飼料級雞肉粉對黃鱔生長、消化酶及血清生化指標的影響

曹曉莉，胡 毅，胡亞軍，陳開健

(湖南農業大學 動物科學技術學院，湖南省特色水產資源利用工程技術研究中心，湖南 長沙 410128)

蛋白質是決定魚類生長速度的關鍵因素，也是在飼料成本中占比最大的部分，尤其肉食性魚類對蛋白質的需求相對較高[1]。雞肉粉是由產蛋下架雞及白條雞分割出胸肉以后的剩余部分經加工而成的，其具有供應穩定，價格低廉，不含抗營養因子，粗蛋白(65%～73%)和粗脂肪(9.0%～10.2%)含量略高于魚粉，氨基酸平衡較好，生物轉化率高等優點[2]，是水產動物飼料中的優質蛋白源。目前，由于原料以及加工工藝的不同，一般將雞肉粉分為寵物級雞肉粉和飼料級雞肉粉[3]。有研究表明，雞肉粉可適量替代卵形鯧鲹(Trachinotusovatus)[4]、黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)幼魚[5]、大菱鲆(Scophthalmusmaximus)[6]、軍曹魚(Rachycentroncanadum)[7-8]、凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)[9]、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[10]等飼料中的魚粉而不影響生長性能和飼料的利用效果，最佳替代比例分別為20%、20.84%、20%、60%、50%～100%、59%。

黃鱔(Monopterusalbus)為雜食偏肉食性魚類，蛋白質需求量約為40%～45%，是我國名特優水產養殖品種之一，具有較高的營養價值，深受消費者的喜愛[11]。目前，針對黃鱔飼料中魚粉替代蛋白源的研究主要集中在不同大豆種類[12]、蠶蛹[13]和肉骨粉[14]等方面，關于飼料級雞肉粉的研究較少。筆者以黃鱔為試驗對象，通過試驗以飼料級雞肉粉替代不同比例魚粉對黃鱔生長、腸道消化酶和血清生理生化指標的影響，探索飼料級雞肉粉替代魚粉的最佳比例，為飼料級雞肉粉在黃鱔飼料中的應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

依據黃鱔商品飼料組成，配制基礎飼料，以飼料級雞肉粉(由美國動物蛋白及油脂提煉協會提供)分別替代黃鱔飼料中0、15%、30%、45%、60%的魚粉，設置成魚粉組(對照組)、15%替代組、30%替代組、45%替代組和60%替代組，共5組等氮等脂的試驗飼料，魚粉和雞肉粉營養成分見表1，試驗飼料組成及營養水平見表2。先將飼料原料粉碎過80目篩，之后準確稱取各飼料原料，并從小到大依次均勻混合，最終將飼料自然風干至水分含量低于10%，-20 ℃保存備用，在投喂前加20%的水調成面團狀。

表1 魚粉和飼料級雞肉粉營養成分 %Tab.1 Nutritional composition of fish meal (FM) and feed grade poultry by-product meal (F-PBM)

表2 飼料組成及營養成分 %Tab.2 Ingredient and proximate nutritional composition of the experimental diets

1.2 養殖管理

養殖試驗在湖南常德市西湖管理區養殖基地進行。試驗所用網箱為1.5 m×2.0 m×1.5 m的無結節聚乙烯網箱，網箱內水花生(Alternantheraphiloxeroides)覆蓋水面90%以上。在養殖試驗正式開始前先進行馴化，首次少量投喂質量比為1∶1的蚯蚓和鮮魚漿，依照攝食情況逐漸增大投喂量和鮮魚漿的投喂比例，直至黃鱔完全攝食鮮魚漿后開始投喂質量比為4∶1的鮮魚漿和試驗飼料的混合物，并依攝食情況調整投喂比例，至黃鱔完全攝食試驗飼料。馴化結束后，禁食24 h，挑選體質量為(26.67±0.05) g的健康野生黃鱔，隨機分為5個處理組，每組3個平行，每個網箱放置60尾黃鱔。試驗期間，每日投喂1次(17:30—18:30)，每周調整1次投喂量(黃鱔體質量的3%～5%)，養殖試驗周期為56 d。

1.3 樣品采集與指標測定

1.3.1 生長性能指標

養殖試驗開始時和結束后稱量每個網箱黃鱔總質量，并記錄總尾數，再從每個網箱中隨機選取5尾黃鱔，測定體長、體質量以及內臟和肝臟質量，用于計算飼料系數(RFC)、成活率(RS)、質量增加率(wWGR)、肝體比(wHSI)、臟體比(wVSI)和肥滿度(CF)：

wWGR= (mt-m0)/m0×100%

RS=Nt/N0×100%

RFC=mF/(mt-m0)

wHIS=mh/mk×100%

wVSI=mv/mk×100%

CF=100mk/L3

式中，mt為末均質量(g)；m0為初均質量(g)；Nt為終末尾數；N0為初始尾數；mF為飼料攝入量(g)；mh為肝臟質重(g)；mk為體質量(g)；mv為內臟質量(g)；L為體長(cm)。

