腦梗死急性期患者血清let-7f表達與病情和神經功能缺損程度的相關性研究

劉新寧

（遼寧省阜新市第二人民醫院（阜新市婦產醫院），遼寧 阜新 123000）

急性腦梗死是一種最常見的自發性神經系統疾病，是由單一或多種大腦供血中斷引起的，通常由動脈粥樣硬化性狹窄、血栓性栓塞引起[1-2]。根據梗死灶的位置、數目和大小可能出現不同癥狀和結果。約有1/3 的急性腦梗死患者會出現不同程度神經功能缺損，影響患者預后[3]。早期恢復缺血部位腦組織血液供應對急性腦梗死患者的治療具有重要意義。目前腦梗死3 h后，通過頭部CT或MRI能排除急性神經功能障礙的其他原因，但診斷相對滯后[4]。尋找一種早期診斷急性腦梗死的生物標志物成為目前腦梗死研究的熱點。基于此，本研究以157例腦梗死急性期患者及50名健康體檢者作為研究對象，旨在探討腦梗死急性期患者血清let-7f表達水平與病情和神經功能缺損程度的相關性研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年5月至2019年5月本院神經內科收治的157 例腦梗死急性期患者作為病例組，其中男81例，女76 例；年齡45～82 歲，平均年齡（63.24±9.48）歲；發病時間1～62 h，平均發病時間（25.57±3.29）h。另選取本院健康體檢者50名作為正常組，其中男27名，女23名，年齡46～82歲，平均年齡（64.08±9.16）歲；發病時間1～62 h，平均發病時間（26.23±3.49）h。兩組臨床資料比較差異無統計學意義，具有可比性。納入標準：①首次發病，在發病24 h內到本院就診；②年齡＞45歲；③頭部CT或MRI證實為急性腦梗死[5]；④患者及家屬對本研究知情同意并簽署知情同意書。排除標準：①近期（3個月內）無抗炎和免疫抑制劑藥物服用史；②腦出血、血液病或腫瘤引起的出血；③患有嚴重肝、腎、心疾病及近期做過大手術患者；④昏迷患者。

1.2 方法[6]病例組入院后立即抽取靜脈血3 mL，正常組抽取清晨靜脈血3 mL，2 000 r/min 離心10 min 分離血清后-80 ℃保存備用；取出加有TRIzol的全血，根據RNA提取試劑盒（美國Life Technologies公司）操作說明書進行總RNA提取，反轉錄試劑盒（美國ABI 公司）說明在37 ℃60 min，95 ℃5 min 的逆轉錄條件下合成cDNA。根據SYBR Premix Ex Taq TM II熒光定量PCR試劑盒（上海生工生物工程有限公司）說明進行PCR 擴增，擴增條件為95 ℃預加熱15 min，1個循環；94 ℃ 15 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 34 s，40 個循環。miR-let-7f 引物序列：上游引物為5'-UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG-3'，下游引物為：5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3'；GAPDH引物序列：上游引物為5'-TCCCATCACCATCTTCCAG-3，下游引物為：5'- GGTATCCATCGCCATGCTC -3’。用實時熒光定量PCR儀檢測對其表達量進行結果分析，以GADPH作為內參，采用 2-△△Ct法計算mRNA的相對表達量。

1.3 觀察指標 探討各組血清let-7f與病情惡化、神經功能缺損程度及病梗死灶面積的關系。

1.4 統計學方法 采用SPSS 23.0統計軟件進行數據分析，計量資料以“”表示，多組間比較采用方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清let-7f 與病情惡化的關系 根據病例組病情惡化情況分為好轉組（n=49）、穩定組（n=50）以及惡化組（n=58）；病例組血清let-7f 表達水平較正常組明顯升高，且隨著病情不斷的惡化其水平也不斷升高（P＜0.05），見表1。

表1 各組血清let-7f與病情惡化的關系（，μg/L）Table 1 Relationship between serum let-7f and disease deterioration in each group(,μg/L)

表1 各組血清let-7f與病情惡化的關系（，μg/L）Table 1 Relationship between serum let-7f and disease deterioration in each group(,μg/L)

