物候期對放牧牦牛瘤胃液、牧草中脂肪酸及乳脂中共軛亞油酸組成的影響及其相關性分析

潘發明 ，常生華 ，王國棟 ，郝生燕 ，劉佳 ，張輝元 ，徐銀萍

（1. 甘肅省農業科學院畜草與綠色農業研究所，甘肅蘭州730070；2. 蘭州大學草地農業科技學院，甘肅蘭州730020；3. 甘肅省農業科學院農產品貯藏加工研究所，甘肅蘭州730070；4. 甘肅省農業科學院經濟作物與啤酒原料研究所，甘肅蘭州730070）

牦牛是以我國青藏高原為起源地的特有家畜，是世界屋脊上特有的景觀牛種，其也是唯一一種能在青藏高原高寒地區繁殖的牛亞科動物［1］，在藏族人民的衣食住行和燒（牛糞）、耕中起到至關重要的作用，因此牦牛是藏族人民心目中的“全能家畜”。牦牛乳是藏族人民最為重要的經濟收入支柱［2］，也是我國寶貴的畜產資源。

近年來人們發現食物中脂肪酸的種類及組成比例直接影響人類某些疾病的發生發展，而共軛亞油酸（conju?gated linoleic acid，CLA）作為一種新型功能型脂肪酸，其特殊的功效越來越受關注［3］。天然CLA 主要存在于反芻動物牛、羊等的脂肪及乳中，其中CLA 的兩種異構體cis9，trans11-CLA 與trans10，cis12-CLA 含量較高，并且具有重要的生理功能，如抗癌（結腸癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌等）、疾病預防（脈粥樣硬化、糖尿病、高血壓等）、保健、機體調節、減脂降重等［4-5］。

研究表明，牛乳中共軛亞油酸含量受到諸多因素影響，如牛品種對其乳中共軛亞油酸的含量有較大影響，飼喂相同牧草或飼料時，不同牛品種間乳中CLA 含量有著較大差異，這與其不同的生理差異有著密不可分的關系，其原因可能和不同品種牛乳中“trans-11”十八碳烯酸、Δ9-脂肪酸去飽和酶的活性有關［6-7］；自然放牧的反芻動物乳脂中CLA 含量隨季節的變化有顯著的差異，表現為夏季最高，冬季最低，這可能與牧草中營養成分的含量及種類有關［8］；瘤胃內環境、瘤胃pH 值、瘤胃氫化菌類型等也是影響牛乳中CLA 含量的重要因素［9-10］；某些離子載體通過抑制某些脂肪酸氫化菌的生長，抑制反式油酸的產量，使瘤胃中硬脂酸含量下降，單不飽和脂肪酸含量上升，由此CLA 含量提高；在動物采食方面，進食量、飼料中脂肪含量種類、日糧中纖維素水平及類型、飼糧中銅的含量、青綠牧草的比例以及飼喂方式都對乳中CLA 有一定的影響［11-12］；在分子遺傳和細胞學說方面，主要研究有關脂肪酸合成的酶對反芻動物體內CLA 生成的影響，如：脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）、乙酰輔酶A 羧化酶（acetyl CoA carboxylase，ACC）、硬脂酰基輔酶A 脫氫酶（stearyl CoA dehydrogenase，SCD）等，另外在基因的多態性及相關基因的表達量等方面有所研究［13］；單寧酸一直被認為是抗營養因子，近年來研究發現在飼料中加入一定量的單寧對反芻動物的乳或肉里共軛亞油酸有一定的積極效應［14］。

