首診結果。

1.2 標本采集

所有標本由臨床醫生用無菌棉拭子按規范采集，女性：將宮頸口分泌物擦拭干凈后，用采樣拭子于宮頸口內約2cm 處旋轉拭取分泌物；男性：將尿道口清潔干凈后，用采樣拭子于尿道口內約3cm 處拭取分泌物，標本采集后置于無菌試管內立即送檢。

1.3 試劑和方法

采用眾愛生河北生物科技有限公司解脲支原體和人型支原體選擇分離培養、鑒定、藥敏試劑盒，嚴格按照操作說明書進行接種、培養和判定結果。

1.3.1 試劑

該試劑盒中主要試劑為Uu 和Mh 選擇分離培養基及28 孔藥敏板，培養基主要成分有蛋白胨、動物血清、生長因子、底物和酚紅指示劑等，藥敏板藥敏試驗微孔中包被的12 種抗生素為：強力霉素、美滿霉素、交沙霉素、克拉霉素、阿奇霉素、羅紅霉素、環丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、司帕沙星及大觀霉素。

1.3.2 方法

取出試劑盒復溫至室溫并編號，先從未接種樣本的培養基瓶中取出100ul 的培養基液加入藥敏板陰性對照孔；再將采集有標本的拭子頭插入培養基液體中，充分洗滌，在瓶壁上擠干拭子，然后各取100ul 已接種后的培養基液體樣本分別加入除陰性對照孔以外的各孔中，每孔滴加1-2 滴石蠟油，蓋上蓋，與剩下的培養基均放在36℃±1℃培養箱中培養，24 和48 小時觀察結果。

1.3.3 培養結果判定

培養后，對應孔培養基不變色，仍呈清亮黃色液體為陰性；培養基由黃色變成紅色且清亮為陽性，顯示有支原體生長。陰性對照孔呈陰性，陽性對照孔呈陽性，Uu 鑒定孔為陽性（培養24 小時），表示有Uu 生長，且計數≥104ccu/mL，有臨床意義；Mh鑒定孔為陽性（培養48 小時），表示有Mh 生長，且計數≥104ccu/mL，有臨床意義。

1.3.4 藥敏結果判定

當經培養判定為有支原體生長時，高、低兩種藥物濃度孔均不變色，判為支原體對該藥物敏感（S）；高、低濃度孔均變紅，判為支原體對該藥物耐藥（R）；低濃度孔變紅，高濃度孔不變色，判為支原體對該藥物中度敏感（I）。

1.4 質量控制

取支原體屬培養陽性液體50ul 接種于血平皿上，35℃孵育48 小時，均無菌生長。

1.5 統計學分析

采用SPSS 20.0 軟件對數據進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 支原體培養、鑒定結果

經培養鑒定，1680 份泌尿生殖道標本中，支原體培養陽性564 份，陽性率為33.57%。男性患者支原體陽性37 例，女性患者支原體陽性527 例，陽性率分別為24.34%和34.49%。女性患者支原體培養陽性率明顯高于男性患者（P＜0.05）。培養陽性的564 例支原體中，解脲脲原體陽性445 例，占78.90%；人型支原體陽性34 例，占6.03%；Uu+Mh陽性85 例，占15.07%。不同性別患者支原體培養陽性率及各種支原體分布見表1。

表1 不同性別患者支原體培養陽性率及各種支原體分布〔n（%）〕

2.2 解脲脲原體和人型支原體對抗菌藥物的耐藥率

564 例支原體屬陽性株對美滿霉素、強力霉素、交沙霉素耐藥率較低，均低于15%；對諾氟沙星、環丙沙星、氧氟沙星、大觀霉素和司帕沙星的耐藥率較高，均高于75%。Uu 對美滿霉素、強力霉素和交沙霉素的敏感率分別為96%、95%和86%，對諾氟沙星、環丙沙星、氧氟沙星、大觀霉素和司帕沙星的耐藥率分別為99%、93%、90%、81%和72%；Mh 對美滿霉素、強力霉素和交沙霉素的敏感率分別為100%、100%和82%，對諾氟沙星、氧氟沙星等其他9 種抗菌藥物的耐藥率均高于80%；Uu+Mh 對美滿霉素、強力霉素和交沙霉素的敏感率分別為92%、91%和81%，對諾氟沙星、氧氟沙星等其他9 種抗菌藥物的耐藥率均不低于85%。解脲脲原體和人型支原體對常用抗菌藥物的耐藥率見表2。

