Xpert MTB/RIF 在肺結(jié)核及耐藥結(jié)核檢測(cè)中的價(jià)值

王云格

結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢查可為結(jié)核病的確診提供病原學(xué)證據(jù),也是確診傳染性肺結(jié)核尤其是耐多藥結(jié)核病的重要依據(jù),是結(jié)核病診斷,治療和防治效果評(píng)價(jià)的技術(shù)關(guān)鍵［1］。全國(guó)第五次結(jié)核病抽樣調(diào)查資料顯示,我國(guó)15 歲以上人群活動(dòng)性涂陽(yáng)和菌陽(yáng)肺結(jié)核的患病率分別為459/10 萬(wàn)、66/10 萬(wàn)和119/10 萬(wàn),結(jié)核分枝桿菌耐多藥率為6.8%［2］。現(xiàn)今,因基層結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)設(shè)施、人力資源較為薄弱,以及研究經(jīng)費(fèi)也存在不足,菌陽(yáng)肺結(jié)核主要采取痰涂片和痰培養(yǎng)等常規(guī)的方法檢測(cè)。但常規(guī)方法的檢出率相對(duì)較低,導(dǎo)致少數(shù)的菌陽(yáng)肺結(jié)核無(wú)法及時(shí)發(fā)現(xiàn)。因此尋求一種結(jié)核分枝桿菌高檢出率的方法,能夠有效的確診斷肺結(jié)核以及其耐藥性,可較好的控制結(jié)核病疫情。結(jié)核病的診斷取決于痰涂片的抗酸染色和結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng),結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)和藥物敏感性測(cè)試的條件較為苛刻,而在時(shí)效上,結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)和藥物敏感性檢測(cè)需要進(jìn)行分離菌株培養(yǎng),所耗時(shí)間達(dá)到2 個(gè)月,這定會(huì)對(duì)肺結(jié)核的最佳診治時(shí)間造成延誤,影響早期診斷結(jié)果［3］。耐藥結(jié)核病的出現(xiàn),對(duì)結(jié)核病的預(yù)防和控制帶來(lái)了前所未有的挑戰(zhàn)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,Xpert MTB/RIF 技術(shù)應(yīng)用在肺結(jié)核及耐藥結(jié)核診斷檢測(cè)中,從而為結(jié)核病的及時(shí)診斷起到了重要的作用。Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)是世界衛(wèi)生組織認(rèn)可的一種全新的結(jié)核病快速檢測(cè)方法,其操作簡(jiǎn)單,只需要一步的準(zhǔn)備工作,2 h 夠能夠得到檢測(cè)結(jié)果,具有生物安全性,并且具有很高的陽(yáng)性檢出率。Xpert MTB/RIF 技術(shù)與傳統(tǒng)方法相比,敏感性和特異性更高,在基層結(jié)核病防治中有著重要的應(yīng)用價(jià)值［2］。本次研究將150 例可疑耐藥肺結(jié)核及初篩痰結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性自愿行Xpert MTB/RIF 及結(jié)核桿菌培養(yǎng)的患者,對(duì)不同檢測(cè)方法檢測(cè)出的結(jié)核桿菌和耐藥菌的情況進(jìn)行研究分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將本院于 2017年1 月～2019年1 月期間收治的可疑耐藥肺結(jié)核及初篩結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性自愿行Xpert MTB/RIF 及結(jié)核桿菌培養(yǎng)檢查的150 例患者作為本次研究對(duì)象,其中男84 例,女66 例；年齡43～75 歲,平均年齡(54.78±6.75)歲；58 例為臨床懷疑耐藥結(jié)核病患者,占比38.67%,其中包括初治且規(guī)律一線抗結(jié)核治療>3 個(gè)月結(jié)核桿菌涂片仍為陽(yáng)性患者、復(fù)治失敗患者、在發(fā)病前與開(kāi)放性耐藥肺結(jié)核有接觸史的患者；92 例為初篩結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性自愿行相關(guān)檢測(cè)的患者,占比61.33%。以上患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)發(fā)布的《肺結(jié)核診斷和治療指南》中肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除患有嚴(yán)重器官功能性障礙以及患有精神類疾病患者和近期采取抗結(jié)核治療,在呼吸道中未留存足夠標(biāo)本的患者。患者及家屬均對(duì)本次研究目的知悉,且自愿參加本次研究,此次研究已通過(guò)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 設(shè)備與試劑 使用珠海貝索生物技術(shù)有限公司所生產(chǎn)的抗酸染色液,上海申賢恒溫設(shè)備廠生產(chǎn)的隔水式恒溫培養(yǎng)箱,珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程股份有限公司生產(chǎn)的酸氏羅氏培養(yǎng)基,美國(guó)Cepheid 公司所生產(chǎn)的Xpert MTB/RIF 檢測(cè)系統(tǒng)以及配套試劑。

1.2.2 檢查方法 150 例可疑耐藥結(jié)核病及結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性的患者,取3 份清晨痰液樣本予以熒光顯微鏡檢查、結(jié)核菌培養(yǎng)和Xpert MTB/RIF 檢查。如果結(jié)核菌培養(yǎng)的結(jié)果是結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性,需要進(jìn)行深入藥敏試驗(yàn)。采取Xpert MTB/RIF 和常規(guī)結(jié)核菌培養(yǎng)技術(shù)對(duì)分枝桿菌和利福平耐藥點(diǎn)檢測(cè)予以對(duì)比。

1.3 觀察指標(biāo) 以結(jié)核桿菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),分析Xpert MTB/RIF 對(duì)疑似耐藥結(jié)核病患者及結(jié)核桿菌涂片初篩陽(yáng)性患者利福平耐藥的檢測(cè)靈敏度、特異度。