本研究通過對不同牧草物候期放牧牦牛瘤胃液、牧草中脂肪酸及乳脂中CLA 組成的測定，以期發現牧草生育期對放牧牦牛瘤胃液、牧草中脂肪酸及乳脂中CLA 組成的影響規律，并對應測定不同生育期牧草養分、單寧酸、牧草脂肪酸含量，以及瘤胃pH 值、發酵參數、揮發性脂肪酸（volatile fatty acid，VFA）含量、反式11-油酸（trans-11-oleic acid，TVA）含量，通過與乳中CLA 含量變化進行相關分析，探索影響放牧甘南牦牛乳中CLA 含量的營養因素，以期發現提高牦牛乳中CLA 含量的方法從而生產更高品質的功能性牦牛乳制品，為預防及治療某些現代常見疾病，提供綠色、有效的食療產品，牦牛乳產品開發以及牦牛枯草期補飼提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 研究區概況

本試驗以青藏高原高寒草甸作為研究對象，該草原屬于甘南州合作市（N 33°06′-35°32′，E 100°44′-104°45′）。位于甘南藏族自治州北部，氣候屬高寒濕潤類型，冷季長，暖季短，年均氣溫-0.5～3.5 ℃，極端最高氣溫28 ℃，極端最低氣溫-23 ℃。年均降水量545 mm，集中于7-9 月。地表徑流深200～350 mm，年蒸發量1222 mm。高寒草甸草地植物種類豐富，以矮生嵩草（Kobresia humilis）、草地早熟禾（Poa pratensis）、垂穗披堿草（Ely?mus nutans）和珠芽蓼（Polygonum viviparum）為優勢種牧草。

1.2 試驗設計

試驗于2018 年4 月開始從甘南州合作市周邊確定牦牛養殖戶，選擇10 頭體格健康、年齡相近（6～8 歲）、產犢胎次相近（3～4 胎次）、產犢時間相近（4 月底/5 月初產犢）、自然放牧的產犢甘南牦牛，試驗采用單因子隨機區組試驗設計原理，分別選擇高寒草甸草原3 個不同的牧草生育時期，包括牧草返青期（5 月）、盛草期（9 月）、枯黃期（12 月），將所選10 頭帶犢牦牛隨機編號后自然放牧，放牧時間為4-12 月，分別跟蹤采集返青階段（5 月）、盛草階段（9 月）、枯草階段（12 月）3 個時期的牦牛乳、瘤胃液，同時在放牧區域內采集相應時期的天然牧草，分別測定3個牧草時期甘南牦牛乳中CLA 含量，并對應測定不同時期牧草中常規營養物質、多不飽和脂肪酸（polyunsaturat?ed fatty acid，PUFAs）、單寧酸含量、瘤胃液中揮發性脂肪酸（VFA）、反式11-油酸（TVA）含量及瘤胃液pH，分析物候期對甘南牦牛乳中共軛亞油酸含量的影響，并進行相關分析探究影響甘南牦牛乳中CLA 含量的因素。

1.3 樣品采集

1.3.1 牧草樣品采集 分別在牧草返青期、盛草期、枯草期3 個時期，選取牦牛放牧植被均一的草地，在樣地對角線選取植被均一的地塊設置15 個1 m×1 m 的樣方，調查記錄每個樣方內植物物種數目，然后齊地面刈割每個樣方內所有植物種，分別分裝于已標號的信封袋，帶回實驗室并在65 ℃烘箱中烘干至恒重，將烘干至恒重的牧草用立體式粉碎機（FZ102，上海）粉碎，后過1 mm 網篩，用于牧草養分及單寧酸含量測定，3 個牧草生育時期牧草樣品分別設置15 個重復。

1.3.2 乳和瘤胃液樣品采集 將母牛與犢牛隔離一夜（防止哺乳），于次日早晨08：00，一并空腹采集牦牛乳和瘤胃液，乳樣使用50 mL 離心管進行收集；瘤胃液采集時將牦牛放倒綁定，使用胃管式瘤胃液采樣器每頭抽取50 mL 瘤胃液，將收集好的牦牛乳及瘤胃液置于準備好的冰盒中帶回實驗室待測，3 個牧草生育時期分別采集乳和瘤胃液樣品各10 份。

