芻議中藥鑒定技術方法的研究現狀

周 波

中醫藥為我國人民自古以來與疾病作斗爭積累起來的寶貴財富，因地理和歷史等諸多因素影響，目前中藥品種混亂，給中藥鑒定帶來了困難。傳統中藥鑒定方法通過來源分析、理化鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別，基層普及較廣，并且能夠系統鑒別出不同中藥間的差別，被稱為中藥鑒別的四大基礎方法[1]。隨著科學技術的進步，多學科新理論在中藥鑒定領域逐漸應用，直接推動了中藥鑒定的發展。

1 中藥鑒定現代方法

1.1 紫外光譜紫外光譜分析能夠對中藥組分中的含量及不飽和程度造成的紫外圖譜吸收曲線，通過曲線變化可對中藥進行定性鑒別[2]。紫外光譜鑒定適用于無法單純采用傳統鑒別，仍有較高相似度的中藥材，典型的代表藥物為懷牛膝和牛膝，屬于多年生草本，容易發生以次充好情況，并且2種藥物均有條子粗壯、含油較多等特點，采用顯微鑒定無法進行有效區分，若采用遺傳學鑒定又需要花費較大的人力物力，采用紫外光譜鑒別通過吸收曲線能夠進行很好的區分[3]。

1.2 色譜分析色譜分析鑒定中藥材，通過提取藥材中的含量和化學組成，能夠定性鑒別，鑒別速度較快，并且具有高分離性的特點。采用色譜分析法能夠將同批次藥材中的細微差異進行鑒別，但是需要消耗較高的成本，不利于在基層推廣，并且在鑒定試驗中需要損傷藥材[4]。色譜分析主要可分為薄層色譜、高效液相色譜和氣相色譜3種，在色譜分析法中，應用度最高的為高效液相色譜，其具有檢測誤差小、重現性好、靈敏度高、專屬性強等特點，常常被應用于藥品檢驗機構、科研院所、藥廠中。《中華人民共和國藥典》中將大部分藥物的高效液相色譜收錄，也是建議與質譜等檢測方式結合應用，可使檢測方法得以拓展，逐步增加應用范圍[5]。色譜分析方法皂搓相對復雜，檢測結果需要花費較長時間，建議專業人員進行。

1.3 電腦圖像分析電腦圖像分析法鑒定藥材利用高科技電子產品通過對曲率驅動擴散成像進行分析中藥外觀，利于鑒定檢測數量較大的藥材。電腦圖像分析法應用時間較晚，但不受檢測環境限制，又因其為電子產品，目前應用范圍較廣。電腦圖像分析法對藥材外觀能夠進行細致分析，但在重要性之分析上存在局限性，在藥廠應用此種鑒定方法較多[6]。電腦圖像分析法與人工鑒定方法比較效率大大提高。中藥材山茱萸多采用此種方法鑒定分析，山茱萸具有降糖作用，在種植過程中會進行嫁接繁殖，容易受到病蟲害，在入藥前中藥鑒定十分重要，應用電腦圖像分析對山茱萸進行鑒定，能夠對其入藥適應證、完整度進行快速判斷，并且結果相對準確。

1.4 遺傳學標記鑒別遺傳標記物鑒別技術是對中藥材基因進行直接分析，以鑒定其所屬物種。雖然該種鑒定方法的應用時間不暢，但具有對樣本影響小、方法簡便、鑒別成本低等特點。在現代中藥鑒定方法中屬于應用較廣的技術。當歸的鑒別多采用遺傳標記法鑒別，入藥部分為當歸的根部，具有補血、潤腸、活血的作用。當歸在我國具有較長的種植歷史，早在唐朝就有當歸種植的記載，因當歸多生長在干旱地區，外表較粗糙，在顯微鏡觀察下無法進行有效鑒別，需要進行遺傳學標記方法鑒別[7]。采用遺傳學標記鑒別能夠直接與已知當歸樣本中的藥材序列進行比對，直接鑒別藥材品質和真偽。

1.5 電泳鑒別電泳是鑒定和分離混合物中帶電粒子的方法。電泳法對于蛋白質含量較多或多肽含量豐富的中藥具有較高靈敏度和專屬性，被廣泛應用在中藥鑒定的電泳種類為聚丙烯酰胺凝膠電泳，但是因為受到儀器和技術的限制不能廣泛應用[8]。凝膠電泳能夠準確鑒別鹿角和鹿茸，鹿茸的總氨基酸是通過多肽形式存在，而鹿角中沒有檢出較多的多肽物質。醋酸纖維素薄膜電泳能夠準確檢測蛤蚧和其偽品的區別，聚丙烯酰胺凝膠電泳與醋酸纖維素膜電泳比較操作性不強，樣品處理操作較復雜。毛細管電泳和膠束毛細管電泳對甘草皂甙、麻黃堿、芍藥甙進行鑒別，對相關中成藥的成分進行準確定量分析。用等速電泳可鑒別不同蛇毒成分，蛇毒摻偽及不同產地的蛇毒均可采用電泳圖譜進行區分，但是新鮮毒液和毒液凍干粉無明顯差異。

