中藥白芷的活性成分歐前胡素對卵巢癌細胞增殖及凋亡的影響

曾丹，范燕燕，袁建暉，汪利群

（江西省婦幼保健院，江西 南昌 330006）

卵巢癌是發生于卵巢的惡性腫瘤疾病，早期無明顯特征，不易發現，且卵巢位于盆腔中，體積較小，難以發現，若不及時給予治療，大多數癌細胞會擴散至盆腹腔器官[1]。而臨床治療主要以手術綜合治療為主，但缺乏有效的治療藥物，且治療后復發率較高，預后較差，具有較高的病死率，是臨床常見的惡性腫瘤之一，其發病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌，且以上皮癌最常見，其次是惡性生殖細胞腫瘤，嚴重威脅女性生命安全[2]。癌癥治療常用藥物生長抑素是一種環狀多肽類激素，對多種疾病的發展、防治有重要意義，而奧曲肽為生長抑素八肽衍生物，其作用與生長抑素相似，但持續時間更長，主要作用肝癌、胃癌等病癥的輔助治療[3]。本研究采用MTT技術檢測歐前胡素對卵巢癌細胞株增殖的影響；采用流式細胞技術檢測有效濃度范圍的奧曲肽對卵巢癌細胞株凋亡的影響，對中藥白芷的活性成分歐前胡素對卵巢癌細胞增殖、凋亡的影響進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019 年1 月至2020 年4 月本院實驗室保存的卵巢癌細胞60 例，樣本來源均為女性，年齡35～72歲，平均年齡（42.65±3.22）歲，分為實驗組和對照組，各30例。實驗組根據不同濃度歐前胡素的干預下細胞的增殖及凋亡機制，設置濃度為1.560 mg/L（實驗1 組）、3.125 mg/L（實驗 2 組）、6.250 mg/L（實驗 3 組）、12.550 mg/L（實驗 4組）、25.250 mg/L（實驗 5 組）、40.500 mg/L（實驗 6 組），對照組為空白對照組。

1.2 方法 MTT 法檢測細胞增殖：于96 孔板中接種卵巢癌細胞，培養箱中培養，各組分別加入不同濃度的歐前胡素干預（1.560、3.125、6.250、12.550、25.250、40.500 mg/L），并設置空白對照孔。保持溫度37 ℃，在體積分數為5%的CO2環境中培養24 h 后，每孔經20 μL MTT 液培養，4 h 后去液，加入二甲基亞砜每孔150 μL，平板離心機10 min。以酶標儀測定490mm波長的吸光度（OD）值，記錄相關數據。增殖抑制率=（對照組平均OD 值-實驗組平均OD 值）/對照組平均OD值×100%。

流式細胞儀檢測細胞凋亡：于6孔板中接種細胞，不同濃度歐前胡素干預24 h后，用0.25%胰酶消化細胞5 min，1 500 rmp離心 3 min 左右，經 PBS 洗滌 3 次，收集細胞于 1.5 mL EP 管中 ，3 500 rpm 離心 5 min 左右 ，加入 200 μL 的 PBS 懸浮細胞。在渦旋震蕩時觀察組滴加70%乙醇，共1 mL，震蕩搖勻后保持于 4 ℃，3 500 rmp 離心 5 min，洗滌 2 次，之后上流式分析儀檢測，1、2、3 h 內檢測細胞凋亡情況，取平均值，記錄相關數據。

1.3 觀察指標 觀察歐前胡素對卵巢癌細胞的增殖抑制效果及歐前胡素對卵巢癌細胞凋亡效果。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據分析，符合正態分布的計量資料用“”表示，比較采用t檢驗；計數資料采用率（%）表示，比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 歐前胡素對卵巢癌細胞的增殖抑制效果 MTT檢測結果顯示，歐前胡素對卵巢癌細胞增殖的作用與劑量相關，且隨歐前胡素濃度升高，對卵巢癌細胞增殖抑制效果也隨之升高，見表1。