1.4 測定方法

1.4.1 牧草養分及單寧酸含量測定 干物質（dry matter，DM）含量采用干燥法測定、粗蛋白（crude protein，CP）含量采用全自動凱氏定氮儀（美國，Foss Kheltec 8400）測定、粗脂肪（ether extract，EE）含量采用傳統索氏抽提法測定、粗纖維（crude fibre，CF）含量采用全自動纖維分析儀（美國，ANKOM 2000 Fiber Analyzer）測定、粗灰分含量采用煅燒法測定、無氮浸出物含量=100%-（水分+粗蛋白+粗脂肪+粗纖維+粗灰分）、總鈣含量采用絡合滴定法測定、總磷含量采用國標分光光度法測定，單寧酸含量采用紫外分光光度計測定［14-15］。

1.4.2 牧草、乳和瘤胃中脂肪酸含量測定 牦牛乳中常規營養物質含量采用全自動乳成分分析儀（日本島津，UV-2550）測定、牦牛乳中CLA 先提取、甲酯化后用氣相色譜分析，采用歸一化法，乙酰氯—甲醇甲酯化法測定，牧草和瘤胃液中脂肪酸提取、甲酯化參考乳脂分析的方法［16］，采用pH 211 型精密pH 計測定瘤胃pH 值，采用氣相色譜儀（日本島津，GC-2010 Plus）測定揮發性脂肪酸（VFA）［17］。

1.5 數據處理

采用Excel 2010 進行數據整理與作圖，采用SPSS 19.0 統計軟件進行數據統計分析。對3 個牧草生育期牧草不同營養品質指標、脂肪酸組成、放牧牦牛乳品質指標和共軛亞油酸含量進行單因素方差分析，采用LSD 法進行多重比較（P＜0.05），數值采用“均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 物候期對牧草養分及單寧酸含量的影響

由表1 可知，物候期對牧草干物質、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、無氮浸出物、總鈣、總磷含量、鈣磷比和單寧酸含量均有顯著影響（P＜0.05）。返青期牧草鈣磷比顯著高于盛草期和枯草期（P＜0.05），枯草期牧草粗灰分含量較返青期降低了30.2%，枯草期牧草鈣磷比較盛草期增加了16.5%。盛草期牧草粗蛋白、粗脂肪和總磷含量顯著高于返青期和枯草期（P＜0.05），枯草期牧草粗蛋白、粗脂肪、總鈣、總磷和單寧酸含量較盛草期分別降低了66.5%、66.3%、42.9%、44.4%和60.8%。枯草期牧草干物質、粗纖維、無氮浸出物含量顯著高于返青期和盛草期（P＜0.05），枯草期牧草干物質和粗纖維含量較返青期分別增加了3.1%和30.8%，枯草期牧草無氮浸出物較盛草期增加了11.2%。

表1 物候期對牧草養分及單寧酸含量的影響Table 1 Effects of phenological period on forage nutritional value and tannic acid（Dry matter basis）

2.2 物候期對牧草多不飽和脂肪酸含量的影響

由表2 可知，物候期對牧草中月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、總脂肪酸、多不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸/總脂肪酸均有顯著影響（P＜0.05）。盛草期牧草中月桂酸、肉豆蔻酸、亞油酸、亞麻酸、總脂肪酸、多不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸/總脂肪酸均顯著高于返青期和枯草期（P＜0.05）。枯草期牧草中硬脂酸含量顯著高于返青期和盛草期（P＜0.05）。與盛草期相比，枯草期牧草中月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、亞油酸、亞麻酸、總脂肪酸和多不飽和脂肪酸分別降低了100%、100%、14.1%、34.7%、49.3%、30.2%和34.5%。與枯草期相比，返青期牧草中硬脂酸含量降低了39.0%。與盛草期相比，返青期牧草中多不飽和脂肪酸/總脂肪酸降低了9.8%。

