sB7-H3、LDH、TGF-β1在肺炎支原體肺炎患兒中的表述水平及其與病情嚴重程度的相關性研究

彭敏 魏婷婷

【關鍵詞】 肺炎支原體肺炎 可溶性B7-H3 乳酸脫氫酶 轉化生長因子-β1

[Abstract] Objective： To investigate the levels of soluble B7-H3 （sB7-H3）， lactate dehydrogenase （LDH） and transforming growth factor-β1 （TGF-β1） in children with mycoplasma pneumoniae pneumonia and their correlation with the severity of the disease. Method： A total of 120 children with mycoplasma pneumoniae pneumonia admitted to our hospital from April 2019 to October 2020 were selected as the mycoplasma pneumoniae pneumonia group， and 80 healthy children who underwent physical examination in our hospital during the same period were selected as the healthy control group. The venous blood of all subjects were extracted and the levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 were determined. The expression levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 in children with mycoplasma pneumoniae pneumonia and their correlation with disease severity were analyzed. Result： The levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 in mycoplasma pneumoniae pneumonia group were higher than those in healthy control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 in children with acute mycoplasma pneumoniae pneumonia were higher than those in the remission stage， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of sB7-H3， LDH and TGF-β1 in children with severe mycoplasma pneumoniae pneumonia were higher than those in children with mild cases， the differences were statistically significant （P<0.05）. Spearman correlation analysis showed that sB7-H3， LDH and TGF-β1 were positively correlated with disease severity （P<0.05）. Conclusion： sB7-H3， LDH and TGF-β1 are all highly expressed in mycoplasma pneumoniae pneumonia， and are positively correlated with the severity of the disease， which are involved in the progression of the disease.

[Key words] Mycoplasma pneumoniae pneumonia Soluble B7-H3 Lactate dehydrogenase Transforming growth factor-β1

First-author’s address： Hunan Maternal and Child Health Hospital， Changsha 410000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.18.008

肺炎支原體屬于在兒童社區獲得性肺炎中較為常見的病原菌，研究發現，當肺炎支原體進入患兒機體內，會吸附在患兒呼吸道上皮細胞表層，與局部組織形成免疫復合物，進而誘發呼吸道病變，影響患兒生長發育[1]。肺炎支原體肺炎多發于兒童，與成年患者相比，此類患者多表現為肺外臟器受累，較易轉變為難治性毛細支氣管肺炎、慢性支氣管肺炎，嚴重威脅著患兒的身心健康[2]。雖然目前已有研究顯示，肺炎支原體肺炎的發生是多種因素共同作用的結果[3]，但關于此病發生發展的具體機制尚不完全明確，多數研究認為，多種細胞因子表達異常與肺炎支原體肺炎的發生發展相關?；谏鲜鲅芯?，本文分析了可溶性B7-H3（sB7-H3）、乳酸脫氫酶（LDH）、轉化生長因子-β1（TGF-β1）在肺炎支原體肺炎患者中的水平，并進一步觀察上述因子表達水平與患者病情嚴重程度的相關性，以明確sB7-H3、LDH、TGF-β1與肺炎支原體肺炎的關系，為臨床上此病的診治提供參考?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年4月-2020年10月本院收治的肺炎支原體肺炎患兒120例為肺炎支原體肺炎組，同期選取于本院行健康體檢的健康兒童80例為健康對照組。（1）納入標準：肺炎支原體肺炎組患兒符合第7版《諸福棠實用兒科學》中對肺炎支原體肺炎的診斷標準[4]。急性期診斷標準為患兒病程在10 d內，CRP、白細胞總數輕度升高，血清MP-IgM抗體陽性，影像學顯示患兒肺門影增大、雙肺紋理粗;恢復期診斷標準為患兒胸部影像學檢查異常癥狀消失或者減輕，咳痰、咳嗽、肺部體征消失或者減輕，體溫正常2周以上。輕癥標準為①持續劇烈咳嗽，X線所見遠較體征為顯著;②白細胞數大多正?；蛏栽龈?，血沉多增快;③血清支原體抗體檢測陽性：肺炎支原體抗體IgM、IgG抗體陽性;④支原體半定量檢測1︰160及以上。重癥符合以下至少一條，①影像學檢查顯示患兒存在雙側或者單側大片狀、高密度實變影、存在大量積液、甚至出現壞死性肺炎、彌漫性肺炎表現;②使用大環內酯類抗生素連續治療1周后仍存在發熱、咳嗽、癥狀加重;③出現較為嚴重的中樞神經系統癥狀、低氧血癥、腎衰竭、消化道出血、心肌炎等癥狀。健康對照組兒童無呼吸道急慢性疾病、肺部疾病史，身體健康。（2）排除標準：合并支氣管擴張、肺結核等其他肺部疾病;急性感染病史;近兩周使用糖皮質激素;心、肝、腎功能不全;先天性疾病;癲癇、腦部疾病?；純杭覍倬?，且簽署了知情同意書，研究經醫院倫理學委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 清晨抽取所有患兒空腹靜脈血3 mL，以離心半徑5 cm、轉速3 000 r/min離心處理10 min，分離上層血清，-80 ℃保存待檢。

