急性心肌梗死患者血漿MEG3及UCA1表達水平與冠狀動脈病變的相關性*

王琴， 江希， 王引利

(成都市第三人民醫院 心內科， 四川 成都 610000)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)是臨床常見急危重癥，好發于中老年人群，預后較差，我國AMI的死亡率為0.8%～1.4%[1]。準確評估冠狀動脈(簡稱冠脈)病變，對AMI的診療非常重要，冠狀動脈造影(coronary angiography,CAG)是診斷冠脈病變的金標準，但也是一種有創性的檢查，其應用受到一定的限制。利用血漿學指標輔助評估冠脈病變情況已經成為近年學術界的研究熱點，血漿學檢測具有簡單易行等優點，但目前常用的C-反應蛋白、同型半胱氨酸等血漿標記物易受炎癥反應、脂代謝障礙等因素影響，在AMI診療中應用價值并不理想[2]。長鏈非編碼核糖核酸(long-chain non-coding ribonucleic acid, lncRNA)是一種無編碼蛋白質功能的長度>200 nt的RNA，可介導心血管疾病的發生發展，人類母系表達基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)、尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma antigen 1,UCA1)為目前研究較多的lncRNA，也被部分學者認為是AMI診斷的新型標記物[3-4]。目前，臨床主要研究集中于lncRNA表達水平與AMI冠脈病變嚴重程度的關系，常常忽略AMI住院期間心血管事件發生情況與lncRNA表達水平的關系研究。本研究以208例AMI患者作為研究對象，并于入院2 h時檢測血漿MEG3、UCA1表達水平及肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白I(cTnI)的含量，采用Spearman秩相關及Pearson相關分析冠脈病變與AMI患者血漿MEG3、UCA1基因及CK-MB、cTnI表達水平的相關性，AMI患者住院期間心血管事件與血漿MEG3、UCA1的相關性，為AMI的診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1一般臨床資料 選取2019年1—12月收治的208例AMI患者作為研究對象，男性131例、女性77例，年齡44～76歲、平均(59.87±9.31)歲。納入標準：(1)符合中華醫學會心血管病學分會制定的AMI診斷標準[5](缺血性胸痛病史、心電圖動態演變、心肌壞死血漿心肌標記物肌紅蛋白、肌鈣蛋白等的動態改變，3條中2條具備即可確診)；(2)發病至入院時間≤12 h；(3)年齡>18歲；(4)簽署知情同意書。排除標準：(1)既往心肌梗死病史；(2)合并痛風、急性腦血管疾病、自身免疫性疾病；(3)伴嚴重肝腎疾病；(4)入院前6個月內肝炎病史；(5)入院前1周內使用他汀類藥物治療。本研究符合赫爾辛基宣言。

1.1.2分組 AMI患者在入院后，以右側橈動脈或股動脈Judkins法行CAG，選擇不同投照體位，記錄冠狀動脈狹窄情況，以冠脈管腔直徑狹窄≥50%判斷為狹窄；并利用Gensini評分[6]評估冠脈病變程度，Gensini評分根據病變血管部位及狹窄程度加權評分，<30分49例、納入低分組，30～60分83例、納入中分組，>60分76例、納入高分組。

1.2 觀察指標

比較低分組、中分組及高分組AMI患者入院2 h時的血漿MEG3、UCA1基因表達水平及CK-MB、cTnI含量，采用Pearson法分析血漿MEG3、UCA1基因表達與Gensini評分、CK-MB及cTnI水平的相關性，比較住院期間發生心血管事件(心律失常、心力衰竭、心絞痛及心血管事件)患者與未發生心血管事件患者的血漿MEG3及UCA1基因表達水平，采用Spearman秩相關分析AMI患者住院期間心血管事件與血漿MEG3、UCA1基因表達的相關性。3組患者入院2 h內抽取外周靜脈血，分離血漿后加入Trizol試劑混勻，靜置5 min，加入氯仿混勻，靜置10 min；離心留取上清液，加入等體積異丙醇勻混，靜置3 min，離心后倒出管內液體，加入乙醇，離心后倒出乙醇，吸走剩余液體，晾干；管中加入RNase-free ddH2O，溶解RNA，用分光光度計測定總RNA濃度及純度。提取總RNA后，利用聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR)技術行逆轉錄，取適量cDNA為模板，引物濃度0.4 μmol/L，15 μL體系擴增，根據目標基因設計合成相應上下游引物進行PCR擴增，以熒光定量PCR熒光信號達到設定閾值時的Ct值為樣本表達量，各樣本均重復循環3次，MEG3、UCA1相對表達量以2-ΔΔCt表示；采用免疫化學發光法(試劑盒由德國羅氏公司生產)檢測血漿肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme, CK-MB)及肌鈣蛋白I(troponin I, cTnI)水平。采用生化分析儀測定血漿CK-MB及cTnI水平。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 一般資料

3組AMI患者性別、年齡、左心室射血分數、脂代謝紊亂情況及高血壓史、糖尿病史、吸煙史等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組AMI患者一般資料Tab.1 Comparison of baseline data among AMI patients with different Gensini scores

2.2 血漿MEG3、UCA1基因表達水平及CK-MB、cTnI含量

結果顯示，3組AMI患者血漿MEG3基因表達水平及CK-MB、 cTnI含量比較，低分組<中分組<高分組，差異有統計學意義(P<0.001)；3組血漿UCA1基因表達水平比較，低分組>中分組>高分組，差異有統計學意義(P<0.001)。見表2。

表2 各組AMI患者血漿MEG3、UCA1基因表達水平及CK-MB、cTnI含量Tab.2 Comparison of levels of serum MEG3, UCA1,and CK-MB, cTnI in each group