2.3 物候期對放牧牦牛乳成分的影響

由表3 可知，牧草物候期對放牧牦牛乳中乳蛋白、乳脂率、全乳固體、非脂乳固體、乳糖、絡蛋白、游離脂肪酸、檸檬酸、密度、酸度含量均有顯著影響（P＜0.05），對乳中尿素和冰點沒有顯著影響（P＞0.05）。與返青期相比，枯草期放牧牦牛乳中乳蛋白、非脂乳固體、乳糖、絡蛋白、游離脂肪酸和密度分別降低了28.4%、17.3%、24.1%、19.0%、56.4%和0.6%。與盛草期相比，枯草期放牧牦牛乳中乳脂率、全乳固體和酸度分別降低了36.1%、20.4%和23.6%，乳中檸檬酸含量增加了77.3%。

表3 物候期對放牧牦牛乳成分的影響Table 3 Effects of forage phenological period on composition of grazing yak

2.4 物候期對放牧牦牛乳中CLA 含量的影響

由表4 可知，牧草物候期對放牧牦牛乳中共軛亞油酸異構體c9t11、共軛亞油酸異構體t10c12 和共軛亞油酸總含量均有顯著影響（P＜0.05）。盛草期放牧牦牛乳中共軛亞油酸異構體c9t11、共軛亞油酸異構體t10c12 和共軛亞油酸總含量顯著高于返青期和枯草期（P＜0.05）。與盛草期相比，枯草期放牧牦牛乳中共軛亞油酸異構體c9t11、共軛亞油酸異構體t10c12 和共軛亞油酸總含量分別下降了67.6%、64.7%和66.7%，且均在枯草期含量最低。

表4 物候期對放牧牦牛乳中CLA 含量的影響Table 4 Effects of forage phenological period on conjugated linoleic acid content of grazing yak（mg·mL-1）

2.5 物候期對放牧牦牛瘤胃發酵參數的影響

由表5 可知，物候期顯著影響了牦牛瘤胃pH 值、乙酸、丙酸、乙酸/丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸、總揮發性脂肪酸和反式11-油酸（P＜0.05）。牧草返青期牦牛瘤胃pH 值、異丁酸和戊酸含量顯著高于枯草期（P＜0.05），牧草盛草期牦牛瘤胃異丁酸和戊酸含量顯著高于枯草期（P＜0.05），牧草盛草期牦牛瘤胃乙酸、丙酸、丁酸和總揮發性脂肪酸含量顯著高于返青期和枯草期（P＜0.05），牧草返青期丁酸、戊酸和反式11-油酸含量顯著高于枯草期（P＜0.05）；牧草枯草期乙酸/丙酸顯著高于返青期和盛草期（P＜0.05），牧草返青期顯著高于盛草期（P＜0.05）。

表5 物候期對放牧牦牛瘤胃發酵參數的影響Table 5 Effects of forage phenological period on rumen fermentation parameters of grazing yak

2.6 瘤胃液、牧草中脂肪酸與乳脂中共軛亞油酸組成的相關性分析

由表6 可知，牧草粗蛋白、粗脂肪、無氮浸出物、單寧酸、總脂肪酸和瘤胃液pH 值與放牧牦牛乳中CLA 含量顯著正相關（P＜0.05），牧草粗纖維和粗灰分與放牧牦牛乳中CLA 含量顯著負相關（P＜0.05），牧草中PUFAs和瘤胃TVFA 與放牧牦牛乳中CLA 含量無顯著相關關系（P＞0.05）。