3 討論

（1）本次研究結果顯示，本院泌尿生殖道標本支原體培養陽性率為33.57%，支原體以Uu 為主，這與國內相關文獻報道一致[4-6]。Uu 感染率高于Mh 感染率的可能原因是：機體感染Uu 后使得感染局部的生殖道系統上皮細胞損傷，從而利于Mh 侵入，而機體泌尿生殖道系統上皮細胞未受損傷時Mh 則不易侵入[6]。女性患者支原體培養陽性率為34.49%,較文獻[7-9]報道的數據低。女性患者支原體培養陽性率明顯高于男性患者（P＜0.05），在不同支原體屬類別感染上，男女分布差異無統計學意義，提示泌尿生殖道支原體屬感染存在性別差異，但不同性別在支原體屬感染類別上無差異。這可能原因有：男女兩性泌尿生殖道生理環境和解剖學結構不同，女性泌尿生殖道較男性更易于支原體屬定植引起感染；支原體屬感染后的臨床癥狀女性較男性更為隱匿[4]。

表2 解脲脲原體和人型支原體對常用抗菌藥物的耐藥率（%）

（2）由于支原體無細胞壁，B-內酰胺類抗生素等作用于細胞壁的抗生素對其無效。本研究選用了12 種阻斷細菌蛋白質合成的抗菌藥物進行支原體屬藥敏試驗。Uu、Mh 和兩者混合感染對美滿霉素、強力霉素耐藥率均低于10%，對交沙霉素的耐藥率均低于15%。美滿霉素、強力霉素是臨床經驗治療時首選藥，但具有肝腎毒性，可引起骨和牙齒的損傷；交沙霉素是新型大環內酯類抗菌藥物，對支原體屬抗菌作用強，為非誘導抗菌藥物，不易誘導耐藥菌株，且對其他藥物誘導的耐藥菌株仍具有抗菌活性，副作用輕微，推薦臨床醫師宜選擇交沙霉素作為支原體屬感染的經驗用藥。除Uu 對左氧氟沙星的耐藥率為43%外，支原體屬對喹諾酮類耐藥率均高于70%。喹諾酮類藥物抗菌譜廣，在泌尿生殖道組織中濃度高，臨床大量使用此類藥物治療泌尿生殖道感染。近年來，支原體屬對喹諾酮類耐藥率不斷增高，并且喹諾酮類藥物還會誘導支原體屬多藥耐藥性產生。其原因可能是大量使用喹諾酮類藥物使支原體DNA螺旋酶發生變異，以及主動泵出機制等造成支原體屬對喹諾酮類藥物敏感性降低。此外，由于臨床上抗菌藥物濫用與不規范用藥，以及支原體耐藥基因的出現，導致支原體對常規抗菌藥物出現不同程度的耐藥，產生較高耐藥率[10]。為避免更多多藥耐藥株產生造成臨床治療更加困難，對于非培養方法檢出泌尿生殖道支原體屬感染時，盡量避免常規使用喹諾酮類藥物。

（3）近年來，由于抗菌藥物濫用、治療不規范等因素使得病原菌獲得性耐藥機制迅速發展，病原菌耐藥問題變得十分復雜，導致病原菌發生多重耐藥，耐藥性也在不斷發生變化，支原體屬耐藥情況也日益嚴重[11-12]。支原體屬對各種抗菌藥物的耐藥率亦不盡一致，泌尿生殖道支原體感染患者時常遇到反復抗菌藥物治療無效的情況，治愈者短期內復發的也屢見不鮮，不經病原微生物檢測而僅憑經驗使用抗生素會使泌尿生殖道支原體感染的控制面臨越來越大的困難。因此，在泌尿生殖道感染疾病的診療中，臨床醫生應在使用抗菌藥物之前，及時留取標本送檢，盡早完成病原微生物培養、鑒定和藥敏試驗，根據檢驗結果合理選擇抗生素，并規范化使用，且應避免長時間使用同一種抗菌藥物，從而減少支原體耐藥的發生。