1.2.2 sB7-H3、LDH、TGF-β1水平檢測 使用全自動生化分析儀（博萬達生物科技有限公司）對所有研究對象的LDH水平進行檢測，參考值為80～245 IU/L。采用ELISA法檢測血清sB7-H3、TGF-β1水平，將上層血清樣本置于室溫后，取出試劑盒，標記酶標板，制作標準品，以1︰2的稀釋液稀釋樣品;在反應孔上依次加入稀釋好的待測血清及標準品100 μL/孔，放置37 ℃恒溫孵育箱中濕育2 h;用專用洗滌液將反應板清洗3次后，加入抗體工作液（1︰100倍稀釋后）100 μL/孔，置于37 ℃恒溫孵育箱中濕育45 min;繼續清洗反應板4次后，在反應孔內加入TMB溶液100 μL/孔，置于37 ℃恒溫孵育箱中濕育45 min后將終止液100 μL加入每反應孔內，在450 nm波長測定吸光度，顏色反應深淺與sB7-H3、TGF-β1水平成正比，經繪制標準曲線計算sB7-H3、TGF-β1水平。

1.3 觀察指標 比較健康對照組與肺炎支原體肺炎組sB7-H3、LDH、TGF-β1水平;比較不同發病期及不同疾病嚴重程度肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平。分析sB7-H3、LDH、TGF-β1與肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴重程度的相關性。

1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。相關性采用Spearman相關性分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 肺炎支原體肺炎組男68例，女52例;年齡3～8歲，平均（5.5±2.0）歲;緩解期74例，急性期46例;輕癥95例，重癥25例。健康對照組男45例，女35例;年齡3～8.5歲，平均（5.8±2.2）歲。兩組性別、年齡比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 健康對照組與肺炎支原體肺炎組sB7-H3、LDH、TGF-β1水平比較 肺炎支原體肺炎組患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平均高于健康對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.3 不同發病期肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平比較 急性期肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平均高于緩解期患兒，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.4 不同疾病嚴重程度肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平比較 重癥肺炎支原體肺炎患兒sB7-H3、LDH、TGF-β1水平均高于輕癥患兒，差異均有統計學意義（P<0.05），見表3。

2.5 sB7-H3、LDH、TGF-β1與肺炎支原體肺炎患兒疾病嚴重程度的關系 Spearman相關性分析結果顯示，sB7-H3、LDH、TGF-β1均與患兒疾病嚴重程度呈正相關（P<0.05），見表4。

3 討論

肺炎支原體肺炎屬于比較常見的呼吸內科疾病之一，其臨床特征是劇烈咳嗽、發熱、血沉增快、CRP升高、胸片顯示單側實變等，雖然肺炎支原體感染多屬于良性自限性疾病，但若不診治則會發展為難治性或者重癥疾病，嚴重威脅著患兒的生命安全[5-6]。目前對于肺炎支原體肺炎的發病機制還未完全明確，因此探究此病的發病機制對臨床診治具有重要意義。