注：與正常組比較，aP＜0.05；與好轉組比較，bP＜0.05；與穩定組比較，cP＜0.05

0.74±0.22a 0.35±0.11a 0.15±0.05abc 12.234＜0.001組別正常組病例組好轉組穩定組惡化組F值P值例數50 157 49 50 58 let-7f 1.08±0.33

2.2 各組血清let-7f 與神經功能缺損程度的關系 根據病例組神經功能缺損程度分為輕度缺損組（n=66）、中度缺損組（n=53）及重度缺損組（n=38）；病例組血清let-7f 表達水平較正常組明顯升高，且隨著神經功能缺損程度的加重其表達水平也不斷升高（P＜0.05），見表2。

表2 各組血清let-7f與神經功能缺損程度的關系（，μg/L）Table 2 Relationship between serum let-7f and neurological deficit in each group(,μg/L)

表2 各組血清let-7f與神經功能缺損程度的關系（，μg/L）Table 2 Relationship between serum let-7f and neurological deficit in each group(,μg/L)

注：與正常組比較，aP＜0.05；與輕度缺損組比較，bP＜0.05；與中度缺損組比較，cP＜0.05

0.75±0.21a 0.38±0.12ab 0.16±0.05abc 15.245＜0.001正常組病例組輕度缺損組中度缺損組重度缺損組F值P值50 157 66 53 38 1.08±0.33組別 例數let-7f

2.3 各組血清let-7f 與病梗死灶面積的關系 根據病例組病梗死灶面積大小分為小面積梗死灶組（n=57）、中等面積梗死灶組（n=49）及大面積梗死灶組（n=51）；病例組血清let-7f 表達水平較正常組明顯升高，且隨著病梗死灶面積的不斷增加其表達水平也在不斷增加（P＜0.05），見表3。

表3 各組血清let-7f與病梗死灶面積的關系（，μg/L）Table 3 Relationship between serum let-7f and infarct size in each group(,μg/L)

表3 各組血清let-7f與病梗死灶面積的關系（，μg/L）Table 3 Relationship between serum let-7f and infarct size in each group(,μg/L)

注：與正常組比較，aP＜0.05；與小面積梗死灶組比較，bP＜0.05；與中等面積梗死灶組比較，cP＜0.05

0.80±0.23a 0.39±0.13ab 0.10±0.03abc 18.742＜0.001組別正常組病例組小面積梗死灶組中等面積梗死灶組大面積梗死灶組F值P值例數50 157 57 49 51 let-7f 1.08±0.33

3 討論

急性腦梗死是影響人類健康的最常見疾病之一，是導致死亡的第二大原因，也是中國第一大急性腦梗死原因[6-7]。急性腦梗死導致大腦缺氧，進而導致缺血性中風和腦組織破壞。急性腦梗死導致中國死亡率上升（每年超過100萬人），大多數患者患有偏癱[8-9]。增加的膽固醇沉積和動脈粥樣硬化是急性腦梗死的特征，目前可用的治療方法只能降低癥狀的強度。急性腦梗死引起神經細胞壞死等損傷，目前的治療無法恢復。而生物標記物是一種有助于評估疾病風險、疾病診斷甚至是治療方法和預后療效的臨床指標，且急性腦梗死在臨床上應用的生物標記物并不完善[10]。

本研究結果顯示，病例組血清let-7f 表達水平較正常組明顯升高（P＜0.05），且隨著病情不斷惡化、神經功能缺損程度加重或梗死灶面積不斷增加其表達水平也不斷升高（P＜0.05）。分析原因為，let-7f 作為一種特異性的神經元蛋白產物，其在神經元中高度表達，有研究結果顯示，其在血-腦屏障及細胞膜損傷后可輕易通過，且神經元損傷后也可釋放[11]；同時，可在血液中保持穩定，方便檢測。除上述原因外，血清let-7f 也參與細胞凋亡等病理過程，且起不可或缺的重要作用，與各類型神經退行性疾病密切相關[12]。

綜上所述，血清let-7f 表達水平在腦梗死急性期患者體內變化明顯，與病情和神經功能缺損程度密切相關，是一種可用于輔助診斷和治療腦梗死急性期的指標，值得臨床推廣應用。