1.3.2 全魚體成分

養殖試驗結束后禁食24 h，每個網箱中隨機選取5尾黃鱔置于-20 ℃保存，用于全魚體成分分析。水分含量采用105 ℃烘箱干燥恒定質量法測定；粗蛋白含量采用凱氏定氮法測定；粗脂肪采用索氏抽提法測定，提取試劑為乙醚；粗灰分采用550 ℃灼燒法測定。

1.3.3 腸道消化酶活性

養殖試驗結束后禁食24 h，每個網箱隨機取5尾黃鱔，解剖取整個腸道，去除內容物，并用冰生理鹽水清洗腸道，濾紙吸干，置于-80 ℃冰箱保存備用。檢測前將腸道剪碎，準確稱量質量并于冰水浴條件下勻漿，4 ℃，3000 r/min離心10 min，取上清液，依據南京建成生物工程研究所試劑盒操作要求測定腸道淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性。淀粉酶活性單位定義為：組織中每毫克蛋白在37 ℃與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個酶活性單位(U)；胰蛋白酶活性單位定義為：在pH 8.0，37 ℃條件下，每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003即為1個酶活性單位(U)；脂肪酶活性單位定義為：每毫克蛋白質在37 ℃條件下，每分鐘水解甘油三酯生成1 μmol脂肪酸定義為1個酶活性單位(U)。

1.3.4 血清生化指標

養殖試驗結束后禁食24 h，每個網箱隨機取5尾黃鱔，用1 mL注射器在尾靜脈處采血，置于2 mL無菌離心管中，4 ℃靜置過夜后，3500 r/min離心10 min，取上清液分裝于0.5 mL離心管中，于-80 ℃保存備用。葡萄糖、白蛋白、尿素氮、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定。補體3及補體4采用浙江伊利康生物技術有限公司試劑盒測定。

1.4 統計分析

試驗數據以平均值±標準誤表示，采用SPSS 20.0軟件進行單因素方差統計分析，若組間差異顯著水平P<0.05，則進行Duncan氏多重比較顯著性分析。

2 結 果

2.1 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔生長性能的影響

各組間黃鱔成活率無顯著性差異(P>0.05)。隨著雞肉粉替代比例的升高，飼料系數呈上升趨勢且均無顯著性差異(P>0.05)，質量增加率呈下降趨勢，60%替代組的質量增加率最低(P<0.05)(表3)。

表3 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔生長性能的影響Tab.3 Effects of FM replacement by F-PBM on growth performance of rice field eel M.albus

2.2 雞肉粉替代魚粉對黃鱔體指標的影響

相較于魚粉組，15%替代組和30%替代組的肝體比與其相近，而45%替代組較低，60%替代組較高，但均無顯著性差異(P>0.05)，各組間的臟體比和肥滿度也無顯著性差異(P>0.05)(表4)。

表4 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔體指標的影響Tab.4 Effects of FM replacement by F-PBM on body indices of rice field eel M.albus

2.3 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔體成分的影響

飼料級雞肉粉替代不同比例魚粉對黃鱔全魚水分、粗蛋白和粗灰分含量均無顯著性影響(P>0.05)。當替代比例為45%和60%時，黃鱔全魚粗脂肪含量顯著高于魚粉組 (P<0.05)(表5)。

表5 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔全魚體成分的影響 %Tab.5 Effects of FM replacement by F-PBM on body composition of rice field eel M.albus

2.4 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔腸道消化酶活力的影響

與魚粉組相比，腸道淀粉酶活力和胰蛋白酶活力無顯著性差異(P>0.05)。30%替代組和60%替代組脂肪酶活力顯著低于魚粉組和45%替代組(P<0.05)，15%替代組和45%替代組與魚粉組無顯著性差異(P>0.05)(表6)。

表6 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔腸道消化酶活性的影響Tab.6 Effects of FM replacement by F-PBM on digestive enzyme activities in intestine of rice field eel M.albus

2.5 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔血清生化指標的影響

隨著替代比例升高，血清甘油三酯含量呈上升趨勢，且替代比例為45%和60%時顯著高于魚粉組(P<0.05)。30%替代組和45%替代組的低密度脂蛋白顯著高于魚粉組(P<0.05)。15%替代組、30%替代組谷丙轉氨酶活性和60%替代組的谷草轉氨酶活性顯著高于魚粉組(P<0.05)。當替代比例超過30%，血清補體3與補體4含量呈上升趨勢且顯著高于魚粉組(P<0.05)。各組白蛋白含量無顯著性差異(P>0.05)(表7)。

表7 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔血清生化指標的影響Tab.7 Effects of FM replacement by F- PBM on serum biochemical indices of rice field eel M.albus