B7-H3為B7共刺激分子家族的成員之一，具有調節T細胞功能的作用，一方面可誘導T細胞在靜息期分泌，另一方面可抑制活化T細胞的分泌和機體免疫應答反應[7]。隨著對B7-H3的研究，發現其存在兩種表達形式，即膜型（mB7-H3）和可溶性（sB7-H3）兩種，其中mB7-H3表達形式均在活化的T細胞、單核細胞、樹突狀細胞、多種腫瘤細胞中存在，而sB7-H3主要來源于活化的T細胞、單核細胞、樹突狀細胞上的mB7-H3，與機體免疫調控相關[8-9]。臨床研究發現，sB7-H3正性調節T細胞，表現為抑制Th1/Th2細胞分化，抑制IFN-γ等多種細胞因子分泌[10]。當機體被肺炎支原體感染后，sB7-H3水平異常升高，經治療后其水平明顯降低，與疾病嚴重程度正相關[11]。本研究分析了sB7-H3在肺炎支原體肺炎患兒中的表達，結果顯示，sB7-H3在肺炎支原體肺炎患兒中呈高表達，且處于急性期、重癥患兒sB7-H3水平均顯著升高，提示sB7-H3在肺炎支原體肺炎中高表達，且與患兒疾病嚴重程度相關。

氧自由基、炎性因子等會在肺炎支原體肺炎疾病發生發展中刺激患兒，損傷肺細胞，進而誘導一系列的心肌酶產生，最終損傷心肌細胞，另一方面，心肌細胞會受到支原體自身毒素的刺激，進而誘導心肌酶的產生[12]。LDH屬于糖酵解酶，能夠促進乳酸分泌，心肌細胞損傷后，LDH釋放至血液中，進而增加其濃度[13]。臨床上多應用LDH水平高低評價疾病嚴重程度和預后情況，研究發現，肺炎支原體肺炎的發生發展同時多伴隨著較為劇烈的免疫反應，并且機體多種器官和肺炎支原體間均存在相同的抗原，肺炎支原體感染機體后，機體會形成與之相應的自身抗體，進而產生免疫復合物，激發免疫反應，引發組織損傷，導致LDH濃度升高[14-15]。鄧黎明等[16]研究發現，重癥支原體肺炎患兒血清LDH水平顯著升高，且經治療后其水平降低，其研究結果提示LDH水平高低與重癥支原體肺炎患兒疾病嚴重程度相關，隨著疾病加重，其表達水平升高。本研究分析了LDH在肺炎支原體肺炎患兒中的表達，結果顯示，LDH在肺炎支原體肺炎患兒中高表達，且處于急性期、重癥患兒LDH水平均顯著升高，提示LDH在肺炎支原體肺炎中高表達，且與患兒疾病嚴重程度相關。

TGF-β1是生物學功能較多的細胞因子之一，同時擁有較強的免疫調節功能[17]。臨床研究發現，TGF-β1在激發炎癥反應、組織修復、細胞生長、分化、免疫功能調節等方面具有重要作用，可刺激間充質起源細胞，抑制上皮或者神經外胚層來源細胞[18]。局部TGF-β1可聚集并激活白細胞，從而推動炎癥反應進展，而全身TGF-β1可抑制初始T細胞分化為Th1/Th2過程，起到免疫抑制作用，影響機體免疫功能[19]。目前TGF-β1已經被證實為免疫細胞因子，一方面可誘導Treg細胞產生，另一方面可抑制效應T細胞功能，不僅具有抑制免疫炎癥反應的作用，還可與炎癥反應相關[20]。當機體被肺炎支原體感染后，TGF-β1表達顯著升高，可調節過敏性氣道炎癥和膠原蛋白在氣道的沉積，進而導致氣道纖維化，促進疾病進展[21]。本研究分析了TGF-β1在肺炎支原體肺炎患兒中的表達，結果顯示，TGF-β1在肺炎支原體肺炎患兒中高表達，且處于急性期、重癥患兒TGF-β1水平均顯著升高，提示TGF-β1在肺炎支原體肺炎中高表達，且與患兒疾病嚴重程度相關。

綜上所述，sB7-H3、LDH、TGF-β1在肺炎支原體肺炎中高表達，且與患兒疾病嚴重程度呈正相關，參與此病的進展。

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（收稿日期：2021-05-14） （本文編輯：姬思雨）