3 討論

3.1 物候期對牧草養分和多不飽和脂肪酸含量的影響

牧草粗蛋白、粗纖維、粗灰分、粗脂肪、鈣、磷含量以及鈣磷含量比是影響牧草營養價值的主要因素［18］。本研究表明，物候期對牧草養分含量有顯著影響，盛草期牧草營養價值高于返青期和枯草期，枯草期牧草無氮浸出物含量顯著高于返青期和盛草期，粗纖維含量顯著高于返青期與盛草期。趙禹臣等［19］研究發現，青藏高原暖季牧草營養物質含量遠高于冷季，其中暖季粗蛋白與粗灰分含量顯著高于冷季，而冷季粗纖維含量顯著高于暖季；趙玉宇等［20］通過對青藏高原不同牧草營養價值評測發現，粗蛋白與粗纖維呈極顯著負相關；趙禹臣等［19］通過對西藏那曲地區牧草營養價值研究發現，牧草營養物質含量會隨季節變化而變化，夏季牧草營養物質品質最好，能滿足當地放牧家畜的營養需要，冬春季牧草品質最低，粗蛋白等嚴重缺乏，本研究結果與此一致。研究表明，牧草中粗蛋白含量高低主要取決于氣候條件，空氣濕度系數下降，氣候干燥系數上升時，牧草中粗蛋白含量會顯著上升［21］，甘南地區夏季降水較多、光照足、氣溫較高，而冬季溫度低、日照量不足，這與牧草中粗蛋白含量低有密切關系。當酸性洗滌纖維過高時（≥30%），會影響粗蛋白消化，冬季的粗纖維含量高嚴重影響了牧草的營養價值及適口性［22］。研究表明，Ca、P 含量及鈣磷比對家畜等的生長發育和代謝具有重要意義［23］，本研究發現鈣磷含量、粗蛋白等常規營養物質隨牧草生育期的變化有一定的規律，盛草期牧草品質優于返青期與枯草期，返青期牧草品質又高于枯草期。單寧含量隨季節變化的研究較少，單寧作為抗營養因子，通過近年來的研究發現，適量的單寧對反芻動物體內CLA 的沉積具有積極作用。本研究結果表明，返青期和盛草期牧草中單寧含量顯著高于枯草期，返青期與盛草期單寧含量無顯著差異，本試驗結果與此一致，曹弦［24］對巴山木竹（Bashania fargesii）中單寧酸含量研究發現，海拔不同單寧酸含量不同，相同海拔山竹單寧酸含量表現出一定的季節性，從2 月返春到7、8 月盛夏其含量呈上升趨勢，且7、8 月最高，2 月最低；Zhang 等［25］對福建東山縣赤山林場的木麻黃（Cacuanna equisetifdia）單寧含量測定發現，夏季幼枝以及成熟小枝中單寧含量顯著高于冬季。

表6 牧草脂肪酸組成及放牧牦牛瘤胃中CLA 含量與乳中CLA 含量的相關性分析Table 6 Correlation analysis of fatty acid composition in for?age and CLA content in rumen and milk of grazing yaks

牧草中脂肪酸組成及含量受到季節、地域、天氣及降水多少的影響，其中多不飽和脂肪酸是反芻動物合成CLA 最重要的前體物質之一，牧草中PUFAs 含量越高，會促進CLA 的合成，提高反芻動物體內CLA 的沉積，其中亞油酸是反芻動物瘤胃合成CLA 的前體物之一。馮德慶等［26］對28 種牧草中所含脂肪酸分析結果表明，不同種類牧草之間各脂肪酸含量具有一定差異，其中含量最高的為亞麻酸，其次為棕櫚酸和亞油酸，其他脂肪酸種類含量較低，說明不同地域由于氣候原因，牧草種類及牧草的生長情況具有一定差異，造成牧草中各脂肪酸含量有所不同。本試驗結果為返青期（5 月）PUFAs 占總脂肪酸的55%左右，盛草期（9 月）為61.0%左右。伏映萍等［27］通過研究寧夏鹽池天然混合牧草脂肪酸組成發現，5 月混合牧草中多不飽和脂肪酸占總脂肪酸含量的36%～57%，10 月PUFAs 占總脂肪酸含量的46%～61%。本試驗研究結果與此一致，從牧草返青期到盛草期牧草中多不飽和脂肪酸占總脂肪酸含量呈上升趨勢。王玉鵬等［28］對天祝地區牧草脂肪酸測定發現，夏秋兩季PUFAs 普遍高于冬春兩季，且秋季高于夏季，本試驗結果與此一致，可能是甘肅天祝與甘南均地處青藏高原，具有相似的海拔和氣候環境，牧草種類及生長周期也較為相似。