表1 歐前胡素對卵巢癌細胞的增殖抑制效果

2.2 歐前胡素對卵巢癌細胞凋亡效果 流式細胞儀檢測結果顯示，不同濃度歐前胡素對卵巢癌細胞處理24 h后凋亡比率高于對照組，且隨著歐前胡素濃度的增加卵巢癌細胞凋亡率隨之升高，見表2。

表2 歐前胡素對卵巢癌細胞凋亡效果

3 討論

卵巢惡性腫瘤是臨床常見的女性生殖器官的惡性腫瘤之一，其發病機制尚不明確，但可能與患者遺傳、內分泌等因素有關，其病癥分為卵巢上皮癌和卵巢惡性生殖細胞腫瘤，前者最常見，常表現為腹痛、消瘦，后者于早期出現腹部包塊、腹脹等[4]。且卵巢惡性腫瘤發生率僅次于宮頸癌與宮體癌，具有較高的病死率，位于各類婦科腫瘤首位，嚴重威脅女性患者的生命安全。臨床常給予患者化療、手術、藥物于一體的綜合治療，但尚未有顯著的治療措施。而近年來隨著臨床惡性腫瘤的發病率升高，積極尋求抗癌腫瘤活性成分藥物至關重要[5]。歐前胡素具有明顯是抗腫瘤作用，可誘導腫瘤細胞死亡，繼而引起下游凋亡基因級聯反應，效果顯著。中藥白芷中的主要成分為脂溶性香豆素類，主要有氧化前胡素、歐前胡素、異歐前胡素，同時，還有白當歸素、白當歸腦等，各類有效成分對各類病癥均有顯著作用，如佛手柑內酯、水合氧化前胡素和白當歸素被證實具有抗炎鎮痛作用；呋喃香豆素被證實有清除氧化自由基的功效；獨活醇對枯草桿菌，阿魏酸和白當歸素對臘葉芽枝酶有明顯的抗菌作用，臨床應用效果顯著。而歐前胡素，具有抗菌、平喘、抗敏等作用，在多種內分泌、外分泌激素的分泌中有重要作用，可通過靶細胞膜上的生長抑素受體介導，其中亞型2 的作用最重要，且可通過生長抑素受體抑制腫瘤細胞增殖，從而誘導細胞凋亡[6]。而歐前胡素極性小，不溶于水，易溶于極性小的有機溶劑，具有多種生理活性，可作用于患者垂體腺瘤、肝癌等病癥，效果顯著[7]。

近年來，隨臨床醫學發展，發現腫瘤的發生與發展受多基因調控，與腫瘤細胞的凋亡有密切關系，隨著臨床對歐前胡素的研究，發現其對腫瘤細胞的凋亡有重要作用[8]。而凋亡細胞的數目的變化與DNA 電泳可在一定范圍內反映細胞的凋亡情況。本研究結果顯示，歐前胡素對卵巢癌細胞增殖抑制效果顯著，可促使癌細胞凋亡，且歐前胡素濃度越高，藥物機制作用越顯著，同時，還可誘導患者癌細胞凋亡，其濃度與凋亡率成正相關，而歐前胡素對亞型2 有極強的親和力，是治療患者癌癥的有效治療藥物，可使患者腫瘤明顯縮小，抑制腫瘤細胞生長，誘導細胞凋亡。因此，采用該藥物治療，對患者癌細胞控制效果顯著。

綜上所述，中藥白芷的活性成分歐前胡素可有效遏制卵巢癌腫瘤細胞的增殖，并誘導癌細胞凋亡，可針對患者癌細胞進行調控，效果顯著，值得臨床推廣應用。但臨床相似研究證明較少，未來應加大臨床研究力度，進一步明確中藥白芷的活性成分歐前胡素對卵巢癌腫瘤細胞的增殖與凋亡的影響，為臨床治療提供可靠依據。