2 結(jié)果

2.1 Xpert MTB/RIF 對(duì)疑似耐藥結(jié)核病患者利福平耐藥的靈敏度、特異度分析 58 例疑似耐藥結(jié)核病患者中,Xpert MTB/RIF 均檢出結(jié)核分枝桿菌感染,檢出利福平耐藥5 例,占比8.62%；結(jié)核桿菌培養(yǎng)檢出4 例利福平耐藥,占比6.90%,以結(jié)核桿菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),Xpert MTB/RIF 對(duì)耐藥結(jié)核病患者利福平耐藥的靈敏度為100.00%(4/4),特異度98.15%(53/54)。

2.2 Xpert MTB/RIF 對(duì)結(jié)核桿菌涂片初篩陽(yáng)性患者利福平耐藥的靈敏度、特異度分析 92 例初篩結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性患者中,Xpert MTB/RIF 均檢出結(jié)核分枝桿菌,檢出利福平耐藥4 例,占比4.35%；結(jié)核桿菌培養(yǎng)檢出3 例利福平耐藥,占比3.26%。以結(jié)核桿菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),Xpert MTB/RIF 對(duì)結(jié)核桿菌涂片初篩陽(yáng)性患者利福平耐藥的靈敏度為100.00%(3/3),特異度98.88%(88/89)。

3 討論

我國(guó)的結(jié)核病發(fā)病率較高,根據(jù)相關(guān)結(jié)核病流調(diào)結(jié)果得知,我國(guó)活動(dòng)性肺結(jié)核患者較多,結(jié)核病耐藥情況較為嚴(yán)重,因此對(duì)結(jié)核病、耐藥結(jié)核病的早期診斷以及治療格外重要［3］。結(jié)核病是一種常見(jiàn)的慢性傳染性疾病,對(duì)患者的健康和生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響［4］,每年全球有大約150 萬(wàn)人因結(jié)核病而導(dǎo)致死亡。一些結(jié)核病患者起病隱匿,早期可能沒(méi)有癥狀,因此,結(jié)核病的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療對(duì)提高治愈率、降低感染率、死亡率具有重要的意義［5］。臨床診斷中最常用的肺結(jié)核診斷方法則有分枝桿菌培養(yǎng)、抗酸染色顯微鏡檢等,以上方法具有經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便等特點(diǎn),但檢出率相對(duì)偏低,且培養(yǎng)耗時(shí)。因此,采取快速、準(zhǔn)確的檢出方法將對(duì)提高結(jié)核病的診斷率起到重要作用。

現(xiàn)如今,醫(yī)療水平在不斷發(fā)展,Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)能夠快速特異地檢測(cè)出結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥,為臨床診斷和治療提供可靠的參考,具有較好的臨床價(jià)值。Xpert MTB/RIF 檢測(cè)技術(shù)是一種半巢式實(shí)時(shí)熒光PCR 體外診斷技術(shù),可對(duì)結(jié)核分枝桿菌DNA 以及利福平耐藥突變基因進(jìn)行檢測(cè),用于診斷結(jié)核病和利福平耐藥結(jié)核病。全過(guò)程僅需約2 h,操作簡(jiǎn)單。在進(jìn)一步提高診斷符合率的同時(shí),提高診斷的敏感性和特異性。由于其全封閉式的檢測(cè)技術(shù),具有很高的生物學(xué)安全性。基于結(jié)核分枝桿菌DNA,可用于有效消除非結(jié)核分枝桿菌的干擾,與非結(jié)核分枝桿菌無(wú)交叉反應(yīng)。在常鳳霞［6］的相關(guān)研究中得知,Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)使用MTB DNA 作為檢測(cè)對(duì)象,可以排除非結(jié)核分枝桿菌的干擾。熒光染色與固體培養(yǎng)只能檢測(cè)到分枝桿菌,則會(huì)較大幾率造成誤診。如果染色或培養(yǎng)陽(yáng)性/Xpert MTB/RIF 陰性,則可能懷疑樣品中含有非結(jié)核分枝桿菌,這需要通過(guò)菌株鑒定予以進(jìn)一步確認(rèn)。

在對(duì)結(jié)核桿菌涂片陽(yáng)性的疑似耐藥結(jié)核病患者采取Xpert MTB/RIF 檢測(cè)后均檢出結(jié)核分枝桿菌感染,其檢測(cè)靈敏度、特異度較高。同時(shí)對(duì)耐藥菌的檢測(cè)的靈敏度和特異度也較高,充分說(shuō)明了該方法在肺結(jié)核及耐藥結(jié)核檢測(cè)中有著重要的價(jià)值。在李桂杭等［7］的相關(guān)研究中得知,Xpert MTB/RIF 檢測(cè)法的靈敏度為87.50%,高于液體分枝桿菌培養(yǎng)管(MGIT)培養(yǎng)法的66.67%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Xpert MTB/RIF檢測(cè)法的特異性為91.67%,明顯高于液體MGIT 培養(yǎng)法的25.00%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在其結(jié)果中可以看出Xpert MTB/RIF 技術(shù)在上臨床有著較好的應(yīng)用價(jià)值,能夠?qū)Ψ谓Y(jié)核的早期診斷起到很好作用。

綜上所述,Xpert MTB/RIF 是一種準(zhǔn)確、快速的診斷肺結(jié)核及耐藥結(jié)核病的有效手段,生物安全要求較低,確具有生物安全性。并且具有很高的陽(yáng)性檢出率,和較高的檢測(cè)靈敏度、特異度,該方法值得在臨床檢測(cè)上推廣應(yīng)用。