3.2 物候期對放牧牦牛乳成分和乳中CLA 含量的影響

CLA 屬于功能性脂肪酸的一種，其特殊的功效已成為近年來熱門的研究對象［29］。反芻動物體內的CLA 來源主要有兩種，一種由瘤胃內的亞油酸生物氫化生成，一種由食物中PUFAs 經氫化形成中間產物（TVA）轉化而成［30］。研究表明［28］，CLA 表現出明顯的季節差異，有研究發現夏秋季放牧牦牛乳中CLA 的含量顯著高于冬春季節，本試驗研究結果基本與此一致（盛草期CLA 含量顯著高于返青期與枯草期，返青期CLA 含量顯著高于枯草期），可能是因為夏秋盛草期牧草營養品質好，并且牧草在這個生長階段各種營養物質最為豐富，牦牛在放牧采食過程中可以攝取更多營養。研究表明［31］，脂肪酸中CLA 含量隨季節變化的波動最大，盛草期最高，冬春枯草期含量最低，研究發現夏季盛草期時Δ9-脂肪酸去飽和酶的活性較高，說明盛草期牧草可以提高泌乳母牛乳腺中Δ9-脂肪酸去飽和酶的活性，本試驗研究結果與此一致。薛秀恒等［32］研究表明，造成牛乳中CLA 含量差異的根本原因在于采食青綠新鮮牧草的量及牧草品質，大量研究也表明日糧對乳中CLA 含量起到本質的作用，更進一步支持了本研究盛草期放牧牦牛乳中共軛亞油酸異構體c9t11、共軛亞油酸異構體t10c12 和共軛亞油酸總含量顯著高于返青期和枯草期的結論。

3.3 物候期對放牧牦牛瘤胃中揮發性脂肪酸及CLA 含量的影響

已有研究表明［33］，影響瘤胃pH 值的因素很多，如采食日糧組成及日糧采食量都會影響其數值。本研究結果表明，返青期與盛草期牦牛瘤胃液pH 值顯著高于枯草期，這可能與牧草中營養物質的變化以及采食量有關，其導致瘤胃中總揮發性脂肪酸的含量發生變化，從而使瘤胃pH 值發生改變。放牧牦牛瘤胃液中VFA 隨季節動態變化的研究較少，本試驗通過對返青期、盛草期及枯草期3 個牧草生育時期泌乳牦牛瘤胃液VFA 含量測定，結果表明，盛草期乙酸含量最高且顯著高于返青期和枯黃期；丙酸、丁酸、戊酸、總揮發性脂肪酸和反式11-油酸含量具有相同的變化趨勢，盛草期含量最高，且顯著高于返青期和枯黃期。這可能是由于不同季節氣候環境不同導致的牧草中營養物含量不同及牦牛采食量不同，使其瘤胃內環境發生改變，導致其含量發生顯著改變。已有研究表明，青綠飼草料發酵后乙酸含量比例可到70%以上［34］，本研究結果基本與此一致。張瑩等［35］利用氣相色譜法測定青藏高原牦牛、犏牛和黃牛在暖季與冷季的VFA 含量，發現牦牛、犏牛和黃牛瘤胃液中總VFA 含量在暖季與冷季之間均存在顯著差異，乙酸與丙酸比值介于3.9～5.0，均屬于乙酸型發酵，本研究結論甘南放牧牦牛瘤胃液中總VFA 含量暖季顯著高于冷季和牧草返青期與盛草期瘤胃發酵屬于乙酸型發酵與此一致。TVA 是反芻動物乳脂中生物氫化的重要中間產物，近年來研究發現乳脂中TVA 含量與反芻動物體內CLA 含量具有顯著相關性，TVA 在反芻動物體內通過一定作用生成CLA。本研究結果表明，隨牧草生育時期的變化，返青期和盛草期牧草中亞油酸含量和TVA 含量均顯著高于枯草期。研究表明，提高飼料中亞油酸的含量會提高奶牛與肉牛瘤胃液中TVA 含量［36-37］，楊俊花［38］的研究也發現，大豆油中富含亞油酸，在飼料中加入2.0%的大豆油可以顯著提高瘤胃液中脂肪酸和TVA 含量，本試驗結果與此相符。