1.6 聚類分析法隨著計算機科學和模糊數學技術不斷應用到中藥鑒定領域，聚類分析法也隨之產生。聚類分析法的最簡單形式為二維模型，以樣品的相似系數作為分類依據[9]。通過對麥冬多樣品測定其中鈣、鎂含量，通過建立二維平面模型，將被鑒別分為兩類大葉麥冬、麥冬。黃芪樣本的多個薄層色譜解析形成以數量化矩陣為代表，將正品和偽品加以區分。而主成分分析方法通過將測定結果以數學形式變換，以尋找主因子對檢測樣本進行鑒別。沉香可進行GLC分析，以色譜結果分析其每個樣品的主成分，并包括4類其檢測結果與多色譜方法的檢測結果一致。三層人工神經網絡可對非圖示識別，通過對蟾酥樣品的提取并建立三維圖形以區分樣品的分類。另外，聚類分析法還能反應中藥色譜鑒別、顯微鑒別、性狀鑒別、光譜鑒別的數量化特征，通過計算機進行決策分類。

1.7 X射線衍射法X射線衍射法通過對中藥材中單一成分的鑒定而被應用于中藥鑒別，該方法與圖譜鑒別方法比較具有重新性更好、指紋性更強、操作更簡便的特點。美國藥典已經把X射線衍射法列為鑒別藥品的方法，我國新藥審核也對一二類新藥進行X射線衍射譜[10]。在20世紀80年代X射線衍射法被應用在中藥鑒定中，只局限應用于定性識別中，另外結合材料科學的物相分析，通過衍射圖譜的歸屬以鑒別中藥。對信石、滑石、石膏、白礬的易混中藥粉末進行分析，該方法也被應用在牛黃清心丸的成分研究中，也能夠準確區分雄黃和朱砂的主要成分。也有學者采用X射線衍射法鑒別不同產地的淫羊藿中藥，并對其進行定量分析，系統通過建立道地中藥鑒定標準進行準確的定量識別。

1.8 生物效價測定法對于活性物質不明確的中藥，活性測定和生物效價的評價質量十分常用，臨床中對有抗菌效價、抗凝血活性、免疫作用、降壓物質、異常毒性等中藥材生物活性堿性檢測，可通過凝聚檢測法、溶血檢查法、過敏反應檢查法等[11]。例如可采用抗凝血酶活性檢測技術評價中藥水蛭的生物活性，可采用薄層自顯像技術以鑒別地黃，達到薄層色譜分離顯色的目的。另外，還可檢測供試品的抗氧化程度。生物熱動力學也可測定中藥生物效價以鑒別中藥，不同中藥在微生物生長代謝作用下顯示的熱動力學參數和熱功率譜圖大不相同，在板藍根鑒別中通過對大腸桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌等細菌進行觀察，以鑒別板藍根的真偽。

1.9 免疫鑒定在含有大量蛋白質的中藥材中，不同中藥所含的蛋白具有特異性，免疫鑒別可對動植物所含的特異性蛋白通過制備特異抗體進行鑒別，與樣品的特異抗原結合而產生沉淀以鑒別中藥的真偽。免疫鑒定技術適用于比較接近或存在親緣關系的動物藥的鑒別[12]。例如虎骨、豹骨可通過免疫電泳法和瓊脂免疫擴散法進行鑒定，并且能夠準確鑒定出樣品具體為金錢豹、雪豹、云豹的具體物種明細，說明免疫鑒定方法具有較強的特異性。

2 中藥鑒定的新技術

傳統中藥鑒定方法包括形狀、理化性質、顯微鑒別、來源分類等，隨著生物技術的不斷發展，逐漸完善了新的中藥鑒定方法[13]。在新的鑒定方法中不但能夠保證臨床用藥的安全性，還有利于推動中藥鑒定學的發展。中藥材的品種多種多樣，品種之間的形態和組織變化也成千上萬，并且均具有較為復雜的化學成分，由于中藥材的品種較多需要進行大規模系統分析才能進行準確運用和把握。隨著信息技術、計算機科學、網絡技術的不斷發展，中藥鑒定技術得以向信息化、系統化方向邁進[14]。分子生物學、核磁共振、紫外光譜、電泳分析、智能技術等技術均會被應用于中藥鑒別中。蛋白質組學、生物基因組學、代謝組學等多種生物技術的興起，有利于逐步建立從局部到整體的鑒別方法，以豐富當代鑒定思路，以正確的思路認識中藥質量。基于生物學的思路和方法聯合中藥整體模式開展的生物鑒定方法，可提高中藥材品質，使得中藥鑒別技術和內容不斷豐富，形成能夠適應國際發展的中藥鑒定體系。

3 小結

中藥材鑒定方法的研究為了鑒別中藥的真偽和優劣，傳統中藥鑒定方法通過來源分析、理化鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別。隨著科學理論、理化技術、計算機科學、生物學等多學科不斷發展交流，使中藥鑒定方法更加系統和完善[15]。現代中藥鑒定方法包括紫外光譜色譜分析、電腦圖像分析、遺傳學標記鑒別、電泳鑒別、聚類分析法、X射線衍射法、生物效價測定法等。建議在中藥鑒定技術發展時可與傳統鑒定技術相結合，使鑒定技術獲得更合理的發展，有利于逐步建立從局部到整體的鑒別方法，以豐富當代鑒定思路、保證中藥材的臨床應用，以造福廣大患者。