一例豬混合感染的診斷與治療

文│肖其偉（甘肅省酒泉市肅州區東洞鎮人民政府）

2019年11月初，甘肅省酒泉市肅州區某規模化豬場發生疫情，主要是2周齡內仔豬出現大面積腹瀉，部分仔豬有類似神經癥狀，且對豬群緊急免疫接種PRV弱毒疫苗后基本無效。對該場內死亡的仔豬進行剖檢，無菌采集病變明顯的組織樣品，低溫送至當地動物疫病專業檢測實驗室，進行細菌分離與病原診斷。其結果發現，出現疫情主要原因是豬鏈球菌、PCV2和PEDV混合感染所致，且分離得到菌株對氨芐西林、頭孢噻肟和恩諾沙星等較敏感。

一、材料與方法

1.病料來源。該場仔豬腹瀉嚴重，且伴隨神經癥狀瀕臨死亡的2頭仔豬肺、腎、小腸和淋巴結等組織發生病變。

2.主要試劑。PCR預混液、核酸染料、瓊脂糖粉末、DL2000marker和cDNA反轉錄試劑盒等均購自寶生物工程（大連）有限公司；動物組織DNA/RNA核酸提取試劑盒購自鄭州智杰生物技術有限公司；不同藥敏紙片購自河北利華藥業有限公司；普通瓊脂培養基和鮮血瓊脂培養基由本試驗自配。

二、實驗方法

1.細菌分離與鑒定。將75%酒精浸泡的手術刀擦拭干凈并再次灼燒后，切開腹股溝淋巴結深處組織，用無菌接種后蘸取少量組織液在普通液體培養基中攪拌，將培養基在37℃的搖床（220轉/分鐘）培養12小時。其后，蘸取少量培養液分別在普通瓊脂和鮮血瓊脂培養基表面平板劃線，置于37℃恒溫箱內培養，16～24小時后觀察培養基表面是否出現菌落，對獲得的菌落進行革蘭氏染色法，根據菌落形態學特征進行初步鑒定。

2.細菌藥敏試驗。將單一菌落擴菌后均勻涂布在普通瓊脂培養基表面，待液面稍干貼上含有抗生素的藥敏紙片，37℃恒溫箱內培養12～16小時后，衡量抑菌圈直徑大小。

3.病毒性病原檢測。將病變組織樣品（淋巴結、肺、小腸和腎等）切碎后混合，放在滅菌研缽中，加入適量生理鹽水，反復研磨后過濾獲得上清，使用試劑盒提取組織上清中核酸（含DNA和RNA），同時將RNA反轉錄為cDNA，采用RT-PCR法檢測樣品中是否存在PEDV、PRV、PRRSV、PCV2、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬德爾塔冠狀病毒（PDcoV）和豬輪狀病毒（PoRV）核酸。反應結束后，取5微升產物進行瓊脂凝膠電泳，并觀察結果。

三、實驗結果

1.臨床癥狀及病理變化。筆者隨養殖人員進入發病豬場內，見大量因嚴重腹瀉而極度消瘦的仔豬。仔豬腹瀉呈噴射狀，且肛門處沾滿糞污；部分仔豬有神經癥狀，如轉圈、磨牙等。該場暴發疫情以來，仔豬發病率達60%左右，病死率達75%。將病豬剖檢發現，其全身淋巴結腫大；腎表面有出血點；小腸中可見少量內容物，腸壁薄且充血嚴重。

2.細菌分離鑒定與藥敏試驗結果。將培養基置于恒溫箱內培養24小時后，可見2種培養基表面均出現光滑、濕潤的菌落，進一步染色鑒定發現視野可見成對或成排的短鏈狀革蘭氏陽性菌，根據其形態學特征可確定為豬鏈球菌。進一步藥敏試驗結果發現，分離純化的菌株，對氨芐西林、頭孢噻肟、頭孢氨芐、阿莫西林和恩諾沙星高度敏感，其抑菌圈直徑均大于28毫米；對氟苯尼考、慶大霉素、四環素、林可霉素、鏈霉素等常見抗生素耐藥，抑菌圈直徑均低于10毫米。

3.病毒性病原檢測結果。分子生物學診斷結果顯示，檢測的2份病料組織樣品中均為PCV2和PEDV核酸陽性，但未檢測出其他病原核酸。

四、診斷結果及討論

綜合發病豬群臨床癥狀、剖檢病變特征和實驗室診斷結果，最終判定該場仔豬發生嚴重疫情由PCV2、PEDV和豬鏈球菌混合感染所致。

PCV2在我國豬場流行廣泛，可導致病畜出現系列臨床癥狀，如呼吸困難、消瘦和皮炎等。但PCV2感染導致病畜死亡率較低，可使病畜出現免疫抑制，從而導致病畜更加容易感染其他病原。豬鏈球菌屬于機會致病菌，在豬場內廣泛存在，當豬群免疫力較好時感染該病不表現明顯臨床癥狀；豬群因應激、營養不良或其他因素導致免疫力下降時，該病便表現出嚴重癥狀，如敗血癥、關節炎，甚至死亡。PEDV是導致仔豬腹瀉的主要病原之一，但其引發的臨床癥狀與其他腸道腹瀉病相似，病原確定常需實驗室診斷。

目前，豬群多種病原混合感染情況較為常見，對于此類疫病確診也需要依靠實驗室相關技術。對于細菌性病原的治療可以通過菌株敏感藥物的使用，而病毒性疫病防控暫時沒有特效藥物，只能依靠疫苗緊急免疫接種、抗病毒藥物的使用和對癥治療。