3.4 放牧牦牛瘤胃液、牧草中脂肪酸與乳脂中CLA 組成的相關關系

單寧一直被認為是抗營養因子，近年來研究發現在反芻動物日糧中添加適量的單寧酸會提高其體內CLA 含量。本研究結果表明，牧草中單寧含量與牦牛乳中CLA 含量的變化呈一定相關性，本研究結論與此一致。Kelly等［39］的研究表明，單寧對瘤胃脂肪酸氫化菌有較強的抑制作用，綿羊采食富含單寧的冠狀巖黃芪（Hedysarum coronarium）牧草，其肌內脂肪中亞麻酸比對照組提高4 倍，長鏈脂肪酸中二十二碳五烯酸含量也升高。Valentina等［40］對羔羊日糧添加45%亞麻籽粉（富含單寧），發現羔羊肌肉脂肪酸中CLA 與反11-十八碳酸烯比值顯著提高，其肌肉中Δ9-脂肪酸去飽和酶表達量也有隨之提高的趨勢。

據Wahle 等［41］研究報道，TVA 在反芻動物體內通過Δ9-脂肪酸去飽和酶作用生成CLA，是瘤胃合成CLA 的前體物。本研究結果表明，隨牧草時期的變化，牦牛瘤胃液中TVA 與其乳中CLA 含量呈線性相關，且其具有相似的變化趨勢，均為盛草期顯著高于返青期與枯草期，返青期又顯著高于枯草期，本試驗結果與此一致。卜登攀［42］在奶牛的研究中也發現奶牛瘤胃中TVA 與其乳中CLA 含量呈線性相關。

據Valentina 等［40］研究報道，日糧纖維不足導致瘤胃pH 下降，會影響CLA 瘤胃前體物TVA 的形成，從而影響乳中CLA 的含量，本研究從牧草返青期到枯黃期，牧草粗纖維水平呈逐漸上升趨勢，與乳中CLA 的含量變化無相關性，可能是因為枯草期牧草中粗纖維含量太高，使牧草適口性下降，品質降低等導致。本研究結果表明，枯草期瘤胃液pH 值低于6.0，顯著低于返青期與盛草期，盛草期與返青期無顯著差異，瘤胃液pH 與乳中CLA 含量具有一定的相關性，本研究結果與此一致。Lin 等［43］研究發現，pH 在5.5～8.5 時，亞油酸異構酶具有轉化合成CLA 的活性，瘤胃pH 值降低會抑制纖維分解菌活性，從而降低PUFAs 的氫化作用，使瘤胃TVA 含量降低，導致乳中 CLA 含量下降。Martin［44］研究表明，當瘤胃 pH 值低于 6.0 時，乳中 CLA 含量顯著降低，當 pH 升高時，CLA含量隨之升高。

4 結論

1）盛草期牧草粗蛋白、粗脂肪、總鈣、總磷、單寧酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、總脂肪酸、多不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸/總脂肪酸顯著高于返青期和枯草期。

2）盛草期放牧牦牛乳中乳蛋白、非脂乳固體、乳糖、絡蛋白、游離脂肪酸、密度、乳中共軛亞油酸異構體c9t11、共軛亞油酸異構體t10c12 和共軛亞油酸總含量顯著高于返青期和枯草期。

3）盛草期牦牛瘤胃乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、總揮發性脂肪酸和反式11-油酸含量顯著高于返青期和枯草期。

4）牧草粗蛋白、粗脂肪、無氮浸出物、單寧酸、總脂肪酸和瘤胃液pH 值與放牧牦牛乳中CLA 含量顯著正相關，粗纖維和粗灰分與放牧牦牛乳中CLA 含量顯著負相關，PUFAs 和瘤胃TVFA 與放牧牦牛乳中CLA 含量無顯著相關關系。