3 討 論

3.1 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔生長及消化酶活性的影響

本試驗結果表明，隨著雞肉粉替代魚粉比例升高，黃鱔生長性能呈下降趨勢。與魚粉組相比，各試驗組黃鱔全魚水分、粗蛋白、粗灰分、肝體比、臟體比和肥滿度均無顯著性差異，45%替代組和60%替代組的全魚粗脂肪顯著高于魚粉組，表明高比例飼料級雞肉粉替代魚粉會降低黃鱔的生長性能，影響魚體脂肪沉積，這與在大菱鲆[6]、凡納濱對蝦[9]、草魚[15]、黃顙魚[16]中的研究結果相似。飼料級雞肉粉替代魚粉限制魚類生長的原因可能是雞肉粉中賴氨酸和蛋氨酸含量較魚粉低，而賴氨酸和蛋氨酸對魚類生長、發育及代謝均有重要的作用。有研究發現，飼料中缺乏賴氨酸會造成負氮作用，降低蛋白質利用率，同樣蛋氨酸參與眾多機體代謝過程，也會影響魚類生長[17-18]。有研究證實，在雞肉粉完全替代魚粉的基礎上，添加適量必需氨基酸可提高北美鯧鲹(Trachinotuscarolinus)的生長性能[19]；其次，在養殖試驗過程中發現，高替代比例組的攝食積極性降低，可能是由于黃鱔主要靠嗅覺覓食[11]，雞肉粉的特殊氣味影響黃鱔的攝食積極性和攝食率，從而降低生長性能；另一方面，消化酶是機體內具有催化作用的活性物質，消化酶活性的增強可促進機體對營養物質的消化吸收。本試驗中，45%替代組的脂肪酶活性、淀粉酶活性和胰蛋白酶活性均最高，其他試驗組的脂肪酶活性均顯著低于魚粉組，表明雞肉粉適量替代魚粉可提高黃鱔對脂肪、淀粉物質和蛋白質的消化，進一步影響黃鱔的生長性能。

3.2 飼料級雞肉粉替代魚粉對黃鱔血清生化指標的影響

總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白均是反映機體脂肪代謝的重要指標，其中甘油三酯是魚類脂肪轉運主要成分[20-21]。高密度脂蛋白主要由肝臟合成，通過血液循環運載外周組織的膽固醇至肝臟，膽固醇在肝臟中被代謝清除，低密度脂蛋白則與之相反，被稱為“壞的膽固醇”[22]。本試驗結果顯示，隨著替代比例升高，血清甘油三酯含量呈上升趨勢，且替代比例超過45%時，甘油三酯含量顯著高于魚粉組，這與脂肪酶活性結果相吻合，表明適量雞肉粉可促進機體對脂肪的消化，但30%替代組和45%替代組的低密度脂蛋白均顯著上升，由此可知，雞肉粉替代魚粉會一定程度阻礙機體對脂肪的吸收利用。尿素是蛋白質代謝主要終產物，血液中尿素氮來源于肝臟，且通過腎臟隨尿液排出體外。白蛋白是血清中主要蛋白質成分，其主要功能是承載營養物質[23]。本試驗中，試驗組白蛋白含量均低于魚粉組，表明飼料級雞肉粉替代魚粉不利于蛋白質的合成與沉積，30%替代組和45%替代組的蛋白質分解代謝較強，60%替代組的蛋白質代謝水平低于魚粉組。

血清谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶是氨基酸代謝的兩個關鍵酶，常被用來反映氨基酸代謝的程度和指示肝臟功能狀況，其中谷丙轉氨酶是肝臟發生急性損傷后極為敏感的指標，當肝細胞受到損傷時，細胞膜通透性增大，大量谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶進入血液[24]。本試驗中，各替代組的谷丙轉氨酶活性均高于魚粉組，且15%替代組和30%替代組顯著高于魚粉組，但不能僅憑谷草轉氨酶的水平判斷是否患病和疾病的嚴重程度[25]。結合60%替代組的谷草轉氨酶顯著升高的檢測結果可知，60%替代組黃鱔肝臟可能有一定的損傷，而低替代組肝臟受損較輕或無損傷。補體是魚類抵抗微生物感染的重要成分，可介導免疫病理的損傷反應，是具有重要生物學作用的效應系統和效應放大系統[26]。本試驗中，當替代比例超過30%，血清補體3與補體4含量均顯著高于魚粉組，表明機體可能存在一定的損傷反應，從而刺激了黃鱔的免疫系統，結合谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶的變化趨勢可知，當替代比例超過30%時黃鱔肝臟受到一定損傷，其對肝臟的影響機制有待進一步探究。

4 結 論

綜上所述，在本試驗條件下，飼料級雞肉粉可替代飼料中30%的魚粉而不影響黃鱔的生長和生理功能。