2.3 血漿MEG3、UCA1基因表達與Gensini評分、CK-MB及cTnI含量的相關性

Pearson相關分析結果顯示，AMI患者血漿MEG3與Gensini評分、CK-MB及cTnI表達水平呈正相關(r=0.411、0.329、0.342，P<0.05)，血漿UCA1表達水平則與Gensini評分、CK-MB、cTnI表達水平均呈負相關(r=-0.389、0.307、0.318，P<0.05)。見表3。

表3 AMI患者血漿MEG3、UCA1基因表達與Gensini評分、CK-MB及cTnI含量的相關性Tab.3 Correlation between serum MEG3, UCA1, and Gensini scores, CK-MB, and cTnI among AMI patients

2.4 住院期間發生心血管事件與未發生患者血漿MEG3及UCA1基因表達水平

結果顯示，AMI患者中發生心血管事件患者血漿MEG3基因表達水平高于未發生患者、血漿UCA1基因表達水平低于未發生患者，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 住院期間發生心血管事件與未發生患者血漿MEG3及UCA1基因表達水平Tab.4 Comparison of serum MEG3 and UCA1 between AMI patients with and without cardiovascular events during hospitalization

2.5 住院期間心血管事件與血漿MEG3、UCA1基因表達的相關性

Spearman秩相關結果顯示，AMI患者心律失常、心力衰竭、心絞痛心血管事件的發生與血漿MEG3基因表達呈正相關(r=0.315、0.339、0.378、0.422，P<0.05)，與血漿UCA1基因表達呈負相關(r=-0.419、0.428、-0.405、-0.483，P<0.05)。見表5。

3 討論

本研究發現，患者入院2 h時檢測血漿MEG3、UCA1基因表達水平對AMI診斷均具有較高的價值。也初步證實了MEG3、UCA1基因可能參與AMI的發生發展，其血漿含量能輔助診斷AMI。為更深入探討MEG3、UCA1表達基因與AMI的關系，本研究亦就血漿MEG3、UCA1表達基因與AMI冠脈病變的相關性展開研究，以評估lncRNA在AMI診療中的應用價值。

心電圖、心肌酶譜檢查均為臨床輔助診斷AMI的常用手段，傳統心肌酶譜包括CK-MB、cTnI等[7]。但在AMI發病早期(發病3 h內)患者血漿含量無明顯變化，在AMI發病3 h后逐漸升高，于發病6～8 h時呈明顯升高，12h時達峰值。故心電圖、心肌酶對早期AMI診斷價值不高[8]。因此，探尋早期AMI的敏感性血漿標記物十分必要。近年來，lncRNA已經成為學術的研究熱點，在機體外周血中存在豐富且穩定表達的lncRNA，lncRNA在表觀遺傳調控、轉錄調控及轉錄后調控等過程中均能發揮重要作用，是一種理想的基于血液的疾病監測指標及治療新靶點[9-10]。

MEG3為人正常組織中的腫瘤抑制因子，不僅能參與內皮細胞增殖、血管形成過程，還能刺激心肌細胞損傷、促進心臟纖維化，介導心臟重構及細胞凋亡過程[11-12]。3組血漿MEG3基因表達水平比較，低分組<中分組<高分組(P<0.05)。提示冠脈狹窄病變嚴重的患者，血漿MEG3表達水平越高，這可能與MEG3具有刺激心肌細胞損傷及促進心臟纖維化作用，在冠脈狹窄嚴重時，參與心臟重構過程而大量表達有關[13-14]。本研究發現，血漿MEG3基因表達水平不僅與CK-MB、cTnI水平呈正相關，也與Gensini評分呈正相關(P<0.05)。究其原因可能與MEG3能參與心肌損傷過程，在AMI發病早期即可大量表達，并隨狹窄、缺血缺氧的嚴重程度的升高表達增加有關[15-16]。因此，MEG3在評估早期AMI冠脈狹窄情況中，具有重要作用。有文獻報道，UCA1是最初在膀胱移行細胞癌中發現的lncRNA，也是膀胱癌潛在的生物標記物，具有心臟供能及心功能保護作用，可作為AMI新型標記物[17-18]。本研究也發現，血漿UCA1基因表達水平與CK-MB、cTnI水平呈負相關，且與Gensini評分呈負相關(P<0.05)。該結果與隨著冠脈狹窄嚴重程度的增加，參與心臟供能過程的UCA1增多，使UCA1大量消耗，導致血漿表達量下降有關[19-20]。

此外，AMI發病后，心肌血供急劇減少，甚至中斷，可導致大面積心肌壞死，而易引起心力衰竭、猝死等心血管事件，嚴重影響預后。因此，患者住院期間的心血管事件也是臨床關注的重點之一[21-22]。本研究發現，AMI患者心律失常、心力衰竭、心絞痛等心血管事件的發生與血漿MEG3基因表達呈正相關，與血漿UCA1基因表達呈負相關(P<0.05)。提示，血漿MEG3、UCA1基因表達水平與AMI患者住院期間心血管事件的發生存在一定聯系，對評估患者預后有積極意義[23-24]。還有學者提出，血漿MEG3基因等標記物與AMI患者短期預后也有一定相關性[25]。然而，本研究缺乏對AMI患者的隨訪觀察，未對血漿MEG3、UCA1基因表達水平與患者近遠期預后情況作進一步分析，也是本研究存在的缺陷。因此，為探析血漿MEG3、UCA1基因表達與AMI預后的關系，還需后續延長隨訪時間的深入研究。

綜上所述，血漿MEG3、UCA1基因表達水平與AMI患者冠脈病變嚴重程度及住院期間心血管事件發生情況具有相關性，有望成為評估AMI病